培养基适用性检查验证方案

编号: AB/06-31-B

培养基适用性 验证方案

计数培养基

****药厂有限公司

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培养基适用性检查验证方案

培养基适用性验证方案 标 题 编 号 AB/06-31-B 共5页、第1页 200 年 月 日 分发数 批准日期 培养基适用性验证方案 GMP综合办公室 起草日期 分发部门 页 码 执 行 颁发部门 起草人 行政管理办公室 批准人 审核人 审核日期 目 录 1. 概述……………………………………………………………………………...2 2. 验证目的…………………………………………………………………………2 3. 验证的范围………………………………………………………………………2 4. 验证人员及职责…………………………………………………………………2 5. 验证程序和方法…………………………………………………………………2 6. 验证可接受的标准………………………………………………………………3 7. 验证步骤…………………………………………………………………………3 8. 结果分析及评价：………………………………………………………………4 9. 验证报告…………………………………………………………………………5 10. 建议…………………………………………………………………………….5 11. 最准批准……………………………………………………………………….5 12. 所使用的记录………………………………………………………………….6

培养基适用性检查验证方案

1. 验证目的：

细菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的适用性检查。本次验证的目的是确认营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基适合细菌、霉菌及酵母菌数测定。 2. 参照标准：2010版中国药典二部附录XI J微生物限度检查法。 3. 验证项目：营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基的适用性检查。 4.验证小组人员及职责： 4.1验证小组人员:

小组人员职务 组 长 组 员 组 员 4.2验证人员职责及要求

4.2.1按验证方案及相关文件实施验证。 4.2.2认真观察并做好验证原始记录。 4.2.3对实施验证的结果负责。 4.3验证中各部门的职责 4.3.1验证领导组职责

4.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。 4.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。 4.3.1.3负责验证方案的批准工作。 4.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。 4.3.1.5负责验证报告的批准工作。 4.3.2验证工作小组职责

4.3.2.1负责验证方案的起草工作。 4.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。 4.3.2.3负责验证方案的实施。

4.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。

姓 名 所在部门 质量部 质量部 质量部 职 务 经 理 QC主任 检验员 培养基适用性检查验证方案

4.3.2.5参与验证结果的评价工作。 4.3.3质量部职责

4.3.3.1负责公司验证日常管理工作。 4.3.3.2负责验证方案的审核工作。

4.3.3.3负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。 4.3.3.4负责检验仪器及检验方法的验证。

4.3.3.5负责验证中各项检测工作，提供验证的检验记录、检验报告，对验证过程中的各项检验工作负责。

4.3.3.6负责对验证人员的培训、考核工作。 4.3.3.7负责验证资料和报告的审核工作。 4.3.3.8负责验证文件回收、归档管理工作。

5. 合格标准：被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。 6. 试验材料：

6.1. 被验证产品：营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基 6.2. 仪器设备：

6.2.1. SYQ-DSX-280B型手提式压力蒸汽灭菌器 6.2.2. SW-CJ-2A双人净化工作台 6.2.3. XSW-CJ-1A单人净化操作台 6.2.4. HZMJ型霉菌培养箱 (23～28℃) 6.2.5. JC303-4电热恒温培养箱 (30～35℃) 6.2.6.不锈钢远红外烘箱 6.2.7 101-2A电热鼓风干燥箱 6.2.8微波炉

6.3. 验证用培养基 名称 营养琼脂培养基 营养肉汤培养基

生产厂家 批号 培养基适用性检查验证方案

玫瑰红钠琼脂培养基 改良马丁培养基 改良马丁琼脂培养基 营养琼脂对照培养基 玫瑰红钠琼脂对照培养基 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基 6.4. 验证用菌株：(第 代)

验证菌株 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 黑曲霉菌 7. 菌液制备

培养基 营养肉汤 营养肉汤 营养肉汤 改良马丁培养基 改良马丁琼脂培养基 培养温度 30—35℃ 30—35℃ 30—35℃ 23—28℃ 23—28℃ 培养时间（小时） 18—24 18—24 18—24 24—48 5—7（天） 7.1. 接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、与枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于30～35℃培养18～24小时。取经30～35℃培养18~24小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、与枯草芽孢杆菌营养肉汤新鲜培养物1ml加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-6~10-7约为50~100cfu∕ml的菌悬液备用。

7.2.接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，于23～28℃培养24~48小时。取经23～28℃培养24~48小时的白色念珠菌改良马丁液体培养物1ml加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-5约为50~100cfu∕ml的菌悬液备用。

7.3.接种黑曲霉菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，于23～28℃培养5～7天，加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50～100cfu∕ml的菌悬液备用。 8.菌液计数：（每种菌液接种2个平皿）

培养基适用性检查验证方案

大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌分别取1ml接种至营养琼脂培养基中，置30～35℃培养48小时；白色念珠菌、黑曲霉分别取1ml接种至玫瑰红钠琼脂培养基，置23～28℃培养72小时。

菌落计数结果（2个平皿计数取平均值）见下表

菌落计数结果（cfu∕ml） 10-5稀释 试验次数 1 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 黑曲霉

9.适用性检查：

9.1.取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养48小时，计数；取白色念珠菌、黑曲霉菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置23～28℃培养72小时，计数。

9.2取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养48小时，计数；取白色念珠菌、黑曲霉菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置23～28℃培养72小时，计数。

10-6稀释 3 1 2 3 1 10-7稀释 2 3 2 培养基适用性检查验证方案

9.3. 结果见附表

10. 结论： 附表1：

计数培养基适用性检查验证记录

试验时间 年 月 日 完成时间 年 月 日

供试品组 验证菌株 平皿号 1 大肠埃希菌 (培养3天计数) 2 平均值 1 金黄色葡萄球菌 (培养3天计数) 2 平均值 1 枯草芽孢杆菌 (培养3天计数) 2 平均值 1 白色念珠菌 (培养5天开始计数) 2 平均值 1 黑曲霉菌 (培养5天开始计数) 2 平均值 -- -- -- -- -- -- -- -- -- cfu∕ml 对照培养基组 cfu∕ml 回收率% 应≥70% -- 结论

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复核人 试验人

（注：可编辑下载，若有不当之处，请指正，谢谢!）