简介流式细胞仪……………………………………………………3 流式细胞仪的临床检验项目 淋巴细胞亚群分析……………………………………………………………4
肿瘤细胞DNA检测分析………………………………………………………5 白血病及淋巴瘤免疫分型……………………………………………………6 残余白血病检测……………………………………………………………..6 网织红细胞计数……………………………………………………………..7 造血干细胞计数……………………………………………………………..7 血小板疾病及活化血小板检测……………………………………………..8 HLA-B27检测…………………………………………………………………8 器官移植的配型及免疫状态监控…………………………………………..9 AIDS诊断及治疗监控……………………………………………………….9
流式细胞仪的临床/医学研究……………………………………10 流式细胞技术的发展及国内现况……………………………….10 建议流式细胞仪之机型----BD公司FACSCalibur
仪器主要特点……………………………………………………………..11
配套设施（计算机、软件、试剂、样本制备仪、售后服务）………..12 仪器主要技术参数…………………………………………………………15
BD公司全球及中国业务介绍 BD公司流式细胞仪培训计划 BD公司推荐配置单
BD公司仪器与其他厂家仪器比较表
一、简介流式细胞仪
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（一）流式细胞仪概念
流式细胞术（Flow Cytometry ，FCM）是一种对处在液流中的细胞或其它生物微粒（如细菌）逐个进行多参数的快速定量分析和分选的技术。
简言之，流式细胞仪是测量染色细胞标记物荧光强度的细胞分析仪，是在单个细胞分析和分选基础上发展起来的对细胞的物理或化学性质，如大小、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等进行快速测量并可分类收集的高技术，FCM以其快速、灵活、大量、灵敏和定量的特色，广泛应用于基础研究和临床实践各个方面，包括细胞生物学、肿瘤学、血液学、免疫学、药理学、遗传学及临床检验学等，在各学科领域发挥着重要的作用。
（二）原理
待测样本的细胞悬液，在鞘液的包围和约束下，细胞排成单列高速由流动室喷嘴喷出，形成细胞液柱。当液柱通过检测区，在入射的激光束照射下产生前向散射光（FSC）和侧向散射光（SSC），它们分别反映细胞大小和颗粒度，根据这些特性可以将细胞分类。经一种或几种特殊荧光标记的样本，在激光束的激发下所产生的特定荧光，可被光学系统检测并输送到计算机进行分析，得到细胞相应的各种特性。
（三）流式细胞仪检测的细胞特性
细胞结构组成 大小 粒度 DNA、RNA含量 蛋白质含量 钙离子、pH值、膜电位 细胞功能 细胞表面、胞浆、核特异性抗原 细胞活性 胞内细胞因子 激素结合位点 酶活性 二、 流式细胞仪的临床检验项目
目前在国内最常见的临床应用有两大类：一为肿瘤细胞的DNA含量析； 另一为细胞表面的表型测定，包括淋巴细胞亚型分析、免疫功能监测、白血病和淋巴瘤免疫分型、残余白血病检测、以及HLA-B27组织抗原检测等等。
1、淋巴细胞亚群分析
淋巴细胞亚群分析可以通过相对计数、绝对计数与率的变化监控疾病状态下的免疫状况（如肿瘤、感染性疾病、免疫性疾病等），以此辅助诊断、追踪病情发展及决定用药时机。
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检测原理：利用各种单克隆抗体与淋巴细胞表面的抗原结合，再配合多色荧光染料，即可以把各种不同功能的淋巴亚群区分开来，进而得到各亚群的相对比例。最常检测的亚群包括T细胞（CD3）、B细胞（CD19）、NK细胞（CD16+56）、辅助性T细胞（CD3+CD4+）和抑制性T细胞（CD3+CD8+）等。
应用实例：SimulSET系统利用CD14/CD45设门技术精确检测淋巴细胞亚群 比例。
* 其中绿色细胞群体为淋巴细胞，红色为单核细胞，蓝色为粒细胞。 2、DNA分析
肿瘤细胞的DNA倍体分析是流式技术另一重要应用，临床上可对一些恶性肿瘤进行早期诊断，跟踪随访和早期治疗，大大提高一些肿瘤的治愈率和生存率。
检测原理：正常人体细胞的DNA含量是二倍体，细胞群体具有特定的增殖比例。通过检测细胞的DNA含量和增殖比例，可以了解细胞群体的倍体性和增殖能力。具体操作时，先将实体组织制备成单细胞悬液，用固定或去污剂在细胞膜上打孔，使DNA特异的荧光染料如PI（碘化丙啶）导入细胞核，PI和DNA缄基对特异结合后上机检测PI的荧光强度，并进行数据分析。
应用实例：乳腺癌病人的手术标本分析图。
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*其中红色群体为二倍体，黄色群体为异倍体。
3、
白血病和淋巴瘤免疫分型
正常白细胞在其分化过程中，随着系列的不同、成熟阶段的差异，会在细胞膜表面表达不同的分化抗原。白血病细胞则在癌变的过程中，丧失了正常细胞底系列专一性和分化阶段规律性，在本质上有别于正常骨髓细胞。应用此特点可进行免疫表型分析，以鉴别各种白血病和淋巴瘤，辅助临床诊断、评估疗效和预后。
常用的抗原包括：CD3、CD5、CD7、CD19、CD20、CD22、CD10、HLA-DR、 CD13、CD14、CD33、CD34、GLY-A、MPO等等。 应用实例：利用CD45三色分析急性髓性白血病。
* 左图为正常骨髓，绿色为正常淋巴细胞，深红为单核细胞，玫瑰红为成熟粒细胞，浅蓝为有核红细胞，深蓝为未成熟细胞；右图为急性髓性白血病图形，可见与正常明显的差别。
4、 残余白血病检测
残余白血病是指经过适当的治疗、疾病缓解后仍残留在病人血中的极少量白 血病细胞。通常白血病病人经过化疗后的疾病复发率为60-80%，经过自体或异体骨髓移植后的复发率仍偏高（20-50%）。所以如果能早期检测到复发的迹象，即白血病细胞的再增生，则可以提前给予病人及时恰当的治疗。
依照不同的白血病，选用不同的抗体组合（如下表）来检测残余白血病。流式细胞术可在一万个骨髓细胞中检测到一个白血病细胞；尤其是TdT的应用大大提高了检测灵敏度。
白血病种类 T-ALL B-ALL Pre-B-ALL .
可选择的抗体组合 cyto CD3/TdT CD13/TdT，CD33/TdT cyto μ/TdT 文档
AML CD13/TdT， CD33/TdT， CD7/TdT
5、网织红细胞分析
网织红细胞计数是骨髓红细胞造血功能的重要指标。传统手工计数耗时耗力，缺乏准确性。流式细胞仪网织红细胞计数系统由于采用系统试剂与全自动软件，可在短时内分析大量细胞，低水平网织红细胞也可达到统计分析精度，省时省力，结果正确可靠。
* 左图中红色群体为红细胞，右图利用RNA染料噻唑橙（TO）区分成熟红细胞和网织红细胞。
6、造血干祖细胞检测
在治疗恶性血液病时，大剂量化疗或放疗摧毁有病的骨髓后，干细胞移植保证了健康的干祖细胞重建骨髓，产生正常的血细胞，实体肿瘤病人亦可通过干细胞移植抗衡大剂量化疗导致的致死性血液毒性。与大剂量化疗相配合的干细胞移植已在临床大大提高了某些肿瘤病人的长期存活率，如乳腺癌、儿童神经母细胞瘤、卵巢癌等。另外，干细胞移植与再生障碍想贫血、免疫缺隐、血红蛋白病等非恶性造血系统疾病治疗的相关性也正在研究中。
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* 上图中红色群体是经过多参数设门后精确设定的CD34阳性细胞群体，绿色部分是进行定量计数的标准微球。
7、血小板疾病及活化血小板检测
通过血小板膜糖蛋白的检测可以诊断先天性或获得性血小板疾病如Bernard-Soulier综合征（CD42b-42a），血小板无力症（CD41-CD61），免疫性血小板减少等等。 评价血小板活化程度的应用领域包括：缺血性冠状动脉疾病如心绞痛、心肌梗死、血管成形术、心肺旁路术等；缺血性脑血管病如脑梗塞、TIA、脑动脉硬化等；糖尿病；恶性肿瘤；高血压病；高脂蛋白血症；高粘滞血症；抗血小板药物机制研究与疗效监测；吸烟；情绪性应急等。
应用实例：CD61/CD62P/PAC-1三色标记分析血小板活化。
8、HLA-B27检测
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由流行病学统计结果显示，HLA-B27基因型阳性的人患数个遗传性免疫疾病的机率，比一般人要高很多，以强直性脊柱炎为例，约为87倍。因此HLA-B27检测可以有效帮助临床鉴别诊断强直性脊柱炎等血清阴性骨关节疾病。其他相关性疾病有：遗传性关节炎如Reiter’s综合征, 反应性关节炎，肠性关节炎等。
检测时选用CD3/HLA-B27双标记抗体，圈定T淋巴细胞亚群，再分析其细胞表面是否表现HLA-B27组织抗原。因为T细胞表面只表达ClassⅠ型HLA抗原，可避免ClassⅡ型HLA抗原引起的误差。应用此法无需分离细胞，比传统的微量细胞毒实验节约时间，且检测结果更敏感、客观、容易判读。
9、 器官移植的配型及免疫状态监控
以流式细胞仪进行器官移植前配对（Flow Cytometry Cross Match，FCCM）的优势在于抗体检测的特异性、敏感度以及检测结果和手术成功率之相关一致性。利用多参数测定，可了解受者血中是否有抗供者抗体，此抗体与供者的哪种白细胞反应，以及该抗体是否会造成细胞毒性。移植前的评估包括HLA配型及混合淋巴细胞反应，移植后的评估包括外周血淋巴细胞亚群测定、抗供者抗体检测等等。移植后定期检查外周血淋巴细胞亚群，可以预估排异反应，以及病毒感染等问题。
10、AIDS诊断及治疗监控
由于 特定细胞群体的绝对计数在临床诊断与治疗上具有极大意义，如CD4+细胞绝对计数可辅助HIV监控治疗，也可通过定量标准微球得到亚群的绝对数值。 应用实例：检测艾滋病人血中辅助T细胞和抑制T细胞的比例及绝对数。
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三、 流式细胞仪的临床/医学研究
流式细胞仪应用的灵活性允许临床医生科学家们充分发挥想象，满足他们的临床研究需要：细胞免疫功能、细胞凋亡、胞内细胞因子、胞内Ca2+及 PH值、多药耐药性、寄生虫、细菌、病毒、环境科学等等。
流式细胞仪多参数分析配合细胞分选，可以提供样本的更多有效信息。细胞分选是确认细胞形态、进行后续分子生物学研究(如FISH、PCR等)或细胞功能性研究的理想手段。
四、 流式细胞技术应用的发展及国内现况
从1930年，Caspersson 和Thorell以细胞的计数开始，试图寻找研究细胞的新工具，到1973年，BD公司与美国斯坦福大学合作，研制开发并生产了世界第一台商用流式细胞仪FACS I，流式细胞术进入了一个空前飞速发展的时代。进入九十年代，流式细胞术作为一门生物检测技术已经日臻完善，仪器的硬件平台也已达到稳定的技术状态，科学家们、仪器制造商们又纷纷将研究焦点转向荧光染料的开发、单克隆抗体技术、细胞的制备方法和提高电子信号的处理能力上来，以拓展日趋广泛的应用领域。流式细胞技术的强大生命力植根于生物学、医学的各个领域，正是无数日新月异、变化多样的应用项目在全球范围内推动了流式细胞技术的发展。
自1981年， 北京师范大学生物系引进中国第一台流式细胞仪（FACS Ⅲ， BDIS）至今，各种型号的流式细胞仪在国内安装使用已超过300台，其中BD公司的流式细胞仪近230台（FACSCalibur已超过140台，详见附录2“BD公司国内流式细胞仪用户名单”）。从仪器引入中国二十年的发展历史来看，最早的流式细胞仪大都应用在纯科研领域。随着流式技术的发展，方法学的成熟，尤其是越来越多的用于临床的试剂推出，流式细胞仪已成为国内各大教学医院和医学中心重要的诊断工具，被广泛地应用于新的临床实验上。
五、 建议流式细胞仪之机型----BD公司FACSCalibur：
FDA通过的世界唯一全自动四色台式分选机
FACSCalibur集分析和分选功能为一身，配置灵活，结合自动化的样本处理系统、极宽的试剂选择范围、强大的计算机和软件系统，绝对配合今天高效多能的实验室需要。
FACSCalibur性能卓越，不仅通过其用户友好的整体设计帮助临床医生快速实现常规免疫表型、DNA、网织红细胞、血小板、绝对计数等临床分析，FACSCalibur更以其完美的四色分析和独特的分选功能成为遗传、肿瘤、血液、免疫功能等诸多研究不可或缺的重要工具。
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（一）、FACSCalibur仪器主要特点
• 完美的四色分析系统 BD专利的立体空间激发系统采用双激光实现4色分析，最大程度地减少荧光信号之间的补偿，提高检测灵敏度；双激光的应用大大扩展了染料的选择范围，相应地扩大了仪器的应用领域。
立体空间激发系统为流式细胞仪多色分析设立了行业标准，并使染料的选择更为自由，避免了染料之间的相互干扰。
• 独特的分选及浓缩系统 FACSCalibur是世界上目前唯一的台式分选机。
FACSCalibur采用不同于传统分选方式的“捕获管（catch tuber）”新技术，使整个分选操作极其简便，无需长时间液流稳定，只需设定感兴趣的细胞群体，鼠标轻轻一按就能实现对目标细胞的分选。细胞可分选到试管中，或根据需要直接分选到细胞浓缩系统提供的滤膜或培养皿上。
FACSCalibur分选为全封闭系统，安全性好，可实现无菌分选和细胞培养。 细胞浓缩系统使细胞回收简单方便，减少离心步骤，大大提高细胞回收率。
• 自动化程度高
FACSCalibur以用户为中心的系统设计，从自动化样本处理、自动上样，到按钮式液流控制、自动化软件获取和分析，每个环节操作都保证简便快捷, 并提供准确客观的实验结果，重复性极好。
• 分析速度快 FACSCalibur荧光检测全部采用大型流式细胞仪国际通用的光电倍增管以保证最快的分析速度10000个细胞/秒，避免了使用----导致的低速度。FACSCalibur是目前世界上分析速度最快的台式机。 DNA分析的解决之道
DDM （Doublet Discrimination Module）双粘体辨别模式
通过FL2-W和FL2-A检测分析区别实体组织标本中的粘连细胞群体，最大程度的减少假阳性，是实体组织标本DNA分析不可缺少的工具之一。
• 唯一的双参数阈值设定 最大程度减少无关噪音，增加获取分析速度，从而使含量极微的细胞检测成为可能。
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开机无需等待
开机后即可检测样本。机器无噪音。
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设计灵活，提供多种配置供用户选择
第二根激光、分选及其浓缩系统、自动进样系统等都可以由用户根据实际需要和资金情况自由选配。
（二）、配套设施
1、FACStation数据处理系统
采用最先进的Macintoshi苹果计算机系统，用户友好MacOS界面设计，易学易操作；与PC兼容性好，数据可在PC机上分析；网络功能强大，可与Internet和Intranet连接；不易感染病毒超强图形处理功能，可进行多维多色分析，是处理流式数据最佳的选择。
最新配置Macintosh G4： 512 MRAM； 80GB Hard Disk ；
CD-RW，容量大,为回顾性研究带来方便； 多媒体系统；
17’ 高分辨率纯平显示器
FACStation提供多种功能强大的自动化软件用于数据获取、分析和报告。 并提供多媒体学习光盘。 主软件CellQUEST具有完成所有流式实验的仪器设置、数据获取和统计分析等功能，设计灵活全面，是流式细胞仪系统不可缺少的全能工具。
全面配合各种临床检验的自动化软件系统包括： FACSComp
SimulSET
自动校准仪器设置进行质量控制，自动设置流式双色、三色、四色分析条件，并可选择进行样本设置条件的优化。自动存储仪器条件。
双色淋巴细胞自动化分析：CD45/CD14自动淋巴细胞精确设门与分析；软件内一致性检测作为内在质控；可自行定义抗体组合，灵活方便；自动打印标准化实验室报告、医生报告和总结报告。
MultiSET
三色与四色淋巴细胞自动化分析：提供CD45/SSC淋巴细胞门的手动与自动设置与分析；应用Attractor技术自动检查细胞群体
位置漂移；客户可自定义试剂与抗体组合；绝对值定量简单快速准确；自动打印标准化实验室报告、医生报告和总结报告。
ProCOUNT
造血干祖细胞自动化分析软件；使用ProCOUNT试剂自动获取分析造血干细胞；与TroCOUNT管组合实现绝对计数；操作简单，快速；降低CD34计数的变异；自动打印标准化实验室报告、医生报告和总结报告。
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HLA-B27 自动分析软件；自动获取分析报告全血HLA-B27结果：支持HLA-B27系统试剂；应用FACSLoader组合可实现自动获取批量分析；配合FACSComp 软件进行自动校正；自动打印标准化实验室报告。
ModFIT
Attractor 多色自动快速批量分析软件：独家专利全自动设门技术可快速
准确圈定客户自定义的目的细胞群；最小群体标色算法便于分辨小群体
ReticCOUNT 网织红细胞计数自动化软件：自动设门分析报告网织红细胞计数，检测重
复性好，低水平网织红细胞也可达到可靠的统计精度。
QuantiCALC 标准荧光定量分析：分析获取QuantiBRITE试剂或微球的资料时，FL2轴自
动转化为每个细胞上抗体数（ABC）自动进行荧光定量；无限的条带设置充分满足对所有感兴趣细胞群体的研究；
强大的数据库满足长期研究与大型科研工作需求
Paint-a-gate 相互作用多维资料分析软件：独家专利混色算法可同时分辨与显 示多个细
胞群体；强大的上色工具为研究复杂资料间 相互关系提供帮助。
高精度DNA自动分析软件：快速正确DNA分析；强大的批量分析功能；便捷的数据库输出；自动打印标准化实验室报告。
2、全面的配套试剂
BD公司提供通过FDA标准的体外诊断临床试剂和广泛的科研试剂，并拥有全面的质量控制和质量保证产品线以确保检测结果的可靠性：包括仪器状态、实验方法全程控制、绝对计数控制以及试剂配套中一致性检测等，如：
CaliBRITE微球 配合全自动软件FACSComp可自动进行仪器的灵敏度、补偿等校正，确保仪器正常运行。其设置条件还可用于淋巴细胞分析。
BD Multi-Check 全血质控试剂全程监控免疫表型分析检测结果的准确性。 BD Multi-Check CD4 LOW为艾滋病检测提供标准。
BD Stem Count Control为CD34阳性细胞检测质控物，监控CD34造血干细胞检测结果。
TruCOUNT Control 可确保绝对计数的线性精度。 DNA QC保证DNA 分析的线性与分辨率均达到最佳。 （详见试剂报价单）
另外，PMG、TL、Clontech等BD子公司的涵盖细胞生物和分子生物各领域的试剂供应将满足您多方位的需求。（详见附录2 BD公司全球及中国业务介绍）。
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3、样本制备仪
免疫样本制备仪
BD FACS Sample Process SP-1采用免洗程序，为细胞免疫表型分析提供自动化样本处理，简单易学，安全性好。
DNA样本制备仪
BD公司的Medimachine系统是一套安全的，标准化的样本制备系统，可对植物或动物的实体组织进行自动机械分离，为流式分析、细胞培养、或DNA扩增技术提供高质量的样本，是对各种类型的组织实现标准化的样本处理的最佳选择。 4、售后服务
BD公司深知每一台仪器正常运转的重要性，所以每一台FACSCalibur、每一个软件和每一个试剂背后都有着最及时、最专业的支持。
BD总部率先建立了流式行业第一个在线远程诊断系统，用户通过互联网和BD总部进行实时的网上交流，BD技术支持专家在自己的计算机上看到用户的问题并迅速提出评估和解决方案。
在中国，BD建立了专业资深、经验丰富的工程师队伍和技术支持队伍，为用户提供仪器安装调试、维修保养、技术培训和咨询等服务。另外来自BD、PMG、CLONTECH、Transduction Laboratory等总部科学家们的不遗余力的技术支持也是我们的有力后援。
BDFACS品牌流式细胞仪在中国的二十年发展，拥有由一大批国内知名专家、教授组成的用户群体，他们也成为了BD流式技术在中国推广、发展的主要动力。
BD公司每年召开的用户大会，论文交流和新技术介绍讲座，以及定期出版的Flow Cytometry专业技术杂志保证了用户及时了解最新的技术进展和相互交流。
（三）FACSCalibur仪器主要技术参数：
参数项目 标准激光器 *第二激光器 参数指标 15mw，488nm气冷氩离子激光。用于3色荧光分析 635nm半导体激光 实现完美四色分析 厂家保证激光管寿命≥5000个小时 功能特点 通过双激光立体空间激发方式实现四色荧光分析：即第一激光器激发的三色荧光与第二激光器激发的第四色荧光之间不会互相干扰，最大限度地减少了荧光信号的重叠（各吸收峰相差55nm以上）； 增加了荧光染料的可选择范围 .
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光斑大小 流动室 测量参数 *光电倍增管 最小检测颗粒大小 检测灵敏度 检测分辨率 *样本获取速度 *脉冲处理系统 *分选装置 22 X 66um Laser1 13 X 66um Laser2 430um X 180um FSC，SSC，FL1，FL2，FL3,FL4 光谱检测范围300nm-1100nm 电压150V-990V 0．2um（min） 50um（max） ≤100 MESF CV<2%（全峰宽） >10，000个/秒（标准） BD专利，能同时分析峰值、脉冲积分（面积）及脉冲宽度 300个/秒 可选荧光染料：FITC、PE、PerCP*、PI、 APC、CY-5、AO等 电压较小，灵敏度大 用脉冲宽度和面积可区分双连体细胞（如假四倍体细胞），减少假阳性结果 目前唯一可做细胞分选的台式流式细胞仪，操作简单，无须长时间稳定液流。 分选纯度达99.99%， 全封闭液流系统实现无菌分选。 苹果电脑具有超强的图形处理功能； 100MB Zip外存盘，体积小，容量大，为回顾性研究带来方便； 多媒体系统； 不易感染病毒 与PC机的兼容性的解决之道：免费下载的WINMDI2.6在PC上轻松分析苹果获取的数据。 主软件CellQuest是在视窗平台下开发，集获取，分析和分选为一体，主要特点： 1. 多窗口 2. 具有实时分析（on line）功能 3. 自动软件方便临床试验，保证1分钟之内出报告 *工作站 FACStation *软件系统 Macintosh G4/733 256M RAM 40GB Hard Disk CD-RW 100MB Zip Drive Mac OS 9.1 具有网络功能，能与普通微机连网 主软件： CellQuest 多种全自动软件： FACSComp Modifit Attractors SimulSET MultiSET .
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HLA-B27 ProCOUNT Paint-A-GATE RetiCOUNT QuantiBRITE（可选） CBA（可选） 直方图和点图1024和256 channel 坐标分辨率 1024X1024 channel 256X256 channeL *进样口与检15cm 测点距离 *自动清洗系统 *鞘液 滤光片 全程质控 B-D专利 一般生理盐水或双蒸水 可更换 距离短，所需样本量少，节约单抗； 距离短，减少了样本之间的相互干扰 换样时自动吸去管道内剩余样本，避免样本之间的相互干扰 降低了实验成本 可根据实验者采用的标记荧光素的不同发射光波长选用合适的光学滤片 CaliBRITE Beads仪器校正标准品 FACSComp全自动仪器校正软件 Multi-Check 人淋巴细胞表面抗原质控品 Stem cell Control 造血干细胞质控品 RetiCOUNT Control 网织红细胞质控品 LeuCOUNT PLT Control LeuCOUNT RBC Control LeuCOUNT Combo Control FACSCalibur 获得 FDA认证 BD试剂为FDA认证的IVD诊断试剂 BD的全自动仪器校正软件FACSComp及配套质控品标准微球能够自动校正仪器，调整试验条件 BD提供全带有内在质控的一系列自动软件 BD的全程质控品均或FDA认证 自动进样系统 Autoloader（选配） 样本制备仪 Autoloader自动进样系统：40管轮盘，简单易操作，自动混匀进样，每个样品可按不同预设程式自动获取分析，真正实现无人看守，全自动实现不同项目检测。 具有两种型号的样本制备仪（选SP-1 用于表面抗原标记，全自动处配） 理，与BD自动软件配合，是质量的保证； Medimachine 处理实体组织和肿瘤样本，可得到高质量的细胞悬液，用于分析抗原表达，倍体及增殖指数。 .
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BD公司全球和中国业务介绍
（一） BD公司全球业务
BD公司成立于1897年，总部设于美国的新泽西州。一百多年来，BD公司已发展成为机构遍布全世界九十多个国家和地区、全球雇员近二万名的跨国公司，由最初发明世界上第一支塑料注射器的家族式企业发展为纽约交易所的上市公司，由产品单一发展成为业务涵盖皮下注射、血液采集、微生物产品、流式细胞仪等诸多领域世界著名的医疗技术综合公司，并且多次荣幸地跻身于美国《财富》杂志五百强之列。在产品质量方面，BD公司上市的所有产品均符合或高于同行业最高质量要求并获得ISO及CE质量认证。在1998年度公司全球销售额为31亿美元,用于研究开发新产品方面资金为2.18亿美元。
BD公司主要产品为：
1、 BD生物科学系统（BD Biosciences，BDB）
BDB是BD公司的高科技部分，致力于为生命科学的基础研究和临床应用提供全方位强有力的支持 和帮助。BDB由以下世界著名的品牌组成： BD Immunocytometry Systems（BDIS） PharMingen （PMG）
Transduction Laboratories（TL） BD Labware
BD Microbiology Systems （BDMS） Biometric Imaging （BMI） Clontech.。
作为流式技术领域的先锋企业，BDIS的使命是通过采用划时代的技术为科学发展提供有诊断意义的解决方案和工具来扩展我们的全球领导地位。目前BD品牌的流式细胞仪占全球同类产品总量的70%，占美国总量的80%,为肿瘤、白血病、爱滋病及其它免疫系统疾病的诊断作出了积极的贡献。
BD公司提供的流式细胞仪包括:
• FACSCalibur: 世界上唯一的自动化四色台式分析和分选机.。提供自动进样系统、分选浓缩系统、自动免疫样本制备仪和DNA样本制备仪等选配功能。常规应用包括免疫表型分析、DNA分析、多色分析等，可广泛应用于临床和科研。
• FACSVantageSE：具有最佳分析灵活性和高速度分选功能，可通过Autosort进行自动化分选。除常规应用外，还可进行高分辨率的染色体分析。
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BD公司同时提供FDA批准的体外诊断试剂和研究试剂。通过最优良流式仪器、系统化软件以及试剂的完美配合，BD公司力争在科研和临床，尤其在肿瘤和免疫系统疾病的控制（如HIV）方面竭尽所长。
BD公司始终遵循用户至上，多方位满足用户的需要。几年来BD公司不断壮大，PharMingen、ClonTECH、Transduction Laboratories等高科技公司的加盟无疑进一步巩固了BD公司在细胞生物和分子生物多学科领域的绝对领先地位。
PMG建立在涵盖免疫学、细胞生物学、神经科学、分子生物学/蛋白质表达系统、蛋白质化学等多学科多样化的技术基础上，提供3000多种具领先技术的高质量产品，并继续在细胞因子、信号传导、凋亡、细胞周期调控、神经科学等战略性领域开发最新产品。具体分类如下：
1. 抗体： • • • • • • •
CD Antigens and Cell Surface Molecles Adhesion Molecules
Cytokines, Chemokines and Cytokine Receptors
No Azide/Low Endotoxin (NE/LE) Products for Functional Studies Tumor Suppressor/Onco-Proteins Signal Transduction Proteins Cell Cycle Related Proteins
• Apoptosis-Associated Proteins • Transcription Factors • Neuroscience • 2nd Step Reagents • Isotype Controls
2. 分子生物学产品：
• BD BaculoGold Baculovirus Kits, Vectors and Expression Systems • GST/6x His Purification and Expression Systems
• BD BioColors Green Fluorescent Protein Expression Vectors • BD RiboQuant Ribonuclease Protection Assay Systems • Luciferase Assay & Detection System • DNA Damage & Repair
• Custom Molecular Biology Products
3. 重组蛋白质：
• Signal Transduction Proteins • Cytokines And Chemokines • Cell Cycle Proteins
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BD Transduction Laboratories 正是迅速发展的信号传导研究领域提供高质量的单克隆抗体。成立于1993年，1998年成为BD的有机组成，BD TL 已经从最初的25个产品成长为超过700个产品的专业公司。 产品包括：
• • • • • • • • • • •
Phosphorylation & Dephosphorylation Nitric Oxide Calcium Signaling Apoptosis Cell Cycle Gene Regulation Cell Biology Cancer Ressearch Neuroscience Immunology
GTPases & Regulators
BD Labware作为BDB的一员，以多种多样的高质量试剂、培养基及其添加物、生物活性细胞外基质等产品为防止和治愈疾病作出贡献。BDL 产品包括：
• BD Falcon: 实验室塑料用品的首选，包括细胞培养、液体操作及其他生命科学应用；
• •
BD BioCoat Cell Enviroments:全面提供细胞培养用品及细胞外生物活性基质；
Collaborative Biomedical Products: 高质量细胞培养试剂和培养基添加物的革新者和创造者。
Clontech是功能性基因时代的科学家最忠实最有力的支持者。成立于1984年, CLONTECH 一直以迅猛的速度增长．CLONTECH的使命始终是通过提供先锋性的工具辅助科学家们提出超越从前的新问题和新观点, 最终加速科学发现的过程. 基于强大的Ｒ＆Ｄ计划，CLONTECH 发明了一些划时代的研究技术, 如GFP-based (green fluorescent protein) reporters, 用于研究蛋白质相互作用的two-hybrid analysis systems , 用于表达差异分析的gene array technology等等.所有这些产品都以其质量和革新性极大地促进了分子生物研究的进展.
CLONTECH 主要的强项在于:
PCR & PCR-based technologies; cDNA technologies; gene analysis;
expression systems including retroviral expression; two hybrid technologies; reporter systems; apoptosis detection;
and nucleic acid chemistry.
2、 感染性疾病诊断系统( Infectious Disease Diagnostics)： 3、 临床标本采集系统( Sample Collection) 4、注射器产品系列(Injection System)
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5、糖尿病及运动保健系统(Diabetic Health Care) 6、静脉输液系统(Infusion Therapy)
在新技术日新月异的今天，BD公司在不断创新，追求产品品质卓越的同时也十分重视中国用户的需求，力争把适合中国市场的一流的产品及服务提供给中国用户。在当今医疗行业相互联合、兼并以增强竞争力的今天，BD公司以其强大的竞争优势相继收购了Ohmeda、Difico、Pharmingen、Boin等多家公司，使公司的经营规模、市场份额及综合竞争能力有了飞跃性的发展，再次为世界同行所瞩目。
（二）BD公司在中国
1994年BD公司进入中国以来，发展迅猛，已在全国设立北京、上海、广州、哈尔滨等九个代表处，并在苏州兴建了合资厂。展望下一个百年，BD公司提出了“To help all people live healthy lives”（令全人类享有健康生活），力争在全中国、全世界有更好的表现。
BD公司流式细胞仪培训计划
为了使贵院技术人员和临床医生能够迅速掌握流式细胞仪的应用，早日收回投资成本，我们特意制定这份计划书，以供贵院作为采购之参考。
一． 技术培训
技术培训的目的是让技术人员迅速掌握标本处理、上机操作和结果分析等操作技术。
装机后技术培训（名额不限）
时间：仪器安装调试完毕后一周内，为期一周。 地点：医院实验室 对象：操作仪器的技术员 内容：
1、 流式细胞仪基本原理及结构 2、 开机、关机程序及软件使用； 3、 自动、手动仪器校正及补偿调节； 4、 DNA标本处理及测定；
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文档
5、 免疫标本处理及测定； 6、 仪器维护与保养。
技术提高培训：（名额不限）
时间：仪器使用半年后，根据医院需要决定具体时间 地点：医院实验室 对象：技术人员 内容：
1、 白血病分型； 2、 微小残留病变检测； 3、 PNH诊断； 4、 血小板活化测定; 5、 CD34检测； 6、 HLA-B27检测。 7、 细胞内细胞因子检测 8、 细胞凋亡检测
二．应用培训
应用培训的目的是让临床医生尽快掌握流式细胞仪在临床上的应用，将流式检测项目应用到自己的临床诊断、鉴别诊断和治疗监测中，迅速提高全院的流式应用水平，同时让医院早日收回投资成本。
全院讲座
时间：装机培训结束后一周内，半天时间 地点：医院安排 对象：全院临床医生
内容：流式细胞仪临床应用及进展
血液科讲座
时间：由医院和科室安排 地点：由医院和科室安排
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对象：血液科临床医生 内容：
1、 白血病免疫分型 2、 白血病和淋巴瘤诊断
3、 血小板表面糖蛋白检测与血小板疾病诊断 4、 白血病淋巴瘤治疗过程中免疫状态的监测 5、 如何阅读流式细胞仪化验报告单
肿瘤科讲座
时间：由医院和科室安排 地点：由医院和科室安排
对象：肿瘤科、外科、放化疗科临床医生 内容：
1、 流式细胞仪在肿瘤诊断、病理分级及预后中的应用 2、 放化疗过程中免疫状态监测 3、 细胞凋亡检测 4、 多药耐药检测 5、 肿瘤体外药敏测定
免疫相关科室
根据医院要求安排 内容：
1、 细胞免疫功能测定与免疫性疾病诊断 2、 免疫细胞活化检测 3、 细胞内细胞因子检测 4、 CD4计数与爱滋病诊断 其它科室
根据医院要求安排时间与内容（如血小板活化等）
三．维修培训
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维修培训的目的是让医院的维修工程师掌握一定的流式细胞仪维修技术。 时间：仪器安装调试时 地点：医院实验室
对象：医院内部负责仪器维修的工程师 内容：
1、 仪器原理介绍
2、 易损件（过滤器）的更换（1-2年换一次） 3、 常见故障排除
四．其它
可以考虑的科研课题
为了让流式细胞仪更好地发挥科研带动临床的作用，我们抛砖引玉，提供下列可以于近期考虑的课题，供临床科室参考。
1、 放化疗过程中免疫细胞活化研究 2、 钙离子阻断剂预防多药耐药研究
3、 化疗药物诱导肿瘤细胞表达P-170比例及水平定量研究
BD公司推荐配置单:
1 激光器配置:
15mw 488nm氩离子激光器,寿命>5000小时 3mw 635nm 红色激光器,寿命>5000小时
双激光配置可以增加很多使用染料,仪器所受限制少,可以根据所用染 料来选取开关激光 2 散射光及荧光探头数:
前向角散射光及侧向角散射光探头各一个 荧光探头4个
3 荧光检测灵敏度<100MESF,此数字越小越好 4 CV<2%(全峰宽)
5 脉冲检测器: 能同时检测每个脉冲信号的高度、面积和宽度,有效区分粘连的正常细胞和DNA含量改变的细胞
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6 全套软件，软件能够免费升级 7 专用数据处理器，以市场最新型号为准
8 仪器有硬件升级空间，如：一体化分选装置, 药物筛选系统，CBA检测系统等
BD公司与其他仪器比较表 序号 1 2 3 项目名称 美国市场占有率 BD FACSCalibur 80% COULTER XL 20% 30% 单激光：488nm 15mw气冷式氩离子激光 4色 ＜800MESF 说明 美国一流大学几乎全部为BD公司产品 还有一小部分为其他厂家 4 65% 中国市场占有率 激光器配置 双激光：488nm 15mw气冷式氩离子激光和635nm红色二极管激光 最多检测荧光参4色 数 ＜100MESF 荧光灵敏度 5 6 7 8 9 可选用的荧光素 488nm激光激发：FITC、PE、PerCP、PE-CY5、Cy-Chrome、PI、AO、TO等； 635nm激光激发：APC、Cy5、Rhodamine 800、Oxazine 750、Oxazine 1、Cyanine and Oxonol dyes、LD 700、ToTo-3、To-Pro3 获取速度 >10000个/秒 分选功能 主机与计算机连机方式 通讯传输设计 有 online 电缆 488nm激光激发：FITC、PE、PerCP、PE-CY5、Cy-Chrome、PI、AO、TO等； 荧光参数的增多使得荧光素之间的补偿问题成为一个极大的隐患，而BD公司双激光激发4色的巧妙构思将荧光素的补偿在空间和时间的安排下降低到最小，极大地增加了检测的灵敏度。 双激光的设计极大的扩展了用户对于荧光素的选择范围，使得用户能够进行真正意义上的多参数分析。 >3000个/秒 无 online 光纤 FACSCalibur是目前世界上获取速度最快的台式机 FACSCalibur是目 前唯一能进行分选的台式机 光纤传输在远距离、多频率、模拟信号中具有优越 性，而在流式细胞仪的主机与电脑的连接中，电缆传输并不会造成信号的失真。 光线经过折射和透射都会造成光量子的损失，而透镜由于会吸收光量子，损失更多，再加上直线光路中各种荧光检测光路中使用的透镜和棱镜的数量不同，使信号的衰减程度不同，造成各个检测器检测到的信号强弱不均。 10 光路设计 侧向光路设计 直线光路设计 .
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11 脉冲信号处理系统（即双联体识别系统DDM） BD专利 12 自动清洗系统 FACSCalibur可以从三方面来衡量一个脉冲信号：脉冲宽度、高度、面积，并通过脉冲宽度和面积做图来区分双联体细胞和单个细胞。检测脉冲信号的宽度属于BD公司的专利 有 因无法检测脉冲信号的宽度，只好用侧向角散射光来替代，但是双联体细胞与单个细胞在侧向角散射光上的区别并不明显，因此容易造成假阳性。 无 在做肿瘤细胞的DNA倍体检测时，我们需要严格区分样本是四倍体肿瘤还是由于正常二倍体细胞的叠加造成四倍体比例的增加，这就意味着一定要精确地确定单个细胞。 13 进样口与检测区距离 15cm >15cm 14 数据处理系统 15 16 可测样本颗粒 先进的软件系统 BD在主软件CellQuest的基础上，为了配合流式细胞仪在临床检测上的推广，专门设计了多种全自动应用软件，可实现自动获取，自动存储，自动分析，自动打印，还可自动进行细胞的绝对记数 全程质控 软件全自动调节仪器光路，灵敏度，补偿，设置实验条件； 提供多种质控品； 在出现错误时出现报警提示。 SP-1免疫标本制备仪 Medimachine DNA样本制备仪 FACStation工作站：Macintosh G4/1G 256MB RAM 80G硬盘 CD-RW/DVD 17”彩显 EPSON彩色打印机 0.2-50um Intel PIV 自动清洗系统可以在进样的间隙将前次样本残留物抽吸，以免影响下一次样本的检测 进样口与检测区距离越短，残留在管道里的样本就越少，也就避免了样本之间的交叉污染。尤其对于微量样本的检测，比如说造血干细胞，AIDS病细胞等，这一特点尤为重要。 流式细胞仪中电脑对图象的处理是非常重要的，目前世界上最好的图象处理系统是APPLE公认的MACINTOSH，故BD公司的电脑配置随市场的不断升级而为用户提供新配置的仪器。 17 0.2-50um 无全自动应用软件 BD自动软件包括： Simulset/Multiset用于免疫功能检测，可绝对记数，例如外周血中CD4+细胞数； ProCOUNT用于造血干细胞绝对记数； HLA-B27用于检测淋巴细胞上B27抗原的表达； RetiCOUNT用于检测网织红细胞的含量。 具有质控程序； 苹果公司的EXCEL软件同样可以提供多种质控品 建立曲线，进行样本之间的比较。 18 样本制备仪 有 两家样本制备仪的区别在于： 1． BD的能一次制备40个样本，而COULTER只能一次做一个； 2． BD SP-1是全封闭式的，全自动样本制备仪，加抗体，加血样，溶血素等都不用认为操作；而COULTER只是半自动，需要认为加入抗体和血样以及离心，整个装置不是封闭的。
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