昆虫杆状病毒的研究与应用

河南农业科学　昆虫杆状病毒的研究与应用　王晓玲　，魏美才　，夏春兰　（１　中南林业科技大学生命科学与技术学院，湖南长沙４１０００４；２．湖南省永州市冷水滩林业局，湖南永州４２５０００）　摘要：杆状病毒是鳞翅目昆虫的重要病原微生物，在重要农业害虫的生物防治中具有很大的应用　前景。同时，杆状病毒一昆虫细胞表达系统是一类重要的真核表达系统，现已成为目前基因工程四　大表达系统之一。另外，杆状病毒是非复制型载体，能高效表达目的蛋白，其作为基因转移载体在　基因治疗中已显示出良好的应用前景。文中综述了杆状病毒在以上方面应用的最新进展。　关键词：杆状病毒；杆状病毒栽体；重组杆状病毒；基因治疗；杆状病毒杀虫剂　中图分类号：Ｓ４３２．４　１　文献标识码：Ａ　文章编号：１００４—３２６８（２００６）０６—００６１—０５　Ｉｎｓｅｃｔ　Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ：Ｒｅｃｅｎｔ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ＷＡＮＧ　Ｘｉａｏ－ｌｉｎｇ　，ＷＥＩ　Ｍｅｉ—ｃａｉ　，ＸＩＡ　Ｃｈｕｎ—ｌａｎ２　．（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔ￣ｍｏｌｏｇｙ，Ｃｅｎｔｒａｌ　Ｓ叫ｔｈ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｆｏ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ＆　ｈｎ０　，ＣＩｌａｒＩ　ｈａ　４１０００４，Ｃｈｉｎａ；　２．Ｆｏｒ￣ｔｒｙ　Ｂｕｒｅａｕ　ｆｏ　Ｌｅｎｇｓｈｕｉｔａｎ　Ｄｉｓｔｒｉｃｔ，Ｙｏｎｇｚｈｏｕ　Ｃｉｔｙ　ｏｆ　Ｈｕｎａｎ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｙｏｎｇｚｈｏｕ　４２５０００，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅｓ　ａｒｅ　ａｒｔｈｒｏｐｏｄ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｖｉｒｕｓｅｓ　ｔｈａｔ　ｈａｖｅ　ｌｏｎｇ　ｂｅｅｎ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｇｅｎｔｓ　ｔＯ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｔｈｅ　ｉｎｓｅｃｔｓ　ａｔｔａｃｋｉｎｇ　ｃｒｏｐ　ｐｌａｎｔｓ．Ｔｈｅｙ　ａｒｅ　ａｌｓｏ　ｔｈｅ　ｋｅｙ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｏｆ　ｉｎｓｅｃｔ—ｂａｃｕｌｏｖｉｕｒｓ　ｅｘ—　ｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ（ＢＥＶＳ），ｗｈｉｃｈ　ｈａｓ　ｂｅｅｎ　ｏｎｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｏｕｒ　ｍａｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍｓ　ｉｎ　ｇｅｎｅ　ｅｎｇｉｎｅｅｒ—　ｉｎｇ．Ａｄｄｉｔｉｏｎａｌｌｙ．ｂａｃｕｌｏｖｉｕｒｓ　ｈａｓ　ｂｅｅｎ　ａ　ｎｅｗ　ｇｅｎｅ　ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｖｅｃｔｏｒ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ｇｅｎｅ　ｔｈｅｒａｐｙ　ｄｕｅ　ｔＯ　ｉｔｓ　ｄｄ—　ｖａｎｔａｇｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒｅｍｅｌｙ　ｈｉｇｈ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｆｏｒｅｉｇｎ　ｇｅｎｅｓ　ａｎｄ　ｂｅｉｇｎ　ｎｏｎ—ｒｅｐｒｏｄｕｃｅ　ｖｅｃｔｏｒ．Ｔｈｅ　ａｄ—　ｖａｎｃｅｓ　ｉｎ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｂａｃｕｌｏｖｉｕｒｓｅｓ　ｒａｅ　ｒｅｖｉｅｗｅｄ　ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｐａｐｅｒ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：　Ｂａｃｕｌｏｖｉｕｒｓ；　Ｂａｃｕｌｏｖｉｕｒｓ　ｖｅｃｔｏｒ；　Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｂａｃｕｌｏｖｉｕｒｓ；　Ｇｅｎｅ　ｔｈｅｒａｐｙ；　Ｂａｃｕｌｏｖｉｕｒｓ　ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ　．　杆状病毒是昆虫专一性的病原病毒，是发现最　ｖｅｃｔｏｒ　ｓｙｓｔｅｍ，ＢＥＶＳ）是一个以昆虫杆状病毒为外　早、研究最多且实用意义很大的昆虫病毒　’２　Ｊ。近　源基因载体，以昆虫和昆虫细胞为受体的表达系统。　年来，昆虫杆状病毒的研究已引起人们的高度重视，　与其他类表达系统相比，它具有安全性高，对外源基　其主要原因为：（１）昆虫杆状病毒可作为真核表达载　因克隆容量大，重组病毒易于筛选，具有完备的翻译　体系统表达外源基因，在药物研发、疫苗生产等方面　后加工修饰系统和高效表达外源基因的能力等特　有广泛的应用；（２）杆状病毒作为基因转移载体可用　点［　，　。昆虫杆状病毒载体系统的建立和发展，被　于基因治疗；（３）作为一类重要的微生物杀虫剂，可　誉为２Ｏ世纪８０年代真核表达研究领域的一个重大　有效地控制农林害虫的发生，但对环境不造成污染，　进展。　对人、畜安全。文中对其最新应用进展进行了综述。　自从１９８３年Ｓｍｉｔｈ和Ｓｕｍｍｅｒｓ首次利用苜蓿　１杆状病毒载体表达系统研究的最新进展　丫纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＭＮＰＶ）成功表达人ｐ　干扰素以来，现已有数百种外源基因在杆状病毒　杆状病毒表达载体系统（Ｂａｃｕｌｏｖｉｕｒｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　载体系统中得到表达［３－－５　Ｊ。　收稿日期：２００６—０１—１０　基金项目：国家自然科学基金资助项目（３００７０６２７）　作者简介：王晓玲（１９７６一），女，湖南长沙人，硕士，主要从事微生物学和林业生物技术的教学与研究工作。为通讯作者。　・６１　・　维普资讯 http://www.cqvip.com

外源基因在昆虫细胞中表达水平差异较大，有　的只有１　ｍｇ／Ｌ，但高的可达６００　ｍｇ／Ｌ。用ＮＰＶ载　体生产外源基因较有效的途径是用带有外源基因的　重组病毒直接感染昆虫幼虫。在各表达系统中，家　蚕（Ｂ．ｍｏｒｉ）核型多角体病毒（ＢｍＮＰＶ）——家蚕表　达系统是较理想的系统。利用家蚕作为生物反应　器，季平等已成功表达了慈姑蛋白酶抑制剂Ｂ基　因、乙肝病毒表面抗原基因、禽马立克氏病毒糖蛋白　Ｂ抗原基因和促黄体素释放激素与乙肝表面抗原嵌　合的基因等　Ｊ。　近年来杨林等进行了　汀融合蛋白在杆状病　毒系统中表达的可溶性研究Ｌ７　Ｊ。朱长军等首次利　用既能高效表达外源基因又能形成多角体的杆状病　毒表达系统表达了抑癌基因ｐ１６ＩＮＫ４，ｐ１６ＩＮＫ４，　对于进一步研究抑癌蛋白Ｐ１６的结构与功能及其　在肿瘤生物治疗中有着重要意义　８。张传溪等进　行了棉铃虫核型多角体病毒几丁质酶基因和杆状病　毒几丁质酶基因的分子进化研究　９；还在家蚕体中　高效表达了人促红细胞生成素（ＥＰＯ）基因ｕ　。目　前，浙江大学、上海生物化学研究所和有关企业共同　开发的，以蚕体为生物反应器生产的人粒细胞巨噬　细胞集落刺激因子（ｈｕｍＧＭ—ＣｓＦ）药物已研制成　功。上海生物化学研究所首创了可线性的ＢｍＮ—　ＶＰ，大大提高了ＢｍＮＶＰ的重组效率【１０　Ｊ。　最近，一些学者采用杆状病毒表达系统对　ＳＡＲＳ和禽流感病毒ＨＡ进行了研究。王喜军等【¨Ｊ　成功构建了表达ＳＡＲＳ—ＣｏＶ　Ｓ蛋白重组杆状病　毒，并在昆虫细胞获得特异表达。昆虫细胞表达　ｒＳＳ与灭活ＳＡＲＳ—ＣｏＶ全病毒高免血清和感染耐　过病人阳性血清均具有良好、特异的免疫反应原性。　因此，杆状病毒表达的ｒＳＳ有望替代ＳＡＲＳ—ＣｏＶ　全病毒，作为安全、敏感和特异的重组诊断抗原，并　为探索重组亚单位疫苗的可行性奠定基础。　胡森等【１２　Ｊ的研究结果表明，昆虫细胞表达的重　组ＳＡＲＳ—ＣｏＶ　Ｎ蛋白具有免疫反应原性良好、制　备简便和来源丰富的特点。该蛋白有望替代　ＶｅｍＥ６细胞生产的ＳＡＲＳ—ＣｏＶ全病毒抗原，研制　安全经济、敏感特异的ＥＬＩＳＡ和ＩＦＡ诊断试剂，应　用于动物或人类ＳＡＲＳ—ＣｏＶ特异抗体反应血清学　研究和检测，特别是大规模的流行病学监测。　贾世海等【１３　Ｊ利用昆虫杆状病毒表达了ＳＡＲＳ　冠状病毒的２个主要结构蛋白——刺突蛋白和膜蛋　白。　李永强等［１４］构建了融合型表达禽流感病毒　ＨＡ基因杆状病毒转移载体，与线性化杆状病毒共　转染Ｓｆ９细胞，经３轮蚀斑克隆，获得重组杆状病毒　・６２・　２００６年第６期　ｒＢａ—ｃｈｉｓＨ５ＨＡ，为表达、纯化ＨＡ蛋白及研制预防　禽和人禽流感病毒亚单位疫苗的研制奠定了基础。　此外，牙釉蛋白【ｌ５　Ｊ、花粉变应原ｏｌｅ　ｅ　１０蛋　白ｕ６Ｊ也在昆虫杆状病毒表达系统中得到了表达。　Ｗａｎｇ等【ｌ７　Ｊ应用杆状病毒载体对蚕丝蛋白重链信号　肽进行了体内分析。　２杆状病毒用于基因治疗　杆状病毒是非复制型载体，且重组杆状病毒载　体具有容量大、易操作、易纯化和安全性高，因而是　一种很有应用前景的基因转移载体【培，ｌ９　Ｊ。　用含有ＣＭＶ（巨细胞病毒）启动子和绿色荧光　报告基因（ｇｆｐ）的病毒进行有效的杆状病毒介导性　转导，已在一系列细胞系和原代培养物中证实。另　一种能有效并稳定地将重组基因导入细胞的杆状病　毒载体也已报道。这种病毒含有１对表达盒（Ｂ—　ｇａｌ和潮霉素抗性），并以来自腺病毒伴随病毒　（ＡＡＶ）的倒置末端重复序列（ＩＴＲ）为侧翼【培～２２　ｌ。　目前，在体外可转导的哺乳动物细胞见表１。　表１可用重组杆状病毒转导的哺乳动物细胞［１８】　哺乳类别　细胞名称　人ＨｅｐＧ２（肝细胞）；ＨＵＨ７（肝细胞）；　Ｓｋ—Ｈｅｐ一１（肝细胞）；ＨｅＬａ（宫颈癌细胞）；　Ｗ１２（角化细胞）；Ａ　５４９（肺细胞）；　ＷＩ一３８（肺纤维原细胞）；２３９（肾细胞）；　Ｒａｘｒ￣（Ｂ细胞）；Ｊ￣ｋａｔ（Ｔ细胞）；　ＨＬ一６ｏ（前髓细胞）；Ｋ一５６２（髓细胞）　猴　ＣＯＳ７（肾细胞）；ＣＶ一１（肾细胞）　猪　ＣＰＫ（肾细胞）；ＦＳ—Ｌ３（肾细胞）　兔　ＲＧＭ１（胃粘膜细胞）；ＰＣ１２（肾上腺细胞）　鼠　ＮＩＨ３１　（胚纤维原细胞）；Ｃ２Ｃ１２（肌肉细胞）　仓鼠　ＣＨＯ（卵巢细胞）　目前，杆状病毒在体外转导哺乳动物细胞较容　易，但在体内转导尚有较大的困难，主要是由于体内　血清中补体系统的中和阻碍作用【２３　Ｊ。消除杆状病　毒的补体敏感性已有相应的方法。例如，将杆状病　毒注射到ＡＫＰ补体缺陷小鼠肝内，可在注射部位附　近得到有效表达；而将在哺乳动物细胞中表达荧光　素酶的杆状病毒注射入补体缺陷的Ａ　品系小鼠　的尾静脉中则可在脾、肝和肾中得到该基因的表达；　使用补体活性调节因子可保护病毒在血清处理后不　致灭活。补体抗性病毒现已可用衰变加速因子　（ＤＡＦ）构建，ＤＡｂ＂可通过增加补体降解率来调节补　体复合物［１８，１９，２４］。含有ｇｐ６４２ＤＡＶ融合包膜蛋白　的病毒可在新生大鼠肝内注射后瞬间表达人因子　ＩＸ基因。此外，用抗Ｃ５（补体蛋白）抗体或用眼镜　蛇毒素因子处理血清后，血清便不能完全使病毒失　维普资讯 http://www.cqvip.com

，　河南农业科学　活。这也为克服补体系统的阻碍作用提供了一个可　能的方法［１８，１９，２４，２５］。　目前，杆状病毒的侵入和转导机制尚不清楚。　而且不同细胞与病毒的作用机理不同［１８，１９］。如对　Ｈｕｈ７细胞的转导表明，病毒与其细胞的结合呈饱　和动力学特征。病毒必须通过与细胞基膜表面的作　用进入细胞，以发挥其转导作用。相反，此病毒与　２９３细胞的作用表明，其转导作用在大病毒剂量下　并不饱和，这意味着病毒与细胞间可能存在非特异　功。据报道，巴西使用杆状病毒防治大豆害虫，每年　可节省费用１　１００万美元，同时还免去了１　７００万ｔ　化学农药的使用，因此，具有巨大的经济和生态效　益【２６，２７Ｊ　。目前，国内外正式注册商品化的杆状病毒　杀虫剂有近２０种【２６－－２８　Ｊ。　３．２重组杆状病毒杀虫剂及其安全性　野生型杆状病毒存在杀虫速度较慢，毒力较低，　对高龄害虫需用量大等缺点。解决这一问题的方法　是对其进行基因重组改造。即通过增加具有高效杀　虫活性的外源基因，或删除某些自身基因，进行基因　改造。目前，已成功实现重组表达的外源基因蛋白　有蝎子毒素、以色列亚种８一内毒素、马（黄）蜂毒　素、几丁质酶基因、利尿激素、保幼激素酯酶、羽化激　素、慈菇蛋白酶抑制剂Ｂ基因ＡＰＩ—Ｂ、植物蛋白酶　抑制剂、昆虫病毒增强蛋白基因等［２９，３０］。最近，钳　蝎类（Ｂｕｔｈｕｓ　ｔａｍｕｌｕｓ）昆虫选择性毒素蛋白（Ｂｕ—　作用［１８，１９］。另外，静电作用对病毒结合十分重要，　说明细胞表面的肝素硫酸盐残基可能是结合的主　体。但在对ＨｅｐＧ２细胞的研究中发现，细胞膜的磷　脂对病毒进入的启动很重要。特别是带负电的磷脂　酸和磷脂酰肌醇可能抑制病毒的转导，而肝素和肝　素硫酸盐则不然【１８，１９　Ｊ。　总之，重组杆状病毒作为基因转移载体应用于　哺乳动物细胞已经得到广泛的证实。杆状病毒通过　一ｔａｌＴ）也在杆状病毒中得到了重组表达【３１　Ｊ。　由以上方法研制的重组杆状病毒的杀虫效果与　种尚未阐明的侵入机制，使其成为一个能对许多　哺乳动物细胞系进行高效转移的载体。但许多问　题，特别是体内转导及其机制等需要进一步研究和　解决。　野生型杆状病毒相比，其杀虫效果可提高２０％～　７０％［　。因而具有很好的应用前景。然而重组杆　状病毒杀虫剂的生物安全性，引起了人们的担心。　这是因为尽管野生型杆状病毒杀虫剂的安全性已证　实，但重组病毒杀虫剂由于其基因组发生了改变，或・　增加了外源基因，或删除了某些基因，因而其安全性　需要重新考虑【２７］。但目前许多学者认为，ＡｃＮＰＶ．　只是以ＤＮＡ形式作载体将外源基因导人哺乳动物　细胞，并不是ＡｃＮＰＶ的病毒颗粒对哺乳动物细胞　造成感染。病毒ＤＮＡ进入细胞不能复制，并不会　造成细胞病变。而且外源基因在哺乳动物细胞中的　表达并不能利用ＡｃＮＰＶ本身的启动子，因而他们　认为杆状病毒对哺乳动物是高度安全的　。而且　现有的研究都表明重组病毒对环境的影响和危险较　低［２６，３３－－３５］。但重组杆状病毒杀虫剂尚未大面积推　广，因此，有关安全性还有待于大量的田间应用检　验。　参考文献：　［１］Ｊｉ　ｗ　Ｊ，Ｚｈａｎｇ　ＸＹ，Ｈｕ　Ｈ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｕ—　ｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｈｕｗｅｎｔｏｘｉｎ—Ｉ　ｉｎ　ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ　ｓｙｓｔｅｍ【Ｊ　ｊ．　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅｘｐｒｅｓ　Ｐｕｒｉｆ，２００５，４１：４５４—４５８．　３杆状病毒杀虫剂的应用　３．１杆状病毒杀虫剂概况　昆虫杆状病毒对许多害虫比较敏感。杆状病毒　占所有可感染昆虫病毒的６０％以上。目前，至少已　有６００多种昆虫（主要是鳞翅目昆虫）和其他无脊椎　动物中发现杆状病毒感染［　。作为微生物杀虫剂，　杆状病毒具有优异的性能。首先，杆状病毒的宿主　范围很窄，他们对其他非目标昆虫的影响很小，对人　畜、天敌和环境安全。其次，杆状病毒的杀虫效果较　好，如在虫害发生前期使用，其防治效率可达９９％　以上。此外，杆状病毒产生的包含体具有侵染性病　毒颗粒，对环境的生物稳定性有一定作用；同时，杆　状病毒的这种特点也便于利用传统技术来制造和应　用病毒。由于杆状病毒的上述特点，特别是它对人　畜、天敌和环境比较安全，因此，它是生产绿色食品　必不可少的生物农药，其市场前景看好。从１９８５年　国家在湖北蒋湖农场投资建立我国第１个棉铃虫病　毒杀虫剂工厂以来，已有多种病毒杀虫剂研制成功，　并进入批量生产，在发展“无公害”蔬菜生产中发挥　了重要的作用。　目前，国内外已大量使用杆状病毒杀虫剂，特别　［２］ＰｉｌｕｓｏＬＧ，ＷｅｉＧ，ＬｉＡＧ，ｅｔａ１．Ｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎｏｆ　ａｃｅｔｙｌ　ｐ５３　ｕｓｉｎｇ　ｐ３Ｏ０　ｃｏ－ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ　ｅｘｐｒｅｓ、・　ｓｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅｘｐｒｅｓ　Ｐｕｒｉｆ，２００５，４０：３７０—　３７８．　是巴西利用杆状病毒防治大豆害虫取得了巨大成　［３］Ｙａｒｒｍｊｉ　Ｈ，Ｍａｎａｂｅ　Ｔ，Ｋｉｔａｕｒａ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｐｒｏ一　・６３・　维普资讯 http://www.cqvip.com

２００６年第６期　ｄｕｃｔｉｎ　ｏｆ　ｒｅｏｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ　ｉｎｓｅｃｔ　ｃｅｌｌ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｕｓｉｎｇ　ｓｅｒｕｍ－ｆｒｅｅ　ｂａｓａｌ　ｍｅｄｉａ　ａｆｔｅｒ　ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ　ｉｎ．　Ｂｉｏｅｈｅｒｎ　Ｂｉｐｈｙｓ　Ｒｅｓ　Ｃ０ｎｎｍｕｎ，２０ｏ６，３４１：１２０３—　ｏ１２１０．　ｆｅｃｔｉｎ［ｏＪ］．ＢｉｏｅｈｅｒｎＥｎｇ　Ｊ，２００６，２８：６７—７２．　［４］Ｐｏｓｓｅｅ　Ｒ　Ｄ．Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅｓ　ａｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｖｅｃｔｏｒｓ［Ｊ］．Ｏｐｉｎ　Ｂｉｏｔｅｃｈ，１９９７，８：５６９—５７２．　．．　［１８］　Ｇｈｏｓｈ　Ｓ，Ｐａｒｖｅｚ　Ｍ　Ｋ，Ｂａｎｅｒｉｅｅ　Ｋ，ｅｔ　ａ／．Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ　ａｓ　ｍａｍｍａｌｉａｎ　ｃｅｌｌ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｖｅｃｔｏｒ　ｆｏｒ　ｇｅｎｅ　ｔｈｅｒａｐｙ：　ａｎ　ｅｍｅｒｇｉｇ　ｓｔｎｒａｔｅｇｙ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｔｈｅｒａ，２００２，６　（１）：５一ｌ１．　［５］ＳｈｉｎｋａｉＡ，ＳｈｉｎｏｄａｃＫ，Ｍｏｆｉｓ￣ｔａＹ，ｅｔａ１．Ｈｉｇｈ—ｌｅｖｅｌ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｌｐａ—Ｉ．３一ｆｕｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ　ｉｎ　ｂａｅｕｌｏｖｉｒｕｓ—　［１９］　Ｋｏｓｔ　Ｔ　Ａ，Ｃｏｎｄｒｅａｙ　Ｊ　Ｐ．Ｒｅｃｏｍｂｉａｎｔ　ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅｓ　ａｓ　ｍａｍｍａｌｉｎ　ｃｅｌａｌ　ｇｅｎｅ－ｄｅｌｉｖｅｒｙ　ｖｅｃｔｏｒ［Ｊ］．Ｔｒｎｄｓ　ｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００２，２０（４）：１７３—１８０．　－Ｉａｅｓｅｌｅｅｒ　Ｆ，Ｉｍａｎｉｓｈｉ　Ｙ，Ｓａｐｅｒｓｔｅｉｎ　Ｄ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｇｅｎｅ　［２０］　Ｉｔｒａｎｓｆｅｒｍｅｄｉａｔｅｄｂｙ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｉｎｔｏ　ｒｎｏｕｓｅ　ｉｎｆｅｃｔｅｄ　ｉｎｓｅｃｔ　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅｘｐｒｅｓｓ　Ｐｕｒｉｆ，１９９７，１０　（３）：３７９—３８５．　［６］洪清君，段家龙．昆虫杆状病毒基因工程研究新进展　［Ｊ］．生物技术，２００２，１２（１）．３１—３２．　［７］杨林，李国清，黄葆英，等．　汀融合蛋白在杆状病毒　系统中表达的可溶性研究［Ｊ］．中国病毒学，２０００，１５　（２）．１４３—１４６．　ｅｙｅ［Ｊ］．Ｉｎｖｅｓｔ　Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ　Ｖｉｓｕａｌ　Ｓｃｉ，２００１，４２：３２９４　—３３００．　ＰｉｅｒｏｎｉＬ，ＭａｌｏｎｅＤ，ＬａＭｏｎｉｃａＮ．Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎｅｔａｒｍ－ｒ　［８］朱长军，张利宁，马春红，等．抑癌基因ｐｌ６ＩＮＫ４真核　表达载体的构建及其表达［Ｊ］．中国肿瘤生物治疗杂　志，２ｏ００，７（１）：６５—６６．　ｆｅｒ　ｉｎ　ｎＫｘｌｓｅ　ｓｋｅｌｅｔａｌ　ｍｕｓｃｌｅ　ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｂｙ　ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ　ｖｅｃｔｏｒｓ［Ｊ］．ＨｕｍＧ朗ｅＴｈｅｒ，２００１，１２：８７１—８８１．　［２２］　Ｍａｔｓ￣Ｅ，　Ｈ，Ｌｉｍ　Ｃ　Ｋ，　ａ１．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＨＣＶ——ｌｉｋｅ　ｐａｒｔｉｃｌｅｓ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｉｎ　ａ　ｈｕｍａｎ　ｈｅｐａｔｏｍａ　［９］张传溪．棉铃虫核型多角体病毒几丁质酶基因及杆状　病毒几丁质酶基因的分子进化［Ｊ］．昆虫学报，２０００，　４３（３）：２３３—２４１．　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅ　ｂｙ　ａ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ［Ｊ］．ＢｉｏｅｈｅｍＢｉｏ．　ｐｈｙｓＲｅｓＣｏｌｌｌｌｎｕｎ，２０ｏ６，３４０：２００—２０８．　［１０］张传溪，姜育蕾，胡萃，等．人促红细胞生成素基因　在家蚕中的高效表达［Ｊ］．生物工程学报，２０００，１６　（１）：４６—５０．　ｓ　Ｃ，Ｓｅｒｇｕｅｌ＇￣ｔ　Ｃ，Ｐｅｔｒｅｓ　Ｓ，ｅｔ　ａ／．Ｅｆｆｉｃｉｎｔｅ　ｔｒａｎｓ－　［２３］　Ｓａｒｋｉｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎｅｕｒ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｄ　ｉｎ　ｖｉｖｏ　ｂｙ　ａ　ｂａｃ．　ｕｌｏｖｉｒｕｓ　ｄｒｉｖｅｄ　ｖｅｃｔｏｒ［Ｊ　Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｅｉ　ＵＳＡ，　２ｏｏ０．９７（２６）：１４６３８—１４６４３．　［１１］王喜军，胡森，王清华，等．杆状病毒表达ＳＡＩＬＳ冠　状病毒纤突蛋白及其抗原性分析［Ｊ］．中国预防兽医　学报，２００５，２７（６）：５５０—５５３．　［２４］　ＨｏｆｍａｎｎＣ，ＨｕｓｅｒＡ，ＬｅｈｎｅｒｔＷ，ｅｔａ／．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎｏｆ　ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｖｅｃｔｏｒｓ　ａｇａｉｎｓｔ　ｃｏｍｐｌｍｅｅｎｔ——ｍｅｄｉａｔｅｄｉｎａｃｔｉ－　ｖａｔｉｎ　ｂｙ　ｒｅｃｏｍｂｉｏｎａｎｔ　ｓｏｌｕｂｌｅ　ｃｏｍｐｌｍｅｅｎｔ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｔｙｐｅ　［１２］胡森，王喜军，王清华，等．杆状病毒表达ＳＡＲＳ冠　状病毒核蛋白抗原性的研究［Ｊ］．中国人兽共患病杂　志，２００６，２１（４）：２１—２４．　１［Ｊ］．Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ，１９９９，３８０：３９３—３９５．　［２５］　Ｈｕｓｅｒ　Ａ，Ｒｕｄｏｌｐｈ　Ｍ，Ｈｏｆｍａｎｎ　Ｃ．Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｎ　ｏｏｆ　ｄｅｃａｙａｅｃｅｌｅｒａｔｉｇ　ｆａｃｔｎｏｒ　ｉｎｔｏ　ｔｈｅ　ｂａｅｕｌｏｖｉｒｕｓ　ｅｎｖｅｌｏｐｅ　ｇｅｎｅｒａｔｅｓ　ｃｏｍｐｌｍｅｅｎｔ—ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　ｇｅｎｅ　ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｖｅｃｔｏｒｓ　［１３］　贾世海，周博，吴峻，等．利用昆虫杆状病毒表达　ＳＡＲＳ冠状病毒的刺突蛋白和膜蛋白［Ｊ］．细胞生物　学杂志，２００６，２８（１）　８４—８８．　［Ｊ］．ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｃｈｎｏｌｅ，２００１，１９（５）：４５１—４５５．　ｅｗｃｚｙｋ　Ｂ，Ｈｏｙｏｓ—Ｃａｒｖａｊｌａ　Ｌ，Ｐａｌｕｓｚｅｋ　Ｍ，ｅｔ　ａ／．　［２６］　Ｓｅ［１４］李永强，孟庆文，冉多良，等．表达带Ｈｉｓ２ｔａｇ的禽流　感病毒ＨＡ基因杆状病毒转移载体的构建及重组病　毒的鉴定［Ｊ］．农业大学学报，２００５，２８（４）：５３　—Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅｓ－ｒｅ－ｍｅｒｅｇｉｇ　ｂｉｎｏｐｅｓｔｉｃｉｄｅｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｔｃｈｎｏｌｅ　Ａｄｖａｎｃｅｓ，２０ｏ６，２４：１４３—１６０．　５５．　［２７］　惠丰立，夏敏，梁子安．杆状病毒杀虫剂研究进展　［Ｊ］．植物保护，２００３，２９（３）：９—１１．　ｕ　Ａ　Ｂ，Ｋａｍｉｔａｓ　Ｓ　Ｇ，Ｈｉｎｔｏｎ　Ａ　Ｃ，ｅｔ　ａ／．Ｒｅ—　［２８］　Ｉｎｃｅｏｇｌ［１５］Ｔａｙｌｏｒ　Ａ　Ｌ，Ｆｉｌｄｅｒｍａｎ　Ａ　Ｈ，Ｂｌｕｍｅｒｆｅｌｄ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｈｉｇｈ　ｙｉｅｌｄ　ｏｆ　ｂｉｏｌｏｇｉａｌｌｃｙ　ａｃｔｉｖｅ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｈｕｍａｎ　８１Ｔｌｌｅｏ－　ｇｅｎｉｎ　ｓｉｕｇ　ｔｈｅｎ　ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．Ｐｒｏ—　ｔｅｉｎ　Ｅｘｐｒｅｓ　Ｐｕｒｉｆ，２００６，４５：４３—５３．　ｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅｓ　ｆｏｒ　ｉｎｓｅｃｔ　ｃｏｎｔｏｌ［Ｊ］．Ｐｅｒｓｔ　Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００１，５７：９８１—９８７．　［１６］ＢａｒｒｌＰ，ＳｅａｒｒａｎｏＡＧ，ＢａｔａｎｅｒｏＥ，ｅｔ　ａ１．Ａ　ｒｅｃ￣ｂｉ—　ｎａｎｔ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｖａｒｉａｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｏｌｉｖｅ　ｐｏｌｌｅｎ　ａｌｌｅｒｇｅｎ　Ｏｌｅ　ｅ　ｔｈ　Ｃ　Ｒ，Ｋｅｖｉｎ　Ｍ　Ｈ，Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ　Ｇ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｉｍ—　［２９］　Ｓｍｉｐａｃｔ　ｏｆ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｂａｃｕｌｏｖｉｒｎｓ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｎ　ｏｎ　ｔａｒｇｅｔ　ｈｏｅ—　１０　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｉｎ　ｂａｃｕｌｏｖｌｒｓ　ｓｎｙｓｔｅｍ［Ｊ］．Ｊ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，　２００６。１２１：４０２—４０９．　ｌｉｏｔｈｉｎｅｓａｎｄｎｏｎｔａｒｇｅｔ　ｐｒｅｄａｔｏｒｓｉｎｃｏｔｔｎ［ｏＪ］．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｏｎｔｒｏｌ，２ｏｏ０，１９：２０１—２１４．　［１７］ＷａｎｇＳＰ，ＧｕｏＴＱ，ＧｕｏＸＹ，ｅｔａ１．Ｉｎｖｉｖｏ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｆｉｂｒｏｉｎ　ｈｅａｖｙ　ｃｈａｉｎ　ｓｉｇｎａｌ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｏｆ　ｓｉｌｋｗｏｒｍ　Ｂｏｒｎ—　［３ｏ］　梁布锋，刘润忠，张友清．重组杆状病毒杀虫剂的研　制和田间试验［Ｊ］．中国生物防治，１９９７，１３（４）：１７９　—ｂ３ｃｃ　ｍｏｒｉ　ｕｓｉｇ　ｒｎｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ　ａｓ　ｖｅｃｔｏｒ［Ｊ］．　１８１．　维普资讯 http://www.cqvip.com

河南农业科学　防除覆膜直播棉花杂草药效试验　马光春　，靳中权　（１．新乡县植保植检站，河南新乡４５３００３；２．项城市农业科学研究所，河南项城４６６２００）　摘要：２００５年，在覆膜直播棉田试验了施田补、农思它、稻思达对各类杂草的防除效果，结果表明：　药后２０　ｄ、４５　ｄ，除农思它低剂量（９００　ｍｌ　关键词：直播棉田；杂草；防效　中图分类号：￥４５１．２２３　文献标识码：Ａ　文章编号：１００４—３２６８（２００６）０６—００６５—０２　）外，其余各处理的除草总防效均在９０％以上，以施田　补（２　２５０　ｍｌ／ｈｍ　）效果最好，防效在９６％以上，且各处理对棉花安全，增产效果明显。　棉田杂草是影响棉花增产的障碍因素之一，为　了选择广谱、高效、安全，且能一次性防除直播棉田　杂草的除草剂，２００５年，在覆膜直播棉田进行了施　田补、农思它、稻思达对各类杂草的防效，现将结果　报告如下。　１材料与方法　１．１供试药剂　ｏｌｅｒａｃｅａ　Ｌ）、反枝苋（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ　ｒｅｔｒｏｌｅｆｚｒｕｓ　Ｌ）等。　前茬为玉米，冬季闲置，未种任何作物。上茬玉米田　及闲置期间未曾使用除草剂。　２００５年４月１７日灌水，４月２１日用旋耕耙耙　地２遍，于２００５年４月２２日进行播种、施药、覆膜。　品种为高新抗五号，播量３０　ｋｇ／￣２。　１．３试验处理及施药情况　试验处理有：２５％农思它９００，１　３５０，１　８００　ｍｌ／ｈｍ　，稻思达１８０，２２５，２５５　ｇ／ｈｍ２和３３％施田补　２　２５０　ｍｌ／ｈｍ２以及空白对照。　．　２５％农思它ＥＣ（有效成分：露卓酮）拜耳作物科　学公司生产，８０％稻思达ｗｐ（有效成分：异曙唑草酮　）拜耳作物科学公司生产，３３％施田补ＥＣ（有效成　分：二甲戊乐灵）巴斯夫股份有限公司生产。　１．２试验地基本情况　试验小区按随机区组排列，３次重复，小区面积　３３　ｒｎ２。２００５年４月２２日棉花播种后，用“没得比”　喷雾器加扇形喷雾头均匀喷雾，每公顷用水量４５０　ｋｇ，施药时晴天、无风。施药后由于多风，墒情丧失　较快，于２００５年４月２９日及时灌水１次。　１．４调查方法　试验田设在河南省新乡市永安村南地。土质属　两合土，偏粘性，有机质含量１．２～１．３　ｇ／ｋｇ，ｐＨ值　７．０左右。灌溉便利，常年杂草发生较重，主要杂草　种类有：马唐［Ｄｉｇｉｔａｒｉａ　ｓａｎｇｕｉｎａｌｉｓ（Ｌ）Ｓｅｏｐ］、牛筋　草［Ｅｌｅｕｓｉｎｅ　ｉｎｄｉｃａ（Ｌ）Ｇａｅｒｔｎ］、马齿苋（Ｐｏｒｔｕｌａｃａ　于药后７　ｄ、１４　ｄ目测各处理对作物的药害率，　药后２０　ｄ调查对各种杂草株防效，药后４５　ｄ调查对　收稿日期：２００５—１２—２９　作者简介：马光春（１９６８一），女，河南新乡人，高级农艺师，本科，主要从事植保技术推广工作。　．争・．争・．争・．争・．争・寺・．争・．争・．争・．争・．争・寺・寺・．争・．争・．争・寺・寺・寺・寺・寺・寺・孛・・争・・争・・争・・争・寺・寺・・争・・争・・争・・争・・争・・争・・争・・争・・争・・争・・争・・争・・争・・争・・争・・争・寺・　［３１］ＲａｉｅｎａｒａＷ，Ｉ－Ｉａｅｋｅｔｔ　Ｋ　Ｊ，ＢｕｅｋｌｅｙＥ，ｅｔａ１．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａｎ－ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ　ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ　ｉｎ　ｂａｃ—　２００１，４１（３）：２２２—２３２．　［３４］　Ｃｏｒｙ　Ｊ　Ｓ．Ａｓｓｅｓｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ｒｉｓｋｓ　ｏｆ　ｒｅｌｅａｓｉｎｇ　ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　ｖｉｒｕｓ　ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄｅｓ：ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｔｏ　ｄａｔｅ［Ｊ］．Ｃｒｏｐ　Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，２Ｏ００，１９：７７９—７８５．　・　ｄｏ６ｒｕｓ：Ｐｂｔｅｎｔ　ｆｏｒ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ｐｅｓｔ　ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ［Ｊ】．　Ｂｉｏｃｈｉｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ａｃｔａ，２００６，１７６０：１５８—１６３．　［３２］　肖化忠，齐一鹏，杨复华．杆状病毒杀虫剂安全评价　的历史和现状［Ｊ］．生物工程学报，２００１，１７（３）：２３６　—［３５］ＳｍｉｔｈＣＲ，ＫｅｖｉｎＭＨ，ＣｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒＧＳ．Ｉｍｐａｃｔｏｆ　ｒｅ—　ｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｂａｅｕｌｏｖｉｒｕｓ　ｆｉｅｌｄ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｏｎ　ｎｏｎｔａｒｇｅｔ　ｈｅ—　２４０．　ｌｉｏｔｈｉｎｅ　ｐａｒａｓｉｔｏｉｄ，ｍｉｅｍｐｌｉｔｉｓ　ｃｒｏｃｅｐｅｓ（Ｈｙｍｅｎｏｐｔｅｒａ：　［３３］Ｆｕｘａ　Ｊ　Ｒ，Ｍａｔｌｅｒ　Ｍ　Ｍ，Ａｂｄｅｌ—Ｒａｈｍａｎ　Ａ，ｅｔ　ａ１．　Ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅ　ａｎｄ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｗｉｌｄ—ｔｙｐｅ　ａｎｄ　０ｍｂｉ—　Ｂｒａｃｏｎｉｄａｅ）［Ｊ］．Ｊ　ＥｃｏｎＥｎｔｃ￣ｎｏｌ，２０００，９３（４）：１１０９　—１１１７．　ｎａｎｔ　ｎｕｅｌｅｕｐｏｌｙｈｄｒｏｖｉｒｕｓｅｓ　ｉｎ　ｓｏｉｌ［Ｊ］．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ　Ｅｃｏｌ，　・６５・