中国药物与临床２０１１年８月第１１卷第８期Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｒｅｍｅｄｉｅｓ＆Ｃｌｉｎｉｃｓ．Ａｕｇｕｓｔ ２０１１，Ｖｏ１．１１，Ｎｏ．８ ・８８３・ 白术挥发油中极性和非极性成分的 －－＿ Ｌ＿Ｉ Ｅｊ 同 效液相色谱法特征图谱研究 朱秀卿阎克里赵丽 【摘要】 目的建立挥发油中极性和非极性成分的高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）特征图谱分析方法，分析比 较４个产地挥发油中极性和非极性成分特征图谱中特征成分及其相对含量异同点。方法采用Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＯＤＳ２ （４．６ ｍｍｘ２５０ ｍｍ，５ ｍ）色谱柱：流动相乙腈（Ａ）一水（Ｂ）６０：４０，梯度洗脱［０—３０ ｍｉｎ，４０％Ｂ－＊１０％Ｂ；３０—４０ ｍｉｎ， １０％Ｂ－－ｑ０％Ｂ］：流速为１．０ ｍＬ／ｍｉｎ，柱温３Ｏ℃；非极性成分特征图谱检测波长２５５ ｎｍ，极性成分特征图谱检测波 长２０５ ａｍ。结果挥发油中极性和非极性成分的ＨＰＬＣ特征图谱分析方法考察结果良好。４个产地挥发油中极性 和非极性成分特征图谱与共有模式之间相似度Ｉ＞０．９９６。４个产地挥发油中极性和非极性成分特征图谱及共有模 式之间特征峰的相对保留时间相对标准偏差（ＲＳＤ）≤０．８９％，相对峰面积ＲＳＤ为２１％一７９％。４个产地挥发油中极 性和非极性成分特征图谱中特征峰的峰面积占总峰面积为９７．６５％一９８．３０％。浙江、安徽、湖南产地挥发油中极性 和非极性成分特征图谱及共有模式之间特征峰的相对保留时间ＲＳＤ≤２．１９％，相对峰面积ＲＳＤ≤２．３９％；与河北 的进行比较，相对保留时间ＲＳＤ≤１．６８％。相对峰面积ＲＳＤ５．６９ ６８％。结论本研究建立挥发油中极性和非极性 成分的ＨＰＬＣ特征图谱分析方法简单、稳定可靠。４个产地挥发油中极性和非极性成分的特征图谱的整体相似度 较高，特征成分的种类相近，但其含量差异明显。浙江、安徽、湖南产地白术挥发油中极性和非极性成分的特征图 谱中的特征成分的种类及其相对含量相近；河北的与之相比，特征峰的种类相近，但含量有较大差异。 【关键词】 白术；图谱；色谱法，高压液相 ＨＰＬＣ ｓｐｅｃｉｉｆｃ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ ｏｆ ｐｏｌａｒｉｔｙ ａｎｄ ｎｏｎｐｏｌａｒｉｔｙ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｉｎ Ｓｈｉｚｏｍａ Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｉｓ Ｍａｃｒｏｃｅｐｈａ－ ｌａｅ ｖｏｌａｔｉｌｅ ０强ｚＨＵ Ｘｉｕ—ｑ ，ＹＡＮ Ｋｅ—ｈ，ＺＨＡＯ Ｌｉ．＊Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ ＴＣＭ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ，Ｓｈａｎｘｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｔｕｍｏｒ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｔａｉｙｕａｎ ０３Ｏ０１３．Ｃｈｉｎａ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ｔｈｅ ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ＨＰＬＣ ｓｐｅｃｉｉｆｃ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ ｏｆ ｐｏｌａｒｉｔｙ ａｎｄ ｎｏｎｐｏｌａｒｉｔｙ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｉｎ Ｒｈｉｚｏｍａ Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｉｓ Ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌａｅ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｏｉｌ，ａｎｄ ｔｏ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ａｎｄ ｃｏｍｐａｒｅ ｔｈｅ ｃｈａｒ－ ａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｐｏｌａｒｉｔｙ ａｎｄ ｎｏｎｐｏｌａｒｉｔｙ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ｓｐｅｃｉｉｆｃ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ ｏｆ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｏｉｌ ｆｒｏｍ ｆｏＤｒ ｄｉｆｉｅｒ－ ｅｎｔ ｏｒｉｇｉｎｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｗａｓ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＯＤＳ２ ｆ４．６ ｎｍｘ２５０ ｍｍ，５ ｍ）ｃｏｌｕｍｎ；ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ （Ａ）一ｗａｔｅｒ（Ｂ）６０：４０，ｇｒａｄｉｅｎｔ ｅｌｕｔｉｏｎ［０－３０ ｍｉｎ，４０％Ｂ—＋１Ｏ％Ｂ；３０￣４０ ｍｉｎ，１０％Ｂ－－ｑ０％Ｂ］；ｆｌｏｗ ｒａｔｅ １．０ ｍＬ／ｍｉｎ， ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ３０℃．Ｔｈｅ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ２５５ ｎｍ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｎｏｎｐｏｌａｒｉｔｙ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ．ａｎｄ ２０５ ｎｍ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃ． ｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｌａｒｉｔｙ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ． Ｒｅｓｕｌｓｔ Ｔｈｅ ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ＨＰＬＣ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ ｏｆ ｐｏｌａｒｉｔｙ ａｎｄ ｎｏｎｐｏ－ １ａｒｉｔｙ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｉｎ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｏｉｌ ｗｏｒｋｅｄ ｆａｖｏｒａｂｌｙ．Ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ｐｏｌａｒｉｔｙ ａｎｄ ｎｏｎｐｏｌａｒｉｔｙ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｆｒｏｍ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｏｉｌｓ ｆｏｒ ｆｏｕｒ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｏｒｉｇｉｎｓ．ｔｈｅ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｂｅｔｗｅｅｎ ｓｐｅｃｉｉｆｃ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ ａｎｄ ｃｏｍｍｏｎ ｍｏｄｕｌｅｓ ｗｅｒｅ≥０．９９６．ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｏｆ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｐｅａｋ ＲＳＤ ｗａｓ≤０．８９％ａｎｄ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｐｅａｋ ａｒｅａ ＲＳＤ ｒａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ ２１％ｔｏ ７９％．Ｉｎ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ．ｔｈｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｐｅａｋ ａｒｅａ ａｃｃｏｕｎｔｅｄ ｆｏｒ ９７．６５％一９８．３０％ｏｆ ｈｔｅ ｔｏｔａｌ ｐｅａｋ ａｒｅａ．Ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｏｆ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｐｅａｋ ＲＳＤ ｗａｓ≤２．１９％ａｎｄ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｐｅａｋ ａｒｅａ ＲＳＤ≤２．３９％ｂｅｔｗｅｅｎ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ ａｎｄ ｃｏｍｍｏｎ ｍｏｄｕｌｅｓ ｉｎ ｐｏｌａｒｉｔｙ ａｎｄ ｎｏｎｐｏｌａｒｉｔｙ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｏｆ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｏｉｌ ｆｒｏｍ Ｚｈｅｊｉａｎｇ．Ａｎｈｕｉ ａｎｄ Ｈｕ ｎａｎ．Ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ＲＳＤ ｗａｓ≤１．６８％ａｎｄ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｐｅａｋ ａｒｅａ ＲＳＤ ｒａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ ５．６％ｔｏ ６８％ａｓ ｃｏｍ． ｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｆｒｏｍ Ｈｅｂｅｉ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ＨＰＬＣ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｃｈｒｏ． ｍａｔｏｇｒａｍｓ ｏｆ ｐｏｌａｒｉｔｙ ａｎｄ ｎｏｎｐｏｌａｒｉｔｙ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｉｎ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｏｉｌ ｗｅｒｅ ｓｉｍｐｌｅ．ｓｔａｂｌｅ ａｎｄ ｒｅｌｉａｂｌｅ．，Ｉ１１ｅ ｓｐｅｃｉｉｆｃ ｅｈｒｏ－ ｍａｔｏｇｒａｍｓ ｏｆ ｐｏｌａｒｉｔｙ ａｎｄ ｎｏｎｐｏｌａｒｉｔｙ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｉｎ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｏｉｌ ｆｒｏｍ ｆｏｕｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｏｒｉｇｉｎｓ ｈａｄ ａ ｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ ｈｉｇｈ ｏｖｅｒａｌｌ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ．Ａｌｈｔｏｕｇｈ ｔｈｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｓｉｍｉｌａｒ ｏｎ ｓｐｅｃｉｉｆｃ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ，ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｃｏｍｐｏ． ｎｅｎｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ．Ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｉｆｃ ｅｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ ｏｆ ｐｏｌａｒｉｔｙ ａｎｄ ｎｏｎｐｏｌａｒｉｔｙ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｉｎ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｏｉｌ ｆｒｏｍ Ｚｈｅｊｉａｎｇ，Ａｎｈｕｉ ａｎｄ Ｈｕ ｎａｎ ｈａｄ ｓｉｍｉｌａｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ａｎｄ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ．Ｉｎ ｃｏｎｔｒａｓｔ，ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｆｒｏｍ Ｈｅｂｅｉ ｓｈｏｗｅｄ ｓｉｍｉｌａｒ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｂｕｔ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｔｅｎｔｓ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｍａｅｒｏｃｅｐｈａｌａｅ；Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｉｌｌｕｓｔｒａｔｉｏｎ；Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ｈｉｇｈ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｌｉｑｕｉｄ 基金项目：山西省卫生厅科技攻关项目（２００８３３） 作者单位：０３００１３太原，山西省肿瘤医院中药制剂室（朱秀卿），检测室（阎克里、赵丽） 通信作者：阎克里．Ｅｍａｉｌ：ｓｘｙａｎｋｅｌｉ＠１２６．ｃｏｍ 中国药物与临床２０１１年８月第１１卷第８期Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｒｅｍｅｄｉｅｓ＆Ｃｌｉｎｉｃｓ，Ａｕｇｕｓｔ ２０１１，Ｖｏ１．１１，Ｎ０．８ 白术挥发油是药材白术抗肿瘤活性部位Ｅｌ１。挥 为分析纯，水为去离子水。白术药材分别购自浙江新 吕、安徽歙县、湖南平江及河北安国当地。 ２方法与结果 ２．１白术挥发油提取 发油中约含４０种不同化学成分，苍术酮含量高达 ６１％Ｅ 。苍术酮性质不稳定，遇光、加热易发生氧化分 解，分解前、后的气相色谱一质谱（ＧＳ—ＭＳ）色谱图明 显不同［，， 。挥发油的研究多采用气相色谱法进行， 测定中程序升温过程或可对苍术酮稳定造成影响［５］， 给挥发油质量控制结果带来影响。 有关挥发油定量质控研究，可见对挥发油中苍 采用超临界二氧化碳萃取法（ＳＰＥ）进行挥发油 提取，操作如下：白术药材干燥根茎，粉碎，过２０目 筛，置于超临界二氧化碳萃取釜中。萃取压力２３ ２５ ＭＰａ，萃取温度５０ ｏＣ；分离压力７—８ ＭＰａ，分离温 术酮定量分析［酬．多数研究集中在对白术药材质控 方面［ ， 。在指纹图谱研究方面，有报道比较不同提 取方法获得的挥发油其色谱结果差异［， ；采用直观 推导式演进特征投影算法。比较不同产地挥发油 ＧＳ—ＭＳ数据差异，表征白术药材质量［１０］。另有研究， 采用高效毛细管电泳法比较不同产地白术药材指纹 图谱差异［１１ ；采用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）法，研究 建立了白术药材指纹图谱分析方法Ｅ也］。可以看出，研 究对象均为白术药材，挥发油的指纹图谱研究采用 对挥发油中苍术酮稳定有影响的气相色谱法。 挥发油中化学成分明显可以分为极性和非极性 两大部分．非极性成分占比达９０％左右。非极性成分 中，有３个成分相对含量占非极性成分相对含量总 量达９０％以上［”］，这３个非极性成分之一为苍术酮， 占挥发油总量６０％左右［２］。本文采用对挥发油中苍 术酮稳定影响较小ＨＰＬＣ法，研究建立挥发油中极 性和非极性成分的ＨＰＬＣ特征图谱分析方法：以浙 江、安徽、湖南和河北４个外观差异较大产地的白术 药材所提取的挥发油为对象。对４个产地挥发油中 极性和非极性成分的特征图谱及共有模式之间相似 度进行研究，比较研究特征图谱中特征成分的相对 保留时间和相对峰面积。为科学、全面评价白术挥发 油质量提供依据。 １仪器和试药 Ｌ－－２１３０Ｈｉｔａｃｈｉ（日立）高效液相色谱仪；Ｌｍ ２４２０Ｈｉｔａｃｈｉ（日立）紫外检测器：Ｈｉｔａｃｈｉ（日立）自动 进样器；大连依利特Ｅｃｈｒｏｍ９８型色谱工作站；分析 天平（上海）（最大标量１００ ｇ，感量＝０．０００１ ｇ）。 苍术酮自制（ＨＰＬＣ归一化法测定其纯度＞ ９９％）；对照品白术内酯Ｉ（１００４２—０８１０１０）、白术内 酯Ⅲ（１００４４—０８１０１０）（纯度＞９９．５％）购于南昌贝塔 生物科技有限公司；Ｂ一桉叶醇购于南京泽朗医药科 技有限公司（纯度＞９９．６％）；Ｂ一榄香烯（１００２６８— ２００４０１）（纯度＞９９．２％）购于中国药品生物制品检定 所。乙腈为色谱纯（天津四友化丁厂生产），乙酸乙酯 度５Ｏ℃，每次提取４ ｈ。收集萃取得到的挥发油，称 重，保存在一２０。Ｃ避光条件，备用。 ２．２溶液制备 ２．２．１混合对照品溶液：分别精密称取对照品苍术 酮、Ｂ一桉叶醇、白术内酯Ｉ和白术内酯Ⅲ适量，用乙 腈适量溶解，加乙腈制成每１ ｍ１分别含苍术酮０．６０ ｍｇ、白术内酯Ｉ ５０ ｇ、Ｂ一桉叶醇０．４０ ｍｇ、白术内酯 １１１４０ Ｉｘｇ混合对照品储备液。分别精密吸取系列体 积混合对照品储备液，以乙腈稀释、定容，制成９个 浓度混合对照品溶液，０～５℃冷藏避光保存，待用。 ２．２．２挥发油供试品溶液：精密称取一２Ｏ℃保存的 挥发油４Ｏ ｍｇ，用适量乙腈溶解，定溶于２５ ｍｌ容量 瓶中。制成浓度为１．５ ｍｇ／ｍｌ的挥发油溶液。０～５℃ 冷藏避光保存，待用。 ２．３色谱条件 色谱柱：Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＯＤＳ２（４．６ ｍｍ ｘ２５０ ｍｍ，５ ｍ）；流动相乙腈（Ａ）一水（Ｂ）６０：４０，梯度洗脱［Ｏ一３０ ｍｉｎ，４０％Ｂ—｝１０％Ｂ：３０－４５ ｍｉｎ，１０％Ｂ １０％Ｂ ｌ：流 速：１．０ ｍｌ／ｍｉｎ；柱温３０℃，进样５ ｌ。挥发油中极性 和非极性成分特征图谱检测波长分别为２５５ ｎｍ和 ２０５ ｎｍ。 ２．４挥发油中极性和非极性成分的特征图谱方法 学研究 依据“２－３”项下挥发油中极性和非极性成分的 特征图谱色谱条件，采用相对保留时间确认各色谱 条件下主要特征成分峰。挥发油中非极性成分的特 征图谱中以ｐ一桉叶醇作为参照峰；挥发油中极性成 分的特征图谱中以苍术酮作为参照峰。挥发油中极 性和非极性成分特征图谱中的各特征峰的柱效＞ ７０００，分离度≥１．５。记录９０ ｍｉｎ特征图谱色谱图，保 留时间４５ ｍｉｎ之后未见其他色谱峰出现，故色谱采 样记录时间定为４５ ｍｉｎ。分别以挥发油中非极性成 分特征图谱中６个非极性特征成分峰，以及挥发油 中极Ｊ陛成分的特征图谱中８个特征峰的保留时间和 峰面积为指标．对挥发油中极性和非极性成分的特 中国药物与临床２０１１年８月第１１卷第８期Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｒｅｍｅｄｉｅｓ＆Ｃｌｉｎｉｃｓ．Ａｕｇｕｓｔ ２０１１，Ｖｏ１．１１，Ｎｏ．８ 征图谱方法学进行考察。 ２．４．１ 日内及日间精密度：取同一产地白术挥发油 适量，按“２．２”项下方法制备供试品溶液５份，连续６ 制备供试品溶液，进样，测定。将得到的４个产地挥 发油极性成分特征图谱导人“中药色谱指纹图谱相 似度评价系统研究版（２００４Ａ）”，进行特征峰匹配， ｄ。分别在“２．３”项下挥发油中极性和非极性成分的 特征图谱色谱条件下，进样，测定。记录非极性成分 的特征图谱中６个特征成分峰和极性成分的特征图 谱中８个特征峰的峰面积，结果挥发油中极性和非 以浙江产地挥发油供试品色谱图为对照，建立挥发 油中极性成分特征图谱共有模式。计算得各产地挥 发油中极性成分特征图谱与共有模式之间整体相似 度为０．９９６～０．９９９。对特征图谱及共有模式中的特征 极性成分特征图谱中的各特征峰的相对峰面积日间 相对标准偏差（ＲｓＤ）％≤１．３％（凡＝６）；相对峰面积日 内ＲＳＤ％≤１．６％（ｎ＝５ 。 ２．４．２重复性：取同一产地白术挥发油适量，按 “２．２”项下方法制备供试品溶液６份。分别在“２．３”项 下挥发油中极性和非极性成分的特征图谱色谱条件 下，进样，测定。记录非极性成分特征图谱中６个特 征成分峰和极性特征图谱中８个特征峰的峰面积。 结果挥发油中极性和非极性成分特征图谱中的各特 征峰的相对峰面积ＲＳＤ≤１．９％（ｎ＝６）。 ２．４．３挥发油稳定性：取同一产地新提取挥发油适 量，分别在０—５℃避光和一２０℃避光条件下放置，在 ０，１，２，４，８，１Ｏ，１２月每月初，各取适量，每次同时制 备３份供试品。分别在“２．３”项下挥发油中极性和非 极性成分的特征图谱色谱条件下，进样，测定。记录 非极性成分特征图谱中６个特征成分峰和极性特征 图谱中８个特征峰的峰面积。挥发油在０～５ ｃ【＝避光 条件下放置８个月，２个特征图谱中各特征峰的峰 面积ＲＳＤ≤１．６％（ｎ＝３）；在避光一２０℃条件下放置 １２个月，２个特征图谱中各特征峰的相对峰面积 ＲＳＤ≤１－３％（ ＝３）。 ２．４．４供试品稳定性：取同一产地新提取挥发油适 量．按“２．２”项下方法制备供试品溶液．将供试品溶 液分为２份，分别在０～５℃避光和室内室温暗处 （２２～２５ ｃＩ＝）条件下放置，在０，２，４，８，１２，２４，３６，４８ ｈ 时，各取供试品溶液适量，分别在“２．３”项下挥发油 中极性和非极性成分的特征图谱色谱条件下，进样， 测定。每个供试品测定３次。记录非极性成分特征图 谱中６个特征成分峰和极性成分特征图谱中８个特 征峰的峰面积。结果：供试品溶液在０～５℃避光条件 下放置４８ ｈ，２个特征图谱中各特征峰的相对峰面 积ＲＳＤ≤１．８％（ｎ＝３）；在室内室温暗处（２２～２５℃）条 件下放置２４ ｈ，相对峰面积ＲＳＤ＝１２％（ｎ＝３）。 ２．５挥发油中极性成分特征图谱的建立及相似度 评价 分别取浙江、安徽、湖南、河北产地挥发油适量． 峰的相对保留时间和峰面积进行数据匹配，６个特 征峰的相对保留时间ＲＳＤ≤０．０６％。相对峰面积 ＲＳＤ２３％～７７％，６个特征峰峰面积之和占总峰面积 ９７．６５％。 对浙江、安徽和湖南等３个产地挥发油中极性 成分特征图谱及共有模式中的特征峰的相对保留时 间和峰面积进行数据匹配。６个特征峰的相对保留 时间ＲＳＤ≤２．１９％，相对峰面积ＲＳＤ≤２．３９％。当加 入河北产地白术挥发油极性成分特征图谱中的６个 特征峰色谱数据进行匹配后。６个特征峰的保留时 间ＲＳＤ≤１．６８％，峰面积ＲＳＤ２７％～６２％。 ２．６挥发油中非极性成分特征图谱的建立及相似 度评价：分别取浙江、安徽、湖南、河北产地挥发油适 量，制备供试品溶液，进样，测定。将得到的４个产地 挥发油非极性成分特征图谱导人“中药色谱指纹图 谱相似度评价系统研究版（２００４Ａ）”。进行特征峰匹 配，以浙江产地挥发油供试品色谱图为对照，建立挥 发油中非极性成份特征图谱共有模式。４个产地白 术挥发油中非极性成分特征图谱与共有模式之间相 似度为０．９９８～１．０００。对特征图谱及共有模式中的特 征峰的相对保留时间和峰面积进行数据匹配，８个 特征峰的相对保留时间ＲＳＤ≤０．８９％，相对峰面积 ＲＳＤ ２１％一７９％。８个特征峰峰面积之和占总峰面积 ９８．３０％。 对浙江、安徽和湖南等３个产地挥发油中非极 性成分特征图谱及共有模式中的特征峰的相对保留 时间和峰面积进行数据匹配，８个特征峰的相对保 留时间ＲＳＤ≤Ｏ．４３％，相对峰面积ＲＳＤ≤２％。当加入 河北产地白术挥发油非极性成分特征图谱中的８个 特征峰色谱数据进行匹配后。８个特征峰的保留时 间ＲＳＤ≤０．６６％，峰面积ＲＳＤ５．６％～６８％。 ３讨 论 ３．１流动相选择：甲醇一水与甲醇一乙腈一水流动相 系统相比，使用甲醇一水流动相系统的部分色谱峰分 离度较好，但是色谱柱柱压较高，基线漂移严重。且 苍术酮峰面积较使用甲醇一乙腈一水流动相系统减少 中国药物与临床２０１１年８月第１１卷第８期Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｒｅｍｅｄｉｅｓ＆Ｃｌｉｎｉｃｓ，Ａｕｇｕｓｔ ２０１１，Ｖｏ１．１１，Ｎｏ．８ 约５４％。甲醇一乙腈一水与乙腈一水流动相系统相比， 虽然色谱柱柱压下降１，４，但基线仍有漂移，苍术酮 峰面积较使用乙腈一水流动相系统减少约４３％。乙 和非极性成分特征图谱中的特征成分的种类一致， 但相对含量差异较大。 浙江、安徽、湖南３个产地白术挥发油中极性和 腈一水流动相系统柱压低，基线平稳，且色谱峰灵敏 非极性成分特征图谱中的特征峰的相对保留时间 度也远远高于其他流动相体系。因此，本文选定乙 腈一水系统为本文流动相体系。 ３．２检测波长选择：研究表明，挥发油中非极性成 分占比达９０％左右［ｎ］。为科学获得可反映挥发油中 较多色谱信息的检测波长，我们在２００—２８０ ｎｍ检测 波长之间，每间隔５ ｎｍ，进样，获得各检测波长下的 色谱图。依据文献［１３］及色谱图中色谱峰数量、峰面 积、分离度、总峰面积、特征峰面积占总面积百分比、 特征峰面积绝对值大小等选评指标．结合基线漂移 情况，对各检测波长的色谱结果进行分析比较，最终 确定２５５ ｎｍ为挥发油中极性成分特征图谱检测波 长：２０５ ｎｍ为挥发油中非极性成分特征图谱检测波 长。 ３－３稳定性试验：挥发油及其供试品稳定性试验结 果表明，挥发油在０—５℃避光保存８个月，在一２０℃ 避光条件下放置１年是稳定的。挥发油供试品溶液 在室内室温暗处（２２—２５ ｃＩ＝）条件下放置２４ ｈ不稳 定；在０ ５℃避光条件下放置４８ ｈ稳定。因此，在分 析操作过程中，挥发油应保存在０—５℃避光或一２０ ℃条件下。挥发油供试品最好现用现配，等待测定期 间供试品溶液应在Ｏ～５℃避光条件下保存，随用随 取。 ３．４特征图谱结果分析：特征图谱试验结果表明，４ 个不同产地挥发油中极性和非极性成分特征图谱与 共有模式之间相似度为０．９９６～１．０００，表明４个产地 挥发油中极性和非极性成分的特征图谱整体相似度 较高。４个产地挥发油中极性和非极性成分特征图 谱中的特征峰的峰面积之和占总色谱峰峰面积≥ ９７．６５％。表明２个特征图谱从整体上可分别反映出 挥发油中不同极性成分绝人多数物质的相对质量， 可用反映挥发油中绝大多数成份的相对质量。 ４个产地挥发油中极性和非极性成分特征图谱 中特征峰的相对保留时间ＲＳＤ≤０．８９％，相对峰面 积ＲＳＤ在２１％～７９％，表明４个产地挥发油中极性 ＲＳＤ≤２．１９％．相对峰面积ＲＳＤ≤２．３９％：河北产地白 术挥发油中极性和非极性成分特征图谱中的特征峰 的相对保留时间及其相对含量与浙江、安徽、湖南３ 个产地挥发油的相比，相对保留时间ＲＳＤ≤１．６８％， 相对峰面积ＲＳＤ在５．６％一７７％。表明浙江、安徽、湖 南这３个产地白术挥发油中极性和非极性成分特征 图谱中的特征成分种类及其相对含量相近，河北的 与之比较，特征成分种类相近。但相对含量差异较 大。 参考文献 ［１］张宗，张鸿翔，史天良，等．白术挥发油抗肿瘤作用的研究月中瘤 研究与临床，２００６，１８（１２）：７９９—８００． ［２］阎克里，刘玉瑛，史天良，等．气一质联用对不同提取法的白术 油化学成分的分析．中国药物与临床，２００２，２（５）：３３９—３４０． ［３］郝延军，桑育黎，李宝林，等．苍术酮的常温稳定性研究．中成药， ２００７，２９（６）：５９８－６００． ［４］朱秀卿，阎克里，赵丽．白术挥发油及其有机溶液稳定性动力学 研究．中国药物与ｌ临床，２０１０，１０（６）：６３２—６３４． ［５］王小芳，王芳，张亚环，等．白术挥发油中苍术酮氧化反应的动 力学．应用化学，２００７，２４（３）：３０１—３０６． ［６］阎克里，朱秀卿，赵丽．高效液相色谱法测定白术挥发油中苍术 酮、Ｂ一桉叶醇、榄香烯的含量．中国药物与临床，２０１０，１０（７）： ７５ｌ一７５３． ［７］寿旦，戴诗文，章建民，等．微管液相色谱法同时测定白术中的 白术内酯Ⅲ、Ｉ和苍术酮．色谱，２００８，２６（５）：６３７—６４０． ［８］刘伟祥，黎琼红，谢晨，等．ＨＰＬＣ法测定自术药材中的白术内酯 Ｉ、Ⅱ、Ⅲ＿中草药，２００７，３７（８）：１２６４—１２６７． ［９］刘胜姿，魏万之，邱细敏，等．不同提取方法对白术油气相一质 谱指纹图谱的影响．湖南师范大学学报（医学版），２００４，１（１）： ５３－５６． ［１０］周枝风，沈菊文，龚范，等．白术挥发油成分分析及其色谱指纹 图谱研究初探．中草药，２００４，３５（１）：５－７． ［１１］左坚，纪从兰．白术高效毛细管电泳指纹图谱的建立和产地差 异分析．现代中药研究与实践，２００８，２２（１）：２９－３１． ［１２］黎琼红，马兴田，谢晨，等．白木药材的指纹图谱研究．中草药， ２００７，３８（６）：９２９－９３１． ［１３］李续亮，阎克里，朱秀卿，等．ＨＰＬＣ法对氧化分解前白术挥发油 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