宫脸宝研亩与撩，蠢： ＩＳＳＮ １００６～７１６７ 第３７卷第２期２０１ ８年２月 万 ＲＥＳＥＡＲＣＨ ＡＮＤ ＥＸＰＬＯＲＡＴＩＯＮ ＩＮ ＬＡＢ０ＲＡＴ０ＲＹ Ｖｏ１．３７ Ｎｏ ２ Ｆｅｂ．２Ｏ１８ 厌氧微生物培养实验教学改革与实践 蒋海明 ， 李 侠 ， 刘振旺 ， 张 鹏 ， 李 玲 ， 赵宏宇 （内蒙古科技大学ａ．生命科学与技术学院；ｂ．矿业研究院，内蒙古包头０１４０１０） 摘 要：针对现有实验室厌氧微生物培养装置通用性差、价格昂贵、不适合极端微 生物培养及不能恒温等问题，设计、制备了一种实验室简易厌氧微生物培养基制 备、接种与培养装置，并将该装置用于严格厌氧微生物Ｇｅｏｂａｃｔｅｒ ＳＵ ｒｒｅｄｕｃｅｎｓ ＰＣＡ、 Ｇｅｏｂａｃｔｅｒ ｇｒｂｉｃｉａｅ及Ｍｅｔｈａｎｏｓａｒｃｉｎａ ｂａｒｋｅｒｉ ８００的培养基制备、接种与培养以验证其 有效性，实验结果表明该装置完全满足严格厌氧微生物的培养基制备、接种与培 养。设计及制备的装置结构简单、成本较低、易于操作，可用于ＣＯ，、Ｎ，及Ｈ，／ＣＯ， 等气氛厌氧微生物的培养基制备、接种及培养，为内蒙古科技大学“微生物学…‘环 境微生物技术”及“发酵工程”的实验教学创造了良好的实验平台并取得了很好的 效果。 关键词：实验教学；厌氧微生物；培养基制备；接种与培养；装置设计 中图分类号：Ｑ ９３—３３ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００６—７１６７（２０１８）０２—０１６５—０５ Ｒｅｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｔｅａｃｈｉｎｇ ｏｎ Ａｎａｅｒｏｂｉｃ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ Ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ＪＩＡＮＧ Ｈａｉｍｉｎｇ ，ＬＩＸｉａ ，ＬＩＵ Ｚｈｅｎｗａｎｇ ，ＺＨＡＮＧ Ｐｅｎｇ ，ＬＩＬｉｎ ，ＺＨＡＯ Ｈｏｎｇｙｕ （ａ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；ｂ．Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｍｉｎｉｎｇ，Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂａｏｔｏｕ ０ １ ４０ １ ０，Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｅｘｉｓｔｉｎｇ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｄｅｖｉｃｅｓ ｆｏｒ ａｎａｅｒｏｂｉｃ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ｅｉｔｈｅｒ ｈａｖｅ ｐｏｏｒ ｇｅｎｅｒａｌｉｔｙ ｏｒ ａｒｅ ｖｅｒｙ ｅｘｐｅｎｓｉｖｅ，ｔｈｅｙ ａｒｅ ｕｓｕａｌｌｙ ｎｏｔ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｅｘｔｒｅｍｅ ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃａｎｎｏｔ ｋｅｅｐ ｃｏｎｓｔａｎｔ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ．Ｔｏ ｓｏｌｖｅ ｔｈｅｓｅ ｐｒｏｂｌｅｍｓ，ａ ｎｅｗ ｓｉｍｐｌｅ ｄｅｖｉｃｅ ｆｏｒ ａｎａｅｒｏｂｉｃ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｍｅｄｉｕｍ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ，ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ｗａｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｖｉｃｅ ｗａｓ ｖｅｒｉｆｉｅｄ ｂｙ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｎｇ ａｎｄ ｃｕｌｔｉｖａｔｉｎｇ ｓｔｒｉｃｔ ａｎａｅｒｏｂｉｃ ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ Ｇｅｏｂａｃｔｅｒ ＳＵ ｒｒｅｄｕｃｅｎｓ ＰＣＡ，Ｇｅｏｂａｃｔｅｒ ｇｒｂｉｃｉａｅ，ａｎｄ Ｍｅｔｈａｎｏｓａｒｓｉｎａ ｂａｒｋｅｒｉ ８００．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｄｅｖｉｃｅ ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ ｍｅｅｔｓ ｔｈｅ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｓｔｒｉｃｔ ａｎａｅｒｏｂｉｃ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｍｅｄｉｕｍ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ，ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｄｅｖｉｃｅ ｉｓ ｅａｓｙ ｔｏ ｏｐｅｒａｔｅ，ｈａｓ ｓｉｍｐｌｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｌｏｗ ｃｏｓｔ，ｉｔ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ａｎａｅｒｏｂｉｃ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｍｅｄｉｕｍ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ，ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ｕｎｄｅｒ ｃａｒｂｏｎ ｄｉｏｘｉｄｅ，ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｏｒ Ｈ２／ＣＯ２ ａｔｍｏｓｐｈｅｒｅ． Ｇｏｏｄ ｒｅｓｕｌｔｓ ｈａｖｅ ｂｅｅｎ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｔｅａｃｈｉｎｇ ｏｆ ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ａｎｄ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｖｉｃｅ ｉｎ Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ． Ｔｈｅ ｄｅｖｉｃｅ ｃｒｅａｔｅｄ ａ ｇｏｏｄ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｐｌａｔｆｏｒｍ ｆｏｒ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｔｅａｃｈｉｎｇ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｔｅａｃｈｉｎｇ；ａｎａｅｒｏｂｉｃ ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ；ｍｅｄｉｕｍ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ；ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ；ｄｅｖｉｃｅ ｄｅｓｉｇｎｉｎｇ 收稿日期：２０１７－０５－０８ ２０１６ＸＹＰＹＬ０３）；内蒙古科技大学教改项目（ＪＹ２０１６０３８） 基金项目：国家自然科学基金（３１５６００１５）；内蒙古自然科学基金 作者简介：蒋海明（１９７９一），男，湖南东安人，副教授，主要研究方 （２０１６ＭＳ０５１２）；内蒙古自治区高等学校科学技术研究项目（ＮＪＺＹ１５０， 向：环境微生物学、生物能源、环境污染物的生物治理及监测。 ＮＪＺＹ１６１５５）；内蒙古科技大学创新基金项目（２０１４ＱＤＬ００１， Ｔｅ１．：４７２－５９５１９４４；Ｅ－ｍａｉｌ ａｄｄｒｅｓｓ：ｊｈｍｈｎ＠１６３．ｃｏｒｎ ２ 蒋海明，等：厌氧微生物培养实验教学改革与实践 将不锈钢板的Ｋ边 内折叠１５ ＣＨＩ作为底座， 且 底 面与控制面板 成８０。夹角，然后根据组件的尺 寸大小及相对位 ，按照 ３所示的尺寸采用机械钻 孔机 不锈钢板 』Ｊ【１＿１ ｆｌＩ不同的网孔分别用于同定 通球阀、整体式』７５ｉＩ巾ｆ｛针 、浮子气体流量计及拨动开关 阀（ ４（ａ）） 、ｉ殳汁时所有孔的直径比组件的直径 大１．５～２ ｌｌｌｎ１．以利ｆ组件的安装。利用钢锯将不锈 钢管切割成端ｕ平滑的小锈管短管：４ ｃｍ ４根，３．５ ＣＩ１１ ６根，３（＇Ｉｌｌ ８根，９（＇Ｉｌｌ ｌ根，ｌ０ ＣＩｎ ２根，１９ ＣＩＩ１ ｌ根，４３ （＇ｒｌｌ ｌ根，２７¨Ｉ１ １根，３０（ １ ２根，２０ ｃｍ １根，２．８ ｍ ２ 根及３．２ １１１ ｌ根．．不锈竹 管端口用１ ０００目砂纸打 瞻 滑后待川 引３ 控制Ｉ 板结构示意 寻 ■嗣 （１１） （《 ） （Ｉ） 罔４ ｆ 诫做 物培养基制备、接种肢培养 奠装过 爪意 组件发装过 卜： （１）将浮 Ｃ体流ｆｌｊ＝ｆ ｆ、同定剑控制而板 Ｉ：（ ４（ｈ））； （２）川Ｋ度 ４¨ 的ｌ不锈钢管将５个卡套式 通接 连接； 边的卜 式■通接头与拨动开天ｆｉ｛｛Ｉ ｌＩＪ ＪＩＩ ｆ 度 ９ ｔ·ＩＩ１的 锈钢管连接， 其他拔动开火阀 ⅢＫ度为３．５（＇１１／的小锈钢管连接；最左边 套式 通接头与整体式阀帽针阀用１９ ｃｍ的不锈钢管连接； 两个整体式阀帽针阀问用Ｋ度为３ ㈨的不锈钢管链 接一个卡套式ｉ通接头；所有拨动歼父阀的另一端连 接３ ｃｍ的不锈钢短管（见图４（Ｃ））（注：卡套连接时， 螺母拧１又１／４圈）； （３）将图４（ｃ）所示组件与球ｌ７埘安装到控制面板 ｌ （见图４（ｄ））； （４）按图１所示，Ｎ，、ｃ（） 气体流 计与三通接头 两端之问用２根１０ ＣＩｌｌ的不锈钢短管连接，ｊ通接头 Ｉ 端与三通球阀的左端用２７ ｃｍ不锈钢短管连接；Ｈ ／ ＣＯ，气体流量计与 通球阀的右端Ｊ｝ｊ ４３ ｃｍ不锈钢短 管连接；■通球阀的下端通过８０ Ｃｌｌｌ 锈钢短管及３０ Ｃｎｌ橡胶管（ １ ３ ＩｌｌＩｌ１）与玻璃管下端连接；玻璃管下端 通过３０ ｃｍ橡胶管（ ｌ ３ Ｉ１＂１ＩＩ１）及８０ ＣＩ／Ｉ不锈钢短管与 两个整体式阀帽针阀间的＝ 通接头连接；８０ ｃｎｌ橡胶 管（ ５ ＩｌｌＩｌ１）通过４５ ｅｌ／１不锈钢短管卜ｊ位于上部的整 体式阀帽针阀连接；４０ ｃ·ｍ橡胶管（ ５ ｍｍ）与拨动开 关阀连接；减压阀与气体流 ｛ｔ－问分）ｊＩＪ用２根２．８ Ｉｌｌ 及ｌ根３．２ １＂１１不锈钢管连接（ ４（ ）、（ｆ））； （５）将减压阀与钢瓶连接、玻璃纤维发热丝通过 电线与调压器连接，以完成整个装 的安装（见图５）。 ５ 厌氧微生物培养毖制衙、接种及培养装蚩实物 １．３厌氧微生物接种及培养装置气密·陛检测 以氮气为检测气，对安装好的Ｊ火氧微生物接种及 培养装置的气密性进行检测 ．将装 连接到Ｎ 气体 钢瓶上，打开所有阀门，用 ｌ卜水灾将等橡胶软管…折密 封，然后将肥皂水依次滴ＪＪｕ到所仃的连接接头Ｌ，以对 各个接头的气密件进行检 、ｃｎ１果滴ＪＪｌｌ肥皂水的接头 泡，则说明该接头仃｝ｆｌ｝漏，甭则说叫该接头气密封 好．．通过对各个接头气衔性的检测，以检验厌氧微牛 物接种及培养装 的气 性， ２ 厌氧微生物接种及培养装置实践 利用自制实验 简易 氧微，卜物接种及培养装置 培养Ｇｅｏｂａｃｔｅｒ ｓｕ！／ｉｌｒｒｅｄｕ￣·ＰＩ１ ＰＣ Ａ（ＡＴＣＣ ５ １ ５７３）及 Ｇｅｏｂａｃｔｅｒ ｇｒｂｉｃｉａｅ（ＡＴＣＣ ＢＡＡ－４６） Ｍｅｔｈａｎｏｓａｒｓｉｎ“ １６８ 宝昼宝研亩与撩赤 第３７卷 ｂａｒｋｅｒｉ ８００（ＡＴＣＣ ４３５６９．ＤＳＭ ８００）的ＣＯ．ｃｕｌｔｕｒｅ，以检 验该装置的有效性。 ２．１ Ｇｅｏｂａｃｔｅｒ ｓｕｌｆｕｒｒｅｄｕｃｅｎｓ ＰＣＡ的培养 针后塞上丁基橡胶塞，Ｎ，／ＣＯ （８０／２０，Ｖ／Ｖ）曝气４０ ｍｉｎ后铝盖密封，１２１。ｃ灭菌３０ ｒａｉｎ后冷却到室温待 用。制备好的培养基通过接种气路用ｌ ｍＬ注射器加 入０．７５ ｍＬ微量微生素溶液、０．５ ｍＬ还原剂（１００ Ｇｅｏｂａｃｔｅｒ ＳＵ ｒｒｅｄｕｃｅｎ￥ＰＣＡ的培养参考Ｓｕｍｍｅｒｓ 等 的方法。将ＮＢＦ（Ｍｅｄｉａ ＮＢ ｗｉｔｈ Ｆｕｍａｒａｔｅ）培养 基置于三角瓶中，用铝箔纸密封后煮沸，然后将煮沸的 培养基置于冰域中，利用厌氧微生物接种及培养装置 ｍｍｏｌ／Ｌ Ｌ－Ｃｙｓｔｅｉｎｅ和５０ ｍｍｏｌ／Ｉ 的Ｎａ，ｓ混合溶液） 及０．５ ｍＬ乙醇溶液（２ ｍｏｌ／Ｌ），厌氧气路接种Ｍ． ｂａｒｋｅｒｉ与Ｇ．ｇｒｂｉｃｉａｅ构成的混合微生物（１０％接种量， Ｖ／Ｖ）后置于３７。ｃ下培养。利用气相色谱定期检测厌 氧瓶中甲烷的浓度。厌氧瓶巾甲烷的浓度随时问变化 中的厌氧接种气路通入Ｎ！／ＣＯ （Ｖ／Ｖ＝８０：２０）混合气 使其冷却至室温。１５６ ｍＬ厌氧瓶先用厌氧微生物接 种及培养装置脱氧１０ ｍｉｎ，然后用电动移液器量取４５ ｍＬ ＮＢＦ培养基至厌氧瓶中，厌氧瓶插入曝气针后塞 如图７所示，接种培养６４天后厌氧瓶中甲烷的量达 １．４５±０．０３ ｒｎｍｏｌ（±ＳＤ，ｎ：３），这说明使用自制实验 室多功能厌氧微生物接种及培养装置成功地培养了 Ｇ．ｇｒｂｉｃｉａｅ与Ｍ．ｂａｒｋｅｄ的ＣＯ—ｃｕｈｕｒｅ。Ｇ．ｇｒｂｉｃｉａｅ与 上丁基橡胶塞，Ｎ，／ＣＯ，（８０／２０，Ｖ／Ｖ）曝气４０ ｒａｉｎ后铝 盖密封，１２Ｉ。ｃ灭菌３０ ｒａｉｎ后冷却到室温待用。制备 好的培养基通过接种气路用ｌ ｍＬ注射器加入０．７５ ｍＬ微量微生素溶液及０．５ ｍＬ乙酸溶液（２ ｍｏｌ／Ｌ），厌 氧气路接种Ｇｅｏｂａｃｔｅｒ ｓⅡ ｒｒｅｄｕｃｅｎｓ ＰＣＡ（１０％接种量， Ｍ．ｂａｒｋｅｒｉ都为严格厌氧微生物，而两种微生物在自制 的装置中都能生长，这充分说明了该装置在严格厌氧 微生物的接种及培养时的有效性。 Ｖ／Ｖ）后置于３０。ｃ下培养。图６为使用本研究设计的 厌氧微生物培养基制备、接种与培养装置培养 Ｇｅｏｂａｃｔｅｒ ｓｕｌｆｕｒｒｅｄｕｃｅｎｓ ＰＣＡ情况。图６（ａ）为未接种 Ｇ．ｓ“ ｆｕｒｒｅｄｕｃｅｎｓ ＰＣＡ的ＮＢＦ培养基，图６（ｂ）为接种 Ｇ． ｒｒｅｄｕｃｅｎｓ ＰＣＡ并培养一周后的ＮＢＦ培养基。 １０ｇ量＼ 从图６中能够看出未接种Ｇ．Ｓｌｌ ｒｒｅｄｕｃｅｎｓ ＰＣＡ的 ＮＢＦ培养基颜色没有发生变化，而接种Ｇ． ｓｕｉｆｕｒｒｅｄｕｃｅｎｓ ＰＣＡ并培养一周后的ＮＢＦ培养基由无 ‘厂———］ ０ ６４ 色变为粉红色，菌种生长良好，这表明该厌氧环境满足 Ｇ．ＳＵ ｒｒｅｄｕｃｅｎｓ ＰＣＡ的生长要求。 时间／天 罔７ Ｇ．ｇｒｂｉｃｉａｅ与Ｍ ｂａｒｋｅｒｉ的ＣＯ—ｅｕｈｕｒｅｓ 耦合代谢乙醇产甲烷 ３ 结 语 本文设计与制备了实验室简易厌氧微生物培养基 制备、接种与培养装置，并将该装置用于严格厌氧微生 物Ｇｅｏｂａｃｔｅｒ Ｍ舡ｒｒｅｄｕｃｅｎｓ ＰＣ Ａ、Ｇｅｏｂａｃｔｅｒ ｇｒｂｉｃｉａｅ及 Ｍｅｔｈａｎｏｓａｒｃｉｎａ ｂａｒｋｅｒｉ ８００的培养基制备、接种与培 养。实验结果表明，该装置完全满足试验要求，且具有 （ａ）未接种 （ｂ）接种 原料易得、制作简单、成本低及使用灵活等优点。陔装 置还适用于批量厌氧培养基的制备、厌氧接种及厌氧 微生物的培养，在为我校“微生物学…‘环境微生物技 图６接种Ｇ．Ⅲｉｆｕｒｒｅｄｕｃｅｎ ＰＣＡ前后ＮＢＦ培养基颜色变化 ２．２ Ｇ．ｇｒｂｉｃｉａｅ与Ｍ．ｂａｒｋｅｒｉ ＣＯ－ｃｕｌｔｕｒｅ的培养 Ｇ．ｇｒｂｉｃｉａｅ与Ｍ．ｂａｒｋｅｒｉ ｃｏ．ｃｕｌｔｕｒｅ的培养参考 Ｒｏｔａｒｕ等 的方法。将ＮＢＭ（Ｍｅｄｉａ ＮＢ ｍｏｄｉｆｉｅｄ）培 术”及“发酵工程”的实验教学构建了新的实验平台， 并取得了良好的效果。实验室简易厌氧微生物培养基 制备、接种与培养装置的成功设计与制造，不仅改善了 学校的实验教学条件，更重要地是引导学生将所学的 金工、机械制图、Ａｕ，ｔｏＣＡＤ、化］ 原理及生物等知识有 养基置于ｊ角瓶中，用铝箔纸密封后煮沸，然后将煮沸 的培养基置于冰域巾，利用厌氧微生物接种及培养装 置中的厌氧接种气路通入Ｎ ／ＣＯ （Ｖ／Ｖ＝８０：２０）混合 气使其冷却至室温。１５６ ｍＬ厌氧瓶先用厌氧微生物 接种及培养装置脱氧１０ ｒａｉｎ，然后用移液器量取４５ ｍＩ ＮＢＭ培养基至厌氧瓶（内置１ ｇ颗粒活性炭 机结合后应用到一个具体丁程项目，有助于培养和提 高学生的协同合作、杏『列文献、实验探索、Ｔ程实践及 科技创新能力，最终达到培养学生创新意识、创新精神 和创新能力的目的。 （Ｇｒａｎｕｌａｌ·Ａｃｔｉｖｅ Ｃａｒｂｏｎ，ＧＡＣ））中，厌氧瓶插入曝气 第２期 蒋海明，等：厌氧微生物培养实验教学改革与实践 州：南方医科大学，２０１３． ｌ６９ 参考文献（Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ）： 袁桂秀，林晨，江振友，等．改良焦性没食子酸法培养厌氧菌 ［１０］ 张 颖，刁 婶，范春辉，等 厌氧培养液制备装置：中国， ＺＬ２００８２００８９４１４ ６［Ｐ］．２００９－０１－０７． ［１１］ 承磊，代莉蓉，刘来雁，等．用于厌氧培养基制备的气路装置： ［Ｊ］．暨南大学学报（自然科学与医学版），Ｉ９９９，２０（４）：２４—２５． ［２］ 曹杰，屠静，邓娟．中华医学会第七次全国感染病学术会 中国，ＺＬ２００８２０２２２８０４．６［Ｐ］ ２００９—０８一Ｉ２． ［１２］ 宋新妥，赵明辉，李毅炬．一种厌氧培养基制备系统：中国，ＺＬ２０１６２０１２７４６８．１『Ｐ］．２０１６－０８．１０． 议论文汇编［Ｃ］／／上海：中华医学会，２００１：２２６． ［３］ 赵建玲，高兴政．焦性没食子酸培养阴道毛滴虫方法的建立及 其应用［Ｊ］．中国血吸虫病防治杂志，２００２，１４（１）：２８—３１． ［１３］ 于东宁，于基成，刘秋．厌氧微生物接种装置及厌氧微生物培 养系统：中国，ＺＬ２０１４２０８２８９０６．８［Ｐ］．２０１５－０６—１７ ［１４］ 于东宁，于基成，刘 秋．厌氧微生物接种装置、厌氧微生物培 养系统以及厌氧微生物接种、培养方法：中国，ＺＬ２０１４１０８１２９９５． ［４］ 施曼玲，戴贽，章玲．丁酸梭菌培养条件的研究［Ｊ］．杭州师 范大学学报（自然科学版），２００１，１８（４）：３８４Ｏ． ［５］ 乔艺然．Ａ型产气荚膜梭菌感染雏鸡病理形态学研究［Ｄ］．哈 尔滨：东北农业大学，２０１５． １［Ｐ］．２０１６－Ｏ１－１３ ［６］ 杨小蓉，黄伟峰，黄玉兰，等．肉毒梭菌检验样本处理及培养研 ［１５］ Ｓｕｍｍｅｒｓ Ｚ Ｍ，Ｆｏｇａｒｔｙ Ｈ Ｅ，Ｌｅａｎｇ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｄｉｒｅｃｔ ｅｘｃｈａｎｇｅ ｏｆ 究［Ｊ］．中国卫生检验杂志，２０１７，２７（７）：９６８—９７０． ｅｌｅｃｔｒｏｎｓ ｗｉｔｈｉｎ ａｇｇｒｅｇａｔｅｓ ｏｆ ａｎ ｅｖｏｌｖｅｄ ｓｙｎｔｒｏｐｈｉｃ ｃｏｅｕｈｕｒｅ ｏｆ ［７］ 黎景景，高鑫，李宽钰，等．敲除牙龈卟啉单胞菌菌毛次要组 ａｎａｅｒｏｂｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１０，３３０（６００９）：１４１３－１４１５． 分ＦｉｍＣＤＥ的载体构建［Ｊ］．上海口腔医学，２０ｌ３，２２（６）： ［１６］ Ｒｏｔａｒｕ Ａ Ｅ，Ｓｈｒｅｓｔｈａ Ｐ Ｍ，Ｌｉｕ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ｄｉｒｅｃｔ Ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｅｓ Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｂｅｔｗｅｅｎ Ｇｅｏｂａｃｔｅｒ ｍｅｔａｌｌｉｒｅｄｕｃｅｎｓ ａｎｄ ６２３－６２７． ［８］ 王爱宽，秦勇．褐煤本源菌在煤层生物气生成中的微生物学 Ｍｅｔｈａｎｏｓａｒｃｉｎａ ｂａｒｋｅｒｉ［Ｊ］．Ａｐｐｌ Ｅｎｖｉｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０１４，８０ 特征［Ｊ］．中国矿业大学学报，２０１１，４０（６）：８８８—８９３． （１５）：４５９９－４６０５． ［９］ 徐隋意．间断多次低温对糖氧剥夺神经元的保护作用［Ｄ］．广 （上接第１３８页） （２）将这些框架所需的．ＪＡＲ包事先导入平台； ［５］ Ｋ０ Ｍ，ｌｌｉｎｇ Ｂ Ｑｕｉｇ，Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ Ａ．Ｔｈｅ ＢｌｕｅＪ ｓｙｓｔｅｍ ａｎｄ ｉｔｓ （３）选择发布Ｗｅｂ Ｊａｖａ的网页服务器（比如 ｐｅｄａｇｏｇｙ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，２００３，１ ３ Ｗｉｎｄｏｗｓ中ＩＩＳ，Ｌｉｎｕｘ下的Ａｐａｃｈｅ的Ｔｏｍｃａｔ）； （４）：２４９－２６８． ［６］ Ｆｉｓｋｅｒ Ｋ，ＭｃＣａｌｌ Ｄ，ｌｌｉｎｇ Ｍ Ｋｏ，ｅｔ ａ１．Ｇｒｏｕｐ Ｗｏｒｋ Ｓｕｐｐｏｒｔ ｆｏｒ ｔｈｅ （４）下载安装后台数据库如ＭｙＳＱＬ或是ＳＱＬ ＢｌｕｅＪ ＩＤＥ［Ｃ］∥Ｐｒｏｃ ｔｈｅ １３ｔｈ Ａｎｎｕａｌ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｓｅｒｖｅｒ软件； Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｉｎ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ（ＩＴｉＣＳＥ ２００８）．ＡＣＭ （５）再导入系统．ＪＡＲ包时不要忘记导人Ｊａｖａ与 Ｐｒｅｓｓ ２００８：１６３－１６８． 数据库相连的数据库驱动包。比如ＭｙＳＱＬ连接Ｊａｖａ ［７］ Ｄｅａｎ Ｊ，Ｇｈｅｍａｗａｔ Ｓ．Ｍａｐｒｅｄｕｃｅ：Ａ Ｆｌｅｘｉｂｌｅ Ｄａｔａ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｔｏｏｌ 需要ｍｙｓｑ１．ｃｏｎｎｅｃｔｏｒ—ｊａｖａ一５．０．０．ｊａｒ驱动。这个包实 ［Ｊ］．Ｃｏｍｍｕｎ．ＡＣＭ，２０１０，５３（１）：７２－７７． ［８］ Ｓｕｔｔｅｒ Ｈ．Ｌａｒｕｓ Ｊ．Ｓｏｆｔｗａｒｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｃｙ ｒｅｖｏｌｕｔｉｏｎ［Ｊ ｊ． 际也是由Ｊａｖａ语言写出的连接数据库的类和实现方 Ｑｕｅｕｅ，２００５，３（７）：５４＿６２． 法。网络打成包类，直接使用了。 ［９］ Ｏａｋｓ Ｓ，Ｗｏｎｇ Ｈ，Ｊａｖａ Ｔｈｒｅａｄｓ［Ｍ］．３ｒｄ ｅｄ Ｏ’Ｒｅｉｌｌｙ Ｍｅｄｉａ，Ｉｎｅ， ２００４． ４ 结 语 ［１０］ Ｃｈａｎｄｒａ Ｒ，Ｄａｇｕｍ Ｌ，Ｋｏｈｒ Ｄ，ＭｅＤｏｎ—ａｌｄ，ａｎｄ Ｒ．Ｍｅｎｏｎ， 本文通过对Ｊａｖａ网络编程及Ｊａｖａ中间件概念的 Ｐａｒａｌｌｅｌ Ｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ ｉｎ ＯｐｅｎＭＰ［Ｍ］．Ｍｏｒｇａｎ Ｋａｕｆｍａｎｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｉｎｃ，２００１ 阐述及一个实例的讲解，主旨是让学习Ｊａｖａ网络编程 …１ Ｆｒｉｇｏ Ｍ，Ｌｅｉｓｅｒｓｏｎ Ｃ Ｅ，Ｒａｎｄａｌｌ Ｋ Ｈ．Ｔｈｅ ｉｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ 的学生能够在开发项目时对通信的复杂实现能从网络 Ｃｉｌｋ．５ ｍｕｌｔｉｔｈｒｅａｄｅｄ ｌａｎｇｕａｇｅ［Ｃ］／／Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＣＭ 体系结构的整体出发，获得简洁明了条理清晰的编程 ＳＩＧＰＬＡＮ’９８ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎ Ｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ Ｌａｎｇｕａｇｅ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ 思想，指导具体项目的开发和运维。 Ｉｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ（ＰＬＤＩ），１９９８（１）：２１２－２２３． ［１２］ Ｓｈａｆｔ Ａ，Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ Ｂ，Ｂａｋｅｒ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｎｅｓｔｅｄ ｐａｒａｌ—ｌｅｌｉｓｍ ｆｏｒ 参考文献（Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ）： ｍｕｌｔｉ．ｃｏｒｅ ＨＰＣ ｓｙｓｔｅｍｓ ｕｓｉｎｇ Ｊａｖａ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐａｒａｌｌｅｌ ａｎｄ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ，２００９，６９（６）：５３２—５４５． ［１］ ＯｐｅｎＪＤＫ：ＧＰＬｖ２＋Ｃｌａｓｓｐａｔｈ Ｅｘｃｅｐｔｉｏｎ．Ｏｐｅｎｊｄｋ．ｊａｖａ．ｎｅｔ· ［１３］ Ｔａｂｏａｄａ Ｇ Ｌ，Ｔｎｕｒｉｎ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｆ－ＭＰＪ：Ｓｃａｌ—ａｂｌｅ Ｊａｖａ Ｍｅｓｓａｇｅ— Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ（Ｃ）１９８９，１９９１ Ｆｒｅｅ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｉｎｃ．５９ ｐａｓｓｉｎｇ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｎ Ｐａｒａｌｌｅｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ［Ｊ］．Ｊ Ｓｕｐｅｒｅｏｍｐｕｔ， Ｔｅｍｐｌｅ Ｐｌａｃｅ，Ｓｕｉｔｅ ３３０，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ ０２１１１—１３０７ ＵＳＡ ２０１２，６０（１）：１１７—１４０． 『２ １ ＢＣＬ Ｆｏｒ Ｊａｖａ ＳＥ．Ｏｒａｃｌｅ ｃｏｉｎ［ＤＢ／ＯＬ］，２０１３．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ． ［１４］ Ｖｅｇａ－Ｇｉｓｂｅｒｔ Ｏ，Ｒｏｍａｎ Ｊ Ｅ，Ｇｒｏ［３ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｔｏｗａｒｄｓ ｔｈｅ ｏｒａｃｌｅ．ｅｏｍ／ｔｅｅｈｎｅｔｗｏｒｋ／ｊａｖａ／ｊａｖａｓｅ／ｔｅｒｍｓ／ｌｉｃｅｎｓｅ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ Ａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｊａｖａ Ｂｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｏｐｅｎ—ＭＰＩ［Ｃ］∥Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ［３］Ｅｃｋｅｌ Ｂ．Ｔｈｉｎｋｉｎｇ ｉｎ Ｊａｖａ［Ｍ］．４ｒｄ ｅｄ．ＵＳＡ：Ｐｒｅｎｔｉｃｅ Ｈａｌｌ ＰＴＲ， ２０ｔｈ Ｅｕｒｏｐｅａｎ ＭＰＩ Ｕｓｅｒｓ’Ｇｒｏｕｐ Ｍｅｅｔｉｎｇ，ＥｕｒｏＭＰＩ’１３．ＡＣＭ， ２００６：１３—１４． ２０１３（１）：１４１—１４２． ［４］ Ｂａｒｎｅｓ Ｄ，ｌｌｉｎｇ Ｍ Ｋｏ．Ｏｂｊｅｃｔｓ Ｆｉｒｓｔ ｗｉｔｈ Ｊａｖａ Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ ［１５］ Ｗｈｉｔｅ Ｔ．Ｈａｄｏｏｐ：Ｔｈｅ Ｄｅｆｉｎｉｔｉｖｅ Ｇｕｉｄｅ［Ｍ］．Ｏ’Ｒｅｉｌｌｙ Ｍｅｄｉａ， Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ＢｌｕｅＪ［Ｍ］．４ｒｄ ｅｄ．ＵＳＡ：Ｐｒｅｎｔｉｃｅ Ｈａｌｌ ＰＴＲ， Ｉｎｃ，２００９：２６．３６． ２００８．４２．５１，
