总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP单试剂比色法)

总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP单试剂比色法)

简介：

胆固醇(Cholesterol)又称胆甾醇，是一种环戊烷多氢菲的衍生物，分子式C27H46O，分子量为3860.65。胆固醇广泛存在于动物体内，其中脑、神经组织最丰富，在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也较高。

Leagene总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP单试剂比色法)又称胆固醇氧化酶法或胆固醇氧化酶-过氧化物酶偶联法等，血液中的胆固醇约1/3为游离胆固醇，2/3为与脂肪酸结合的胆固醇酯，后者被CEH水解为游离胆固醇，使4-氨基安替比林与酚(三者合称PAP)反应，生成红色醌亚胺色素(Trinder反应)。分光光度计在500~520nm处进行比色测定。本试剂盒用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织等样本中的总胆固醇含量定量测定。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：

操作步骤(仅供参考)：

1、 样本处理：

①血清、血浆、脑脊液样本：从待测样本中分理出的血清或血浆不应有溶血，直接检测，如超过线性范围，用生理盐水稀释后检测。 ②细胞样本：

a、取适量的细胞(一般推荐>106以上)，离心，弃上清，留取沉淀。 b、用PBS或生理盐水清洗1~2次，离心，弃上清，留取沉淀。

c、加入200~300μl的PBS或生理盐水匀浆，冰浴条件下超声破碎细胞，功率300W，每次3~5s，间隔30s，重复3~5次。亦可手动匀浆，制备好的匀浆液不可离心，待用。 ③组织样本：准确称取适量组织样本，按质量(g)：生理盐水或PBS(ml)=1：9的比例，加入生理盐水或PBS，冰浴条件下手动或机械匀浆。离心，取上清待用。 2、 分光光度计(1ml比色杯)、半自动生化分析仪TC测定操作:

编号 TC1213名称 100T Storage 试剂(A): COD-PAP工作液 Good's buffer 胆固醇氧化酶 胆固醇激酶 稳定剂 2×50ml -20℃ 避光 试剂(B): TC标准(5mmol/L) 试剂(C): ddH2O 使用说明书 1ml 1ml -20℃ 避光 RT 1份 北京雷根生物技术有限公司 www.leagene.com

①按下表依次加入试剂：

②充分混匀,水浴中孵育。

③分光光度计测定500~520nm吸光度。以空白管调零，读取标准管和各待测管的吸光度。 3、 普通分光光度计(2ml比色杯)TC测定操作: ①按下表依次加入试剂：

②充分混匀,水浴中孵育。

③分光光度计测定500~520nm吸光度。以空白管调零，读取标准管和各待测管的吸光度。 4、 酶标仪TC测定操作: ①按下表依次加入试剂：

②充分混匀,水浴中孵育。

③酶标仪测定500~520nm吸光度。以空白管调零，读取标准管和各待测管的吸光度。 5、 全自动生化分析仪TC测定操作: ①按下表依次加入试剂：

ddH2O(μl) TC标准(5mmol/L)(μl) 待测样本(μl) 空白管 3 标准管 3 待测管 3 ddH2O(μl) TC标准(5mmol/L)(μl) 待测样本(μl) COD-PAP工作液(μl) 空白孔 3 300 标准孔 3 300 待测孔 3 300 ddH2O(μl) TC标准(5mmol/L)(μl) 待测样本(μl) COD-PAP工作液(ml) 空白管 20 2.0 标准管 20 2.0 待测管 20 2.0 ddH2O(μl) TC标准(5mmol/L)(μl) 待测样本(μl) COD-PAP工作液(ml) 空白管 10 1.0 标准管 10 1.0 待测管 10 1.0 北京雷根生物技术有限公司 www.leagene.com

COD-PAP工作液(μl) 300 300 300 ②充分混匀,水浴中孵育。

③全自动生化分析仪测定500~520nm波长处吸光度。以空白管调零，读取标准管和各待测管的吸光度。 机器参数： 主波长/次波长 反应类型 反应方向

500/600nm 终点法 升反应(+) 计算公式：

血清、血浆等液体样本(空白调零)：

TC(mmol/L)=｛(待测管吸光度-空白吸光度)/(标准管吸光度-空白吸光度)｝×5mmol/L 血清、血浆等液体样本(全自动生化分析仪)：

TC(mmol/L)=(待测管吸光度/(标准管吸光度)×5mmol/L 细胞、组织等样本(空白调零)：

TC(mmol/L)=｛(待测管吸光度-空白吸光度)/(标准管吸光度-空白吸光度)｝×5mmol/L÷待测样本浓度(mg/ml)

细胞、组织等样本(全自动生化分析仪)：

TC(mmol/L)=(待测管吸光度/(标准管吸光度)×5mmol/L÷待测样本浓度(mg/ml)

参考区间：

健康成年人理想范围：<5.2mmol/L(<200mg/dl)

边缘升高：<5.23~5.69mmol/L(201~219mg/dl) 升高：≥5.72mmol/L(≥220mg/dl) 备注：TC标准(5mmol/L)=442.48mg/dl

性能指标：

外观 线性范围 灵敏度 变异系数 空白吸光值 干扰因素 稳定性 无色至淡黄色澄清液体 0.1~13mmol/L(3.6~500mg/dl)，R2>0.95 检测下限0.1mmol/L(3.6mg/dl) 批内<3%，批间<5% <0.1(1cm光径) 胆红素<410μmol/L；血红蛋白<7g/L；甘油三脂<28.5mmol/L时，对结果无明细影响。 密闭，12个月

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注意事项：

1、 上述低温试剂避免反复冻融，以免失效或效率下降。

2、 本法可直接用于检测脑脊液中的TC含量，但不能直接检测尿液中的TC含量，因为未

经处理的尿液中含有还原性物质，影响过氧化物酶反应。

3、 待测样本如不能及时测定，应置于2~8℃保存，3天内稳定。