医学信息 ２０１Ｏ年１１月 第２３卷 第１１期 临床医学 ｉ； ！；；ｉ ；；ｉ※ｉ！：；；；；；；；；：； ｉ；；ｉｉ：；；；；；； ；ｉ ｉ；；；；：；；；；；；； ； ：：：；；；；ｉ；：；；ｉ；；； ；ｊ； ！；； ；； ； ；；ｉ ；； ；；；；ｉ；；； ； ；； Ｓｍａｄ２，Ｓｍａｄ４，Ｓｍａｄ７蛋白在结肠癌中的表达及意义 李志刚 金太欣 肖新波 周绍海 【摘要】目的：研究Ｓｍａｄ２，４，７蛋白在蛄肠癌及癌旁组织中的表达及意义。方法：采用免疫组化ＳＰ法，检测鲒肠癌及癌旁组织中Ｓｍａｄ２，４，７蛋白的 袁迭。结果：Ｓｍａｄ２，４，７蛋白在癌旁组织中均有表达，Ｓｍａｄ２．７蛋白在结肠癌组织中表达增加，而Ｓｍａｄ４蛋白在蛄肠癌组织中表达减少。结论：Ｓｍａｄ 蛋白参－ｂ肿瘤的恶性进程，其中Ｓｍａｄ２蛋白高表达、Ｓｍａｄ４缺失和Ｓｍａｄ７负调控不全是其重要表现。 【关键￣］Ｓｍａｄ蛋白；转化生长因子口；结肠癌 【中图分类号１Ｒ７３５．３ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１Ｏ０６—１９５９（２０１０）１１—００８３・－０１ ａ。③抑制型Ｓｍａｄ（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｓｍａｄ），包括Ｓｍａｄ６，Ｓｍａｄ７和果蝇的 Ｄａｄ；它们能通过阻断通路限制性Ｓｍａｄ与受体或共同Ｓｍａｄ的结合，对 近年来，有关生长因子及其受体与信号转导途径在恶性肿瘤发病中 的作用逐步得到证实。转化生长因子ＴＧＦ是一种多功能细胞因子，在调 节细胞生长、分化、凋亡和间质合成等方而起重要作用。ＴＧ即发挥作用 必须依赖其受体和受体后信号分子。ＴＧＦ３信号从细胞膜传人细胞核，与 基因表达Ｓｍａｄ家族蛋白调节有关［ ．ｚ］。Ｓｍａｄ蛋白是ＴＧ 信号通路中 的关键步骤。本文采用免疫组化的方法研究人结肠癌组织及癌旁组织 Ｓｍａｄ２，４，７蛋白的表达，就其与结肠癌发病的关系进行探讨。 １材料和方法 １．１ 材料：４２例结肠癌取自本院病理科２００７～２００９年存档的行结 肠癌根治性手术标本。经１Ｏ 中性福马林固定，石蜡包埋，切片厚４ ｍ。 所有病例均经病理确诊，有完整的临床和病理资料。男性３Ｏ例，女性１２ 例。年龄４２～７７岁，平均年龄５７．３岁。切缘阴性部分组织作癌旁组织。 １．２免疫组化染色：采用免疫组化ＳＰ法进行染色。Ｓｍａｄ２，４，７抗 体及ＳＰ试剂盒，液体ＤＡＢ酶底物试剂盒购自Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ公司 染色步 骤按说明书进行。以ＰＢＳ代替一抗作空白对照。 １．３结果判断标准：Ｓｍａｄ２以胞质内出现棕色颗粒者为染色阳性； Ｓｍａｄ４，７以胞质和（或）胞核内出现明显棕黄色颗粒为阳性。以阳性细胞 数为基础，结合细胞染色强度定出抗原的表达强度。细胞不着色或阳性 细胞＜２５ 为阴性，阳性细胞＞２５ 为阳性。 １．４统计学处理：采用ＳＰＳＳ１０．０统计分析软件分析，资料采用ｘ 检验或Ｆｉｓｈｅｒ精确概率计算。Ｐ＜０．０５为差异有显著性。 ２结果 Ｓｍａｄ２主要在胞浆内表达，镜下见阳性细胞胞浆呈棕色。Ｓｍａｄ４，７ Ｓｍａｄ的信号转导通路发挥负调控作用。 Ｓｍａｄ蛋白作为ＴＧＦ—Ｂ受体后下游信号转导分子，其失活或突变同 样可以导致ＴＧＦ一口生长抑制作用消失，与肿瘤的发生密切相关。 Ｓｍａｄ４／ＤＰＣ４是最早发现的Ｓｍａｄ的异常，结直肠癌常伴有该染色体的 缺失或突变。在结直肠癌中常有Ｓｍａｄ２基因的失活。Ｓｍａｄ２或Ｓｍａｄ４／ ＤＰＣ４在肿瘤中通过错义突变、无义突变、小的缺失、移码突变或整条染色 体相关区域的缺失而失活。Ｗｏｒｄｆｏｒｄ等Ｌ．］证实了结直肠癌中１８ｑ２１等 位基因的缺失导致了Ｓｍａｄ４的突变。Ｓｍａｄ２、４的失活导致了ＴＧＦ—Ｂ介 导的细胞生长、凋亡过程受损。Ｚｈｏｕ等［５］在人类结直肠癌细胞中用基因 同源重组设计删除Ｓｍａｄ４基因后，导致ＴＧＦ—Ｂ及ＴＧＦ—ｐ家族的活化 素失活，从而使细胞对ＴＧＦ一口信号传导无反应。我们的结果显示 Ｓｍａｄ４在结肠癌组织中的表达水平下降，且有显著性差异，与上述结论一 致。Ｓｍａｄ ７对ＴＧＦ口信号通路起抑制作用。Ｓｍａｄ ７是ＴＧＦ ｐ作用的靶 基因之一可反馈调节ＴＧＦ即Ｓｍａｄ信号通路维护该通路的平衡。Ｓｍａｄ７ 表达的紊乱可影响细胞对ＴＧ耶的应答从而促进细胞的恶性化进展［６，７］。 国内学者在胰腺肿瘤中亦发现Ｓｍａｄ ７表达异常［８］，本研究发现Ｓｍａｄ ７ 在结肠癌中表达明显增高与上述结果一致。对ＴＧＦ一￣／Ｓｍａｄ信号通道 在肿瘤中的研究，有助于阐明肿瘤发生发展的机制，并对肿瘤的治疗提供 新的途径。 主要在胞质及胞核内表达，显微镜下见阳性细胞胞质或胞核呈棕黄色。 Ｓｍａｄ２，４，７在癌旁组织中都有表达，其中Ｓｍａｄ２，７在肠癌组织中的表达 参考文献 １－１３ Ｉｔｏｈ Ｓ，Ｉｔｏｈ Ｆ，Ｇｏｕｍａｎｓ ＭＪ，ｅｔａ１．Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｏｆ ＴＧＦ￣ｆａｍｉｌｙ ｍｅｒｅ— ｂｅｒｓ ｔｈｒｏｕｇｈ Ｓｍａｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ［Ｊ］．Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ，２０００，２６７（２４）：６９５４ —６９６７ 均高于高于其相应的癌旁组织（附表１，图１～４），差异具有显著性。 Ｓｍａｄ４在肠癌组织中的表达则低于其相应的癌旁组织，差异具有显著性。 表１ Ｓｍａｄ２。４。７在结直肠癌组织及癌旁组织的表达 ［２３ Ｐａｓｃｈｅ Ｂ．Ｒｏｌｅ ｏｆ ＴＦＧ￣ｉｎ ｃａｎｃｅｒ［Ｊ３．Ｊ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ，２００１，１８６（２）： １５３—１６８ ［３］Ｍｉｙａｚｏｎｏ Ｋ，ＴｅｎＤｉｊｋｅ Ｐ，Ｈｅｌｄｉｎ ＣＨ．ＴＧＦｌＳｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｂｙ Ｓｍａｄ ｐｒｏ— ｔｅｉｎｓＩ－Ｊ］．Ａｄｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０００，７５（１）：１１５ １５７ ［４］Ｗｏｏｄｆｏｒｄ Ｒｉｃｈｅｎｓ ＫＬ，Ｒｏｗａｎ ＡＪ，Ｇｏｒｍａｎ Ｐ，ｅｔａ１．ＳＭＡＤ４ ｍｕｔａ— ｔｉｏｎｓ ｉｎ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｐｒｏｂａｂｌｙ ＯＣＣＵｒ ｂｅｆｏｒｅ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ ｉｎｓｔａ— ｂｉｌｉｔｙ，ｂｕｔ ａｆｔｅｒ ｄｉｖｅｒｇｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｐａｔｈｗａｙ ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，２００１ Ａｕｇ １４；９８（１７）：９７１９—２３ ［５］ Ｚｈｏｕ Ｓ，Ｂｕｃｋｈａｕｈｓ Ｐ，Ｚａｗｅｌ Ｌ，ｅｔａ１．Ｔａｒｇｅｔｅｄ ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｍａｄ４ ｓｈｏｗｓ ｉｔ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒｂｅｔａ ａｎｄ ａｃｔｉｖｉｎ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，１９９８ Ｍａｒ ３；９５（５）：２４１２—６ 图１ Ｓｍａｄ２在肠癌组织中的表达 图２ Ｓｍａｄ４在肠癌组织中的 表达图３ Ｓｍａｄ７在肠癌组织中的表达 ３讨论 肿瘤是一类细胞周期病。ＴＧＦ—Ｂ通过诱导细胞周期ＧＩ期的停顿， ［８３ Ｂｏｕｌａｙ ＪＬ，Ｍｉｌｄ Ｇ，Ｒｅｕｔｅｒ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｃｏｐｙ ｓｔａｔｕｓ ｏｆ １８ｑ２１ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｓｈｏｗｓ ｆｒｅｑｕｅｎｔ ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ＭＡＤ７［Ｊ］． Ｇｅｎｅｓ Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ Ｃａｎｃｅｒ，２００１ Ｊｕ１；３１（３）：２４０—７ ［７］Ｈａｌｄｅｒ ＳＫ，Ｂｅａｕｃｈａｍｐ ＲＤ，Ｄａｔｔａ ＰＫ．Ｓｍａｄ７ ｉｎｄｕｃｅｓ ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃ— ｉｔｙ ｂｙ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ＴＧＦ—ｂｅｔａ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏ— 对细胞增生起负调节作用。Ｓｍａｄ家族是转化生长因子信号转导通路的 下游信号分子。ＴＧ即一ＴＧＦ３受体一细胞内信号分子一调节基因转录一 细胞生长抑制、分化或凋亡，这一通路中的任一环节异常都会导致细胞异 常增殖致肿瘤发生口］。ＴＧＦ￣Ｉ信号的丧失能诱发肿瘤发生，ＴＧＦ￣ｔ不能发 挥它的生长抑制作用，关键在于它的信号转导通路发生障碍。具体是 ＴＢＲ，Ｓｍａｄ家族发生突变和功能失活。信号分子Ｓｍａｄ蛋白可分为３种 类型：①受体调节型Ｓｍａｄ（Ｒ—Ｓｍａｄ），包括Ｓｍａｄｌ，２，３，５，８及果蝇的 Ｍａｄ。②共同介质型Ｓｍａｄ（ｃｏｍｍｏｎ Ｓｍａｄ），包括Ｓｍａｄ４和果蝇的Ｍｅｄｅ－ 保护作用。 笔者选择胞二磷胆碱作为对照药物，是由于它们在临床应用治疗新 生儿ＨＩＥ时问日久，可改善缺血缺氧引起的脑代谢的变化及促进脑细胞 功能的恢复，其疗效已得到了充分的肯定并作为ＨＩＥ治疗的常用药 物［３＿。本研究通过临床神经症状恢复时间和动态测定ＮＢＮＡ评分来判 ｓｉｓ［Ｊ］．Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．２００５ Ｊｕｌ １；３０７（１）：２３１—４６．Ｅｐｕｂ ２００５ Ａｐｒ １９ ［８］ 郑建明，朱明华，倪灿荣等．胰腺上皮内瘤变和胰腺癌组织中ＴＧＦ一 ￣３／Ｓｍａｄ信号通路相关蛋白表达［Ｊ］．临床与实验病理学杂志，２００５ ｊｕｎ，２０（３）：３２７—３３１ 作者单位：４３００２２湖北省武汉市第一医院胃肠外科 之一。 参考文献 ［１３ 杨于嘉，姚裕家整理．新生儿缺氧缺血性脑病诊断标准［Ｊ］．中国当 代儿科杂志，２００５．７（２）：９７～９８ ［２］鲍秀兰，虞人杰，李着算．应用２Ｏ项新生儿行为神经测定预测窒息 儿的预后［刀．临床儿科杂志，１９９６，１４（１）：８ 断患儿病情轻重、评价患儿对治疗的反应，以及评估预后。结果证实， ＨＩＥ急性期应用脑蛋白水解物治疗可以达到和胞二磷胆碱治疗相同的疗 效（Ｐ＞０．０５），均能在７～１０ｄ使神经症状恢复正常，在生后２周ＮＢＮＡ ［３３周丛东，宋琳琳．新生儿缺氧缺血性脑病／／金汉珍；黄德珉；官希吉． 实用新生儿学［Ｍ］．３版．北京：人民卫生出版社，２００３：７６２—７７１ 作者单位：５４２７００广西贺州市富川瑶族自治县妇幼保健院 评分绝大多数在正常范围内。脑蛋白水解物同样可以促进ＨＩＥ患儿急 性期的恢复，缩短ＨＩＥ的疗程，是治疗新生儿ＨＩＥ可供选择的有效药物 ８３—
