维普资讯 http://www.cqvip.com 沈阳医学院学报Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｈｅｎｙａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ第１０卷第１期２００８年３月 ・ ７ ・ 脂多糖致大鼠急性肺损伤早期Ｉ型前胶原羧基端肽的表达 高鸿关 ，焦光宇 ，李胜歧 （１．沈阳医学院奉天医院呼吸科，辽宁沈阳１１００２４；２．中国医科大学盛京医院呼吸科） ［摘要］目的：观察脂多糖（ＬＰＳ）致大鼠急性肺损伤（ＡＬ１）早期是否存在肺纤维增生，探讨其在ＡＬｌ发病机制中的作用。 方法：将２７只ｓＤ大鼠随机分成３组，其中对照组为气管内滴注ＮＳ（生理盐水）１２ｈ后取材，ＬＰＳ。组、ＬＰＳ２组为气管内滴注 ＬＰＳ １，０ｍｌ／ｋｇ（浓度为１００１￣ｇ／ｍ１）后分别于１２ｈ、２４ｈ取材。用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）方法测定血清及肺泡灌洗液 （ＢＡＬＦ）中Ｉ型前胶原羧基端肽（Ｐ Ｉ ｃＰ）的浓度。结果：ＬＰｓ２组大鼠血清Ｐ Ｉ ｃＰ浓度为（６４，７５±１１，９７） Ｌ显著高于对照 组（１２，３８±３，５９） ｇ／Ｌ和ＬＰＳｌ组（１３，９６±４，３０） ｓ／Ｌ（Ｐ＜０，０５），而ＬＰｓｌ组和对照组间差异无显著性（Ｐ＞０，０５）；ＬＰＳ２组大 鼠ＢＡＬＦ中Ｐ Ｉ ｃＰ浓度为（３５．２６±３，３２） ｇ／Ｌ显著高于对照组（６．９０±１．９９） ｇ／Ｌ和ＬＰＳｌ组（６．９２±２，５０） Ｌ（Ｐ＜０，０５）， 而对照组和ＬＰＳｌ组间差异无显著性（Ｐ＞０，０５）。结论：ＬＰＳ致大鼠Ａｕ后２４ｈ血清及ＢＡＬＦ中Ｐ Ｉ ＣＰ浓度显著增高提示ＡＬｌ 早期肺纤维增生存在。 ［关键词］脂多糖；急性肺损伤；Ｉ型前胶原羧基端肽 ［中图分类号］Ｒ５６２，２５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００８－２３４４（２００８）０１—０００７—０３ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｔｙｐｅ Ｉ Ｐｒｏｃｏｌｌａｇｅｎ Ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎ Ｒａｔ ｗｉｔｈ Ｅａｒｌｙ Ａｃｕｔｅ Ｌｕｎｇ Ｉｎｊｕｒｙ Ｃａｕｓｅｄ ｂｙ Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｈａ－ ｒｉｄｅ ＧＡＯ Ｈｏｎｇ—ｍｅｉ ，ＪＩＡＯ Ｇｕａｎｇ—ｙｕ ，ＬＩ Ｓｈｅｎｇ—ｑｉ （１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｆｅｎｇｔｉａｌｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ａｆｉｆｌｉａｔｅｄ ｔｏ Ｓｈｅｎｙａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ １ １００２４，Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｒｅｓｐｉｒａ— ｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈｅｎｇｊｉｎｇ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ａｆｉｆｌｉａｔｄｅ ｔｏ Ｃｈｉｎａ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ｏｂｊｅｃｆｌｖｅ：Ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｆｉｂｒｏｐｍｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｃｃｕｌｔｓ ｅａｒｌｙ ｉｎ ｔｈｅ ａｃｕｔｅ ｌｕｎｇ ｉｎｊｕｒｙ（Ａｕ）ｃａｕｓｅｄ ｂｙ ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｈａｒｉｄｅ （ＬＰＳ），Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｗｅｎｔｙ—ｓｅｖｅｎ ＳＤ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ３ ｇｒｏｕｐｓ ｒａｎｄｏｍｌｙ，ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｉｎｓｔｉｌｌｅｄ ｓｌａｉｎｅ ｉｎｔｏ ｔｒａｃｈｅａ ｆｏｒ １２ｈ；ａｎｄ ｔｈｅ ｌｕｎｇ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｍａｄｅ．Ｔｈｅ ＬＰＳｌｇｒｏｕｐ ｎａｄ ＬＰＳ２ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｉｎｓｔｉｌｌｅｄ ＬＰＳ １．０ ｍｌ／ｋｇ（１Ｏ０￣ｇ／ｍ１）ｆｏｒ １２ｈ ａｎｄ ２４ｈ ｒｅ— ｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ａｎｄ ｔｈｅ ｌｕｎｇ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｍａｄｅ．Ｔｙｐｅ Ｉ ｐｒｏｃｏｌｌａｇｅｎ ｐｅｐｔｉｄｅ（Ｐ Ｉ ＣＰ）ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＥＬＩＳＡ ｉｎ ｓｅｒｕｍ ｎａｄ ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌｒａ ｌａｖａｇｅ ｌｆｕｉｄ（ＢＡＬＦ）．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ ｓｅｒｕｍ Ｐ Ｉ ＣＰ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｉｎ ＬＰＳ２ ｇｒｏｕｐ（６４．７５±１１．９７） ｇ／Ｌ，ｗａｓ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（１２．３８土３．５９） ｓ／Ｌ ａｎｄ ＬＰｓｌ ｇｒｏｕｐ（１３．９６土４．３０） ｇ／Ｌ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｎａｄ ＬＰＳＩ ｇｒｏｕｐ ｈａｄ ｎｏ ｓｉｎｇｉｉｆｃａｎｔ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＞０．０５）．Ｔｈｅ ＢＡＬＦ Ｐ Ｉ ＣＰ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｉｎ ＬＰＳ２ ｇｒｏｕｐ（３５．２６±３．３２） ｇ／Ｌ，ｗａｓ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（６．９０土１．９９） ｇ／Ｌ ａｎｄ ＬＰｓｔ ｇｒｏｕｐ（６．９２土２．５０） ｓ／Ｌ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｔｏｒｌ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ＬＰＳｔｇｒｏｕｐ ｈａｄ ｎｏ ｓｉｇ— ｎｉｉｆｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＞０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ：Ｔｈｅ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｏｆ Ｐ Ｉ ＣＰ ｉｎ ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ＢＡＬＦ ａｆｔｅｒ ２４ｈ ｉｎ ＡＬＩ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ ＬＰＳ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｔｈｅ ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ ｏｆ ｌｕｎｇ ｆｉｂｒｏｐｍｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｈａｒｉｄｅ（ＬＰＳ）；ａｃｕｔｅ ｌｕｎｇ ｉｎｊｕｒｙ（ＡＬ１）；ｔｙｐｅ Ｉ ｐｍｃｏｌｌａｇｅｎ ｐｅｐｔｉｄｅ（Ｐ Ｉ ＣＰ） 急性肺损伤（Ａｕ）被认为是急性呼吸窘迫综合 物中心提供，雌雄不拘，体重（２７５±２５）ｇ，饲养于洁 征（ＡＲＤＳ）的早期表现。Ａｕ发展过程中肺纤维增 净、温控的动物中心实验室以避免肺部感染的发 生可以通过增加呼吸膜的厚度进而影响早期气血 生，正常进食水。 交换，减小肺顺应性，影响预后。而Ｉ型前胶原羧 １．２主要试剂 器材①脂多糖ＬＰＳ：Ｅ．ｃｏｌｉ，内毒 基端肽（Ｐ Ｉ ＣＰ）是胶原合成过程中的水解产物，可 素０５５：Ｂ５ ＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ．Ｃｏ）。②大鼠血清及上清液 以反映Ｉ型胶原的合成情况。本实验通过检测脂 Ｐ Ｉ ＣＰ酶联免疫吸附试剂盒（美国进口分装，购于 多糖（ＬＰＳ）致大鼠Ａｕ早期（２４ｈ内）血清及肺泡灌 大连泛邦生物技术公司）。③低温离心机：Ｈｅｔｔｉｃｈ 洗液（ＢＡＬＦ）中Ｐ Ｉ ＣＰ的含量，来检测ＡＬＩ／ＡＲＤＳ ３２Ｒ（德国生产）。④酶标仪（芬兰雷博公司生产）。 早期是否有肺纤维增生的存在，并为早期抗纤维化 １．３实验方法 治疗提供理论依据。 １．３．１实验动物的分组及处理将２７只ｓＤ大鼠 １材料与方法 随机分成３组：对照组（９只）、ＬＰＳ．组（９只）、ＬＰＳ２ 组（９只）。对照组气管内滴注生理盐水１．０ｍｌ／ｋｇ， １．１实验动物２７只ＳＤ大鼠由中国医科大学动 维普资讯 http://www.cqvip.com ・ ８ ・ 沈 阳 医 学 院学 报 第１Ｏ卷 ＬＰＳ，组及ＬＰＳ 组气管内滴注ＬＰＳ １．０ｍｌ／ｋｇ（浓度为 ｌＯ０１ｘｇ／ｍ１）建立Ａｕ动物模型。将滴注ＬＰＳ的大鼠 随机分成两组，其中给药后观察１２ｈ取材的为ＬＰＳ 组，给药后观察２４ｈ取材的为ＬＰＳ 组。 １．３．２肺损伤的评价肺损伤严重程度可根据以 下标准判定：（１）测定肺湿重／干重（Ｗ／Ｄ）比值：结 扎左主支气管剪取一部分左肺组织称湿重（Ｗ），然 后置于６ｏ ｏ【＝温箱中，７天后称干重（Ｄ），求得Ｗ／Ｄ。 （２）血清和ＢＡＬＦ白蛋白测定：动物处死后，心脏采 血，离心后取血清测白蛋白；右主支气管进行肺泡 灌洗，首次灌注ＰＢＳ液１５。０ｍｌ／ｋｇ，以后灌注量为前 一次的回收量，共灌注４次，每次冲洗３遍，将回收 的ＢＡＬＦ混合计量，离心后测上清液白蛋白浓度。 （３）观察肺组织病理表现：取右肺置于１０％甲醛溶 液中固定１２ｈ，常规脱水、包埋、制成蜡块，经切片、 ＨＥ染色，观察肺组织病理表现。 １．３．３血清及肺泡灌洗液Ｐ Ｉ ＣＰ浓度测定Ｐ Ｉ ＣＰ采用酶联免疫吸附法测定，按照试剂盒说明书 进行操作，反应结束后１５ｍｉｎ内在４５０ｎｍ处读ＯＤ 值。以ＯＤ值为纵坐标，以标准品浓度为横坐标，绘 制标准曲线。根据血清样品的ＯＤ值可在标准曲线 上查出其浓度。 １．４统计学分析结果以均数±标准差（ ±ｓ）表 示；采用ＳＰＳＳ１１．５统计软件，多组间比较用方差分 析，组间比较用ｑ检验，Ｐ＜０．０５为差异有显著性。 ２ 结果 ２．１ ＬＰＳ致大鼠ＡＬｌ评价 ２．１．１肺组织的病理改变ＮＳ对照组：肺组织大 体无异常所见。光镜可见肺泡结构完整，未见明显 病变（图１）。ＬＰＳ，组：大体观可见所有肺组织均有 肿胀，背膜光亮，有部分可见被膜下出血点。光镜 可见肺内弥漫性炎症细胞浸润，以中性粒细胞为 主，肺泡腔内有红细胞渗出，有局限性肺气肿和肺 不张，肺毛细血管扩张呈不规则形，毛细血管及支 气管周围间隙增宽、水肿；肺泡间隔及肺泡间质轻 度水肿（图２）。ＬＰＳ 组：大体观见肺组织发黄。光 镜下肺泡腔内可见中性粒细胞浸润，并有少量淋巴 细胞、巨噬细胞浸润，肺泡内及间质均有红细胞浸 润，部分肺泡壁破坏、肺泡融合形成局灶性肺气肿， 有部分肺泡不张；肺泡间隔明显增厚，间质增生，有 淋巴细胞、巨噬细胞及成纤维细胞浸润，有毛细血 管扩张，形状不规则（图３）。 ２。１。２ 血清、ＢＡＬＦ中自蛋白含量 如表１所示， 一翌 图２ ＬＰＳｌ组肺组织毛细血管扩张，肺泡腔内可见中性粒细胞 和红细胞浸润、肺水肿和轻度问质增厚ＨＥ×１００ 图３ ｕ）Ｓ２组肺组织水肿Ｉ司质增厚，肺泡腔内明显 中性粒白细胞浸润ＨＥ×１００ 对照组及各实验组间血清白蛋白差异无统计学意 义（Ｐ＞０．０５）。ＢＡＬＦ中自蛋白在损伤１２ｈ浓度明 显高于对照组，在２４ｈ浓度有所降低，但仍高于对 照组；三组间的差异均具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）， 说明富含蛋白的水肿液渗入肺泡腔。 ２．１．３肺组织湿重／干重（Ｗ／Ｄ） 如表１所示，肺 Ｗ／Ｄ表明：肺损伤１２ ｈ组动物与对照组相比Ｗ／Ｄ 明显升高（Ｐ＜０．０５），而２４ｈ组与对照组无差异（Ｐ ＞０．０５），说明损伤１２ｈ组肺水肿最明显。 表１ Ａｕ大鼠不同时相血清、ＢＡＬＦ中白蛋白含量和 肺组织湿重／干重（：±ｓ） 注：组问比较１）Ｐ＞０．０５；２）３）Ｐ＜０．０５ ２．２血清及ＢＡＬＦ中Ｐ Ｉ ＣＰ浓度 如表２所示， 血清及ＢＡＬＦ中Ｐ Ｉ ＣＰ浓度在损伤１２ｈ与对照组 比较无差异（Ｐ＞０。０５），而损伤２４ｈ其浓度显著高 维普资讯 http://www.cqvip.com 第１期 高鸿美等．脂多糖致大鼠急性肺损伤早期Ｉ型前胶原羧基端肽的表达 ・９・ 于对照组，具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。 表２血清及ＢＡＬＦ中Ｐ Ｉ ＣＰ含量（ ±ｓ） 注：组间比较１）Ｐ＞Ｏ．０５；２）Ｐ＜Ｏ．０５ ３ 讨论 本研究通过气管内注入ＬＰＳ的方法建立Ａｕ 动物模型，发现ＢＡＬＦ中蛋白含量明显增加，并且肺 湿重／干重明显高于对照组，说明富含蛋白的水肿 液渗人肺泡内，结合实验动物的病理表现显示Ａｕ 动物模型建立成功。 ＡＲＤＳ和Ａｕ是以顽固性低氧血症，呼吸频数 和呼吸窘迫为主要表现的临床综合征，ＡＲＤＳ的病 理过程可以分为三个阶段：渗出期、增生期和纤维 化期，病死率高，肺纤维化是直接或间接导致ＡＬＩ／ ＡＲＤＳ患者死亡的原因之一。积极逆转肺纤维增生 可能会改善Ａｕ／ＡＲＤＳ的预后。胶原合成是肺纤 维化形成的重要标志。胶原蛋白的合成同时释放 可溶性的Ｎ一末端及Ｃ一末端前胶原肽。因此，测定 可溶性Ｎ一末端及ｃ一末端前胶原肽，可以作为胶原 合成的标志物¨ｊ。肺间质以Ｉ、Ⅲ型胶原为主，Ｐ Ｉ ＣＰ为Ｉ型前胶原羧基端肽。Ｐ Ｉ ＣＰ的产生仅与Ｉ 型胶原合成有关，在ＢＡＬＦ中的含量不受Ｉ型胶原 降解的影响 ｊ，能更好地反映Ｉ型胶原的合成情 况。本实验检测了ＬＰＳ致大鼠急性肺损伤不同时 段血清及ＢＡＬＦ中Ｐ Ｉ ＣＰ的浓度，其结果显示在 ＬＰＳ致大鼠急性肺损伤１２ｈ组血清及ＢＡＬＦ中Ｐ Ｉ ＣＰ浓度无显著增高，而在损伤２４ｈ Ｐ Ｉ ＣＰ浓度显 著高于正常对照组，肺组织病理结果显示２４ｈ肺组 织损伤程度比１２ｈ肺损伤程度严重，说明：前胶原 肽主要来自损伤的肺组织，损伤愈重Ｐ Ｉ ＣＰ浓度增 加愈明显。Ｃｈｅｓｎｕｔｔ等学者研究认为ＡＲＤＳ所致 的肺水肿、肺损伤导致可溶性的前胶原肽进入肺 泡，ＡＲＤＳ早期开始肺纤维增生 ］。Ｍａｒｓｈａｌｌ等研 究表明在ＡＲＤＳ早期ＢＡＬＦ中，非存活组的Ⅲ型前 胶原氨基端肽（ＰＩＩＩＮＰ）浓度明显高于存活组 ｊ。 另外有研究表明ＢＡＬＦ中的前胶原肽浓度是反映 ＡＲＤＳ患者预后的指标之一［５ ］。我们研究也显示 ＡＬＩ大鼠２４ｈ ＢＡＬＦ中Ｐ Ｉ ｃＰ浓度显著高于对照组 和损伤１２ｈ组，而２４ｈ组比１２ｈ组肺损伤严重；说明 ＢＡＬＦ中Ｐ Ｉ ＣＰ浓度愈高，肺损伤愈重。 本研究显示ＡＬＩ的肺纤维增生过程在早期渗 出期就已经启动，表现为胶原合成增加，从而推测 如果在ＡＬＩ／ＡＲＤＳ早期干预胶原合成可能有利于 逆转其预后，降低死亡率。至于机体是如何启动胶 原合成基因、受何种因素影响还有待于进一步研 究。 参考文献： ［１］Ｈｏｒｓｌｅｖ－Ｐｅｔｅｒｓｅｎ Ｋ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ａｓ ｍ￣ｒｋｅｒｓ ｆｏｒ ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ ｔｉｓｓｕｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｄａｎｉｓｈ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ，１９９０，３７：３０８—３２９． ［２］Ａｒｍｓｔｏｎｇ Ｌ，Ｔｈｉｃｋｅｔｔ ＤＲ，Ｍａｎｓｅｌｌ ＪＰ，ｅｔ ａ１．Ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｃｏｌｌａｇｅ ｔｕｒｎｏｖｅｒ ｉｎ ｅａｒｌｙ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｄｉｓｔｅｒｓｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｒｅ－ ｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ，１９９９，１６０：１９１０—１９１５． ［３］Ｃｈｅｓｎｕｔｔ ＡＮ，Ｍａａｔｔｈａｙ ＭＡ，Ｔｉｂａｙａｎ ＦＡ，ｅｔ ａ１．Ｅａｒｌｙ ｄｅｔｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｙｐｅⅢｐｒｏｅｏｌｌｇａｅｎ ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｌｕｎｇ ｉｎｊｕｒｙ：ｐａｔｈｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎｄ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｃｅ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ，１９９７， １５６：８４０—８４５． ［４］Ｍａｒｓｈａｌｌ ＲＰ，Ｂｅｌｌｉｎｇａｎ Ｇ，Ｗｅｂｂ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｆｉｂｍｐｒｏｌｉｆｅｍｔｉｏｎ ＯＣＣＵｒｓ ｅａｒｌｙ ｉｎ ｔｈｅ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｄｉｓｔｒｅｓｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ａｎｄ ｉｍｐａｃｔｓ ｏｎ ｏｕｔ－ ｃｏｍｅ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｆｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ，２０００，１６２：１７８３—１７８８． ［５］Ｃｈｅｓｎｕｔｔ ＡＮ，Ｍａａｔｔｈａｙ ＭＡ，Ｔｉｂａｙａｎ ＦＡ，ｅｔ ａ１．Ｅａｒｌｙ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｙｐｅⅢｐｒｏｅｏｌｌｇａｅｎ ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｌｕｎｇ ｉｎｊｕｒｙ：ｐａｔｈｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎｄ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｃｅ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ，１９９７，１５６： ８４０—８４５． ［６］Ｃｌｒａｋ ＪＧ，Ｍｉｌｂｅｒｇ ＪＡ，Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇ ＫＰ，ｅｔ ａ１．Ｔｙｐｅ ＩＲ ｐｒｏｃｏｌｌｇａｅｎ ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎ ｔｈｅ ａｄｕｈ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｄｉｓｔｒｅｓｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ：ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎ－ ｃｒｅａｓｅｄ ｒｉｓｋ ｆｏｒ ｄｅａｔｈ［Ｊ］．Ａｎｎ Ｉｎｔ Ｍｅｄ，１９９５，１２２：１７—２３ ［７］Ｗａｒｅ ＬＢ，Ｍａｔｔｈａｙ ＭＡ．Ｔｈｅ ｃａｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｄｉｓｔｒｅｓｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ［Ｊ］． Ｎｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ，２０００，３４２：１３３４—１３４７． ［收稿日期］２００７—０９—１０