第31卷第1期 2Ol2年2月 河南大学学报(医学版) Journal of Henan University(Medical Science) Vo1.31 No.1 Feb.2012 巴豆不同给药方式对荷瘤小鼠的影响 李佳桓,林海红,杜钢军 (河南大学药学院药物研究所,河南开封475004) 摘 要:目的 观察巴豆不同给药方式对荷瘤小鼠的影响。方法 采用Lewis肺癌皮下移植模型和4TI乳腺癌 肺转移模型观察巴豆不同给药方式对荷瘤小鼠的影响。结果 在Lewis肺癌皮下移植模型中,巴豆霜灌胃有抑制 肿瘤生长作用,同浓度巴豆水煎液灌胃对肿瘤生长抑制作用不明显,2种给药途径均能升高荷瘤小鼠脾脏指数,在 4TI乳腺癌肺转移模型中,巴豆霜和巴豆水煎液灌胃能有效抑制肿瘤转移,有降低荷瘤小鼠碳粒廓清能力的趋势, 不影响荷瘤小鼠脾脏指数。荷瘤小鼠血清抗氧化能力检测中,巴豆水煎液灌胃增加s0D和GSH—PX酶活性,巴豆 霜却降低二者活性。结论 巴豆给药方式影响其抗肿瘤活性,抗肿瘤作用与其免疫调节和抗氧化作用无关。 关键词:巴豆霜;巴豆水煎液;抗肿瘤;Lewis肺癌;4T1乳腺癌 中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1672~7606(2012)01—0008—04 Effect of croton given by different way on mice bearing tumor LI j ia—huan,LIN Hai—hong,DU Gang—j un (Institute of Pharmacy,Pharmaceutical College of Henan University,Kaifeng,Henan 475004,China) Abstract:0bjective To observe the effect of croton given by different way on mice bearing tumor.Methods Subcutaneous transplanted model of the lewis lung cancer and lung metastatic model of 4TI mammary cancer were used tO investigate effect of croton given by different way on mice bearing tumor.Results In subcutaneous transplanted model of the lewis lung cancer,defatted croton seed powder(DCSP)ig inhibited tumor growth whereas the same dose of croton decoction(CD)did not SO.However,both of them could increase spleen index of mice.In lung metastatic model of 4T1 mammary cancer,DCSP ig could effectively suppress tumor metastasis,reduce charcoal particles clearance,but had no effect on spleen index.Antioxidant enzymes assays showed that CD could promote SOD and GSH PX activity but DCSP suppressed them.Conclusion The different way of croton given influences its anti—tumor effect which isift associated with immune function and anti oxidation. Key words:Defatted croton seed powder;Croton decoction;Anti tumor;Lewis lung cancer;4TI mammary cancer 癌毒,是引发恶性肿瘤的一个重要因素,其致病 不同给药方式对荷瘤小鼠的影响。 暴戾,毒陷邪深,非攻不克,故中医常采用以毒攻毒之 1 材料 法,选用药性剧烈的中药,以达到攻坚蚀疮、破瘀散结 之目的l1]。巴豆为大戟科植物巴豆(Croton tiglium I.1动物及瘤株 C57BL/6小鼠及BALB/c小鼠,雌性,18~ 22 g,购自河南省实验动物中心;I ewis肺癌,本实验 I .)的干燥成熟种子,其味辛,性热,大毒,归胃、大肠、 肺经l2]。本实验制备不同的巴豆制品,采用Lewis肺 癌皮下移植模型和4TI乳腺癌肺转移模型观察了巴豆 室C57BL/6小鼠在体传代保存;4T1乳腺癌,本实验 室BALB/c小鼠在体传代保存。 收稿日期:2011 11 2O 基金项目:河南省科技厅重点攻关项目(112101310308);河南省高校青年骨干教师项目(2010GGJS-025);河南大学省部共 建项目(SBGJ090704)。 作者简介:李佳桓(1985一),女,河南省鹿邑人,硕士研究生,从事中药药理学的研究工作。 通信作者:杜钢军(1971一),男,河南周口人,博士,教授,从事中药药理学的研究工作。 李佳桓,等:巴豆不同给药方式对荷瘤小鼠的影响 1.2药品与试剂 组织匀浆器制备单细胞悬液,调细胞数5×10 /mL, 巴豆(购自开封同济堂,经中药学许文渊教授鉴 按0.2 mL/只接种于小鼠左侧第二乳房垫上。将3O 定);印度墨汁(北京笃信精细制剂厂);L一肾上腺素 只接种肿瘤的小鼠,随机分为3组,每组10只。对照 (1 rag/支,重庆迪康长江制药有限公司);谷胱甘肽 组:蒸馏水0.4 mL/只灌胃给药;巴豆霜组:巴豆霜混 (GSH,北京欣经科生物试剂有限公司);二硫对二硝 悬液50 mg/kg灌胃给药;水煎液组:水煎液 基苯甲酸(DTNB,国药集团化学试剂有限公司);辣 5O mg/kg灌胃给药。1次/d,连续3周,每日监测小 根过氧化物酶(HRP,国药集团化学试剂有限公司); 鼠体质量。治疗结束次日,剥离肺脏,用1O倍放大镜 硫代巴比妥酸(TBA,国药集团化学试剂有限公司); 计数肺转移结节数。剥离脾脏,称重,计算脾脏指数。 其他试剂均为市售分析纯。 1.3 巴豆霜及水煎液的制备 巴豆霜:称取巴豆2O g,去皮,粗纸包裹,电热板 上烘热,压榨去油,换纸后再烘再榨,反复数次,直至 纸无油痕,药物呈松散粉末状,口服给药时以所需剂 量加入淀粉糊制成所需混悬液。水煎液:称取巴豆 2O g,加水500 mL煎煮2次,每次40 min,合并2次 煎煮液浓缩至200 mL,过滤,4℃保存备用,口服给 药时根据给药剂量用蒸馏水稀释。 1.4 仪器 ELX8O0UV型酶标仪(美国Bio-Tek公司);SB- 3C一1A型洁净工作台(上海博迅实业有限公司医疗 设备厂);TDL一50B型台式离心机(上海安亭科学仪 器厂);JY1001型电子天平(上海精密科学仪器有限 公司);FA1004N型分析天平(上海精密科学仪器有 限公司天平仪器厂);SK一1快速混匀器(常州国华电 器有限公司);85—2恒温磁力搅拌器(常州国华电器 有限公司);游标卡尺。 2 方法 .2.1 对小鼠Lewis肺癌皮下移植肿瘤的影响 取生长良好的lewis肺癌传代实体瘤组织,用组 织匀浆器制备单细胞悬液,调细胞数5×10 /mL,按 0.2 mE/只接种于小鼠右前肢腋部皮下。将3O只接 种肿瘤的小鼠随机分为3组,每组lO只。对照组:蒸 馏水0.4 mL/只灌胃给药;巴豆霜组:巴豆霜混悬液 50 mg/kg灌胃给药;水煎液组:水煎液50 mg/kg灌 胃给药。1次/d,连续3周,每日监测小鼠体质量。 肿瘤长出后隔日用游标卡尺测量肿瘤直径2次,计算 肿瘤体积。治疗结束次日,将小鼠处死,剥离肿瘤、脾 脏,称重,计算抑瘤率和脾脏指数。 肿瘤体积(ram。)一肿瘤长度×肿瘤宽度×肿瘤 宽度/2;抑瘤率一(1一T/C)×100 ;脾脏指数一脾 脏质量(rag)/体质量(g)。公式中:C为对照组平均 瘤重(g);T为实验组平均瘤重(g)。 2.2对小鼠4T1乳腺癌肺转移的影响 取生长良好的4TI乳腺癌传代实体瘤组织,用 2.3对荷4T1乳腺癌小鼠碳粒廓清能力的影响 肿瘤接种、分组给药方法同4T1乳腺癌模型。 每日测小鼠体质量,治疗结束次日,从小鼠眶静脉采 血20 L,吹人体积分数0.1 NaHCO。2 mL中,以 等容量小鼠正常血溶于体积分数0.1 NaHCO。 2 mL作为空白对照,用ELX 800型酶标仪630 nm 处测吸光度(A),计算廓清指数K及吞噬系数a。 廓清指数K一(1ogAl—logA2)/(T2一T1);吞噬 系数a一 ×掘。公式中…A A z 分别为1 rain和10 min吸光度,T 、T 分别为1 min、 10 min。 2.4对荷瘤小鼠体内抗氧化酶及脂质过氧化产物形 成的影响 2.4.1 血清中soD的测定采用肾上腺素法,原理 是肾上腺素在碱性溶液中自氧化产生的肾上腺素红 在480 nlTl有吸收峰,SOD能抑制肾上腺素自氧化, 肾上腺素自氧化减少的程度代表SOD酶的活性。 2.4.2 血清中GSH—PX的测定采用DTNB法,原 理是谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—PX)可以促进H O 与还原型谷胱甘肽(GSH)反应生成水及氧化型谷胱 甘肽(GSSG),而GSH可以和二硫代二硝基苯甲酸 (显色剂DTNB)作用生成5一硫代二硝基苯甲酸阴离 子,呈现较稳定的黄色,在412 nm有最大吸收峰,以 GSH消耗程度代表GSH—PX酶活性。 2.4.3 血清中H 0。的测定 在辣根过氧化物酶 (HRP)存在下,酚红被过氧化氢氧化后颜色由红变 黄,当pH升至12.5左右时,黄色变为紫红色,可保 持较长时间不变,于490 ilm测OD值。 2.4.4血清中MDA的测定采用TBA法,原理是 过氧化脂质降解产物中的丙二醛(MDA)可与硫代巴 比妥酸(TBA)缩合,形成红色产物,在532 nm处有 最大吸收峰。 2.5 统计方法 用SPSS 11.0软件进行分析。计量资料采用均 数±标准差表示,两样本均数比较采用t检验,P< 0.05,有统计学意义。 lO 河南大学学报(医学版),2012年,第31卷第1期 3 结果 3.3对荷4T1乳腺癌小鼠碳粒廓清能力的影响 与对照组比较,巴豆霜组降低荷瘤小鼠碳粒廓清 3.1 对小鼠Lewis肺癌皮下移植肿瘤及免疫器官的影响 能力,巴豆水煎液组对荷瘤小鼠碳粒廓清能力有降低 巴豆霜灌胃有抑制肿瘤生长的作用,巴豆水煎液 趋势,二者都有增加肝脏指数趋势,见表3。 口服给药对肿瘤生长的抑制作用不明显;与对照组比 3.4对荷瘤小鼠体内抗氧化酶及脂质过氧化产物形 较,巴豆霜灌胃组脾脏指数增加明显,巴豆水煎液组 成的影响 有增加趋势。整个实验过程小鼠生长状态良好,见表 1。 巴豆霜和巴豆水煎液对荷Lewis肺癌小鼠有增 强SOD及GSH-PX酶活性作用,虽然2种治疗方式 3.2对小鼠4T1乳腺癌肺转移及免疫器官的影响 均引起MDA增加,但对H O 水平无影响,见表4。 与对照组相比,巴豆霜和巴豆水煎液灌胃能明显 在对荷4T1乳腺癌小鼠中,巴豆霜和巴豆水煎液抑 减少肺转移率和转移结节数,对脾脏指数无显著影 制s0D和GSH-PX酶活性,不显著影响MDA和 响。整个实验过程小鼠生长状态良好,见表2。 H。O。水平,见表5。 表1 巴豆对小鼠Lewis肺癌皮-FII*瘤生长的影响( 土s。 —lO) 注:与对照组比较, P<o.05,一P<o.Ol。 表2 巴豆对小鼠4T1乳腺癌肺转移的影响( ±S, 一10) 注:与对照组比较, P<0.01。 表3 巴豆对荷4T1乳腺癌小鼠碳粒廓清的影响( ±S。 一10) 注:与对照组比较, P<0.05,一P<0.01。 表4 巴豆对荷Lewis肺癌小鼠抗氧化酶的影响( 土s。 一10) 注:与对照组比较, P<0.05,一P<0.01。 表5 巴豆对荷4T1乳腺癌小鼠抗氧化酶的影晌( 士s, 一10) 注:与对照组比较, P<0.01。 李佳桓,等:巴豆不同给药方式对荷瘤小鼠的影响 4 讨论 癌、胃癌、肝癌等多种肿瘤具有治疗作用_3J。巴豆能 缓解晚期胃癌患者症状,使病程进展缓慢,病灶明显 豆的调节机体抗氧化功能作用也与其抗肿瘤活性无 关。巴豆中的抗肿瘤成分和抗肿瘤机制需进一步研 民间早已用巴豆治疗肿瘤,其提取物对甲状腺 究。参考文献: 吴立明.论药毒与癌毒[J].陕西中医,2004,25 缩小后,癌细胞能转化为正常细胞_4]。Morales等 ] [1]查道成,发现巴豆中的二萜成分可诱导MCF-7乳腺癌细胞凋 亡。本次实验结果显示,巴豆霜灌胃给药抑制实体瘤 生长,同浓度巴豆水煎液口服作用不明显,但二者都 (3):267—269. E2]万莉,周振海.巴豆的药理研究进展CJ].江苏中医药, 2003,24(17):60—61. 能抑制肿瘤转移,证明巴豆有抗肿瘤作用,其抗肿瘤 活性与药物处理方式有关。 E3]徐春,汤德元,曾智勇,等.浅谈大黄和巴豆的药理作用研 究EJ].世界农业,2007,343(11):52—55. [4]许冬青,王明艳,瞿融.巴豆生物碱对人胃腺癌细胞SGC- 7901 Fas基因表达影响的研究[J].中医药学报,2005,33 (2):9—10. 脾脏是人体最大的外周免疫器官,在机体防御系 统中,尤其在抗肿瘤免疫方面占有十分重要的地 指数,巴豆中可能含有刺激脾脏细胞增殖的成分,但 二者均有降低荷瘤小鼠碳粒廓清能力的作用或趋势, 表明巴豆的免疫调节与其抗肿瘤活性没有必然的联 鼠有增强SOD及GSH—PX酶活性作用,对荷4T1乳 位[6]。巴豆霜或巴豆水煎液灌胃给药均可增加脾脏 [5]Morales A,Perez P,Mendoza R.Cytotoxic and proapop— totic activity of ent-1 6t3—1 7a—dihydroxykaurane on human mammary carcinoma cell line MCF一7 EJ].Cancer Lett, 2005,218(1):109—116. 系。实验中巴豆霜和巴豆水煎液对荷Lewis肺癌小 [6]姜从桥.如何看待脾脏的抗肿瘤功能[J].中华普通外科 学文献,2008,2(6):444—445. 腺癌小鼠中却抑制SOD和GSH-PX酶活性,提示巴 [责任编辑时红] (上接第7页) [7]盛军利,孙桂菊.杜仲的功效学研究现状及其应用前景 参考文献: EJ].医学综述,2006,12(16):1 022—1 024. 周华凤.木脂素类化合物的药理研究进展[J].陕 Eli王俊丽.杜仲研究[M].石家庄:河北大学出版社,2001: [8]韩果萍,西师范大学学报:自然科学版,2005,33(S1):142—144. 333—334. 一部ES3.jE京:化学工业出 [2]李竹,晏媛,李青,等.杜仲的药理活性研究进展[J].中国 [9]国家药典委员会.中国药典:药事,2004,18(2):131—132. 版社,2005:114—115. 一部[s].北京:中国医药科 [3]王月茹,谢伟,王西芳,等.HPLC测定杜仲中松脂醇二葡 [1O]国家药典委员会.中国药典:技出版社,2010:154. 萄糖苷的含量[J].现代中医药,2009,29(6):78—79. 李钦,赫锦锦,等.不同变异类型杜仲皮中几种 [4]杜红岩.杜仲活性成分与药理研究的新进展EJ-].经济林 [11]杜红岩,主要活性成分含量的比较El3.林业科学研究,2011,24 研究,2003,21(2):58—61. 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