棉花学报 ＣｏＲｏｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２０１２，２４（５）：４１４－－－４１９ 陆地棉ＧｈＳＰＬ３基因的克隆、亚细胞定位及表达分析 李洁ｕ，范术丽 ，宋美珍 ，庞朝友 ，喻树迅 （１．西北农林科技大学，陕西杨凌７１２１００；２．中国农业科学院棉花研究所／ 棉花生物学国家重点实验室，河南安阳４５５０００） 摘要：利用生物信息学结合ＲＴ．ＰＣＲ技术从陆地棉中克隆出ＳＰＬ转录因子．命名为ＧｈＳＰＬ３．在ＧｅｎＢａｎｋ的登 录号为ＪＮ７９５１３２。该基因包含一个４２６ｂｐ的ＯＲＥ（开放阅读框），推测编码１４１个氨基酸的多肽。生物信息学 分析表明ＧｈＳＰＬ３包含一个典型的ＳＢＰ结构域和一个核定位信号；进化树分析发现，ＧｈＳＰＬ３与ＡｔＳＰＬ３聚为 一组，推测棉花ＧｈＳＰＬ３和拟南芥ＡｔＳＰＬ３在结构和功能上可能有着一定的相似性。亚细胞定位表明，ＧｈＳＰＬ３ 定位于细胞核中，荧光定量ＲＴ—ＰＣＲ结果表明，ＧｈＳＰＬ３基因在棉花各组织中都有表达，但表达量不同。在花中 表达量最高，其次是在顶芽和茎中的表达量，在根和叶中表达量较低。通过分析ＧｈＳＰＬ３在顶芽的不同发育时 期的表达量发现，ＧｈＳＰＬ３在三片真叶展平时的顶芽中表达量最高，推测ＧｈＳＰＬ３可能在花芽的分化、生长阶 段的转变和花器官的形成上起着重要作用。 关键词：陆地棉；ＧｈＳＰＬ３；亚细胞定位；荧光定量ＲＴ—ＰＣＲ 中图分类号：￥５６２．０３５．３：Ｑ７８ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００２—７８０７（２０１２）０５—０４１４—０６ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＧｈＳＰＬ３ Ｇｅｎｅ ｉｎ Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ ｈｉｒｓｕｔｕｍ Ｌ． ＬＩ Ｊｉｅ ，ＦＡＮ Ｓｈｕ—ｌｉ ，ＳＯＮＧ Ｍｅｉ—ｚｈｅｎ ，ＰＡＮＧ Ｃｈａｏ—ｙｏｕ ，ＹＵ Ｓｈｕ—ｘｕｎ （１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｇｒｏｎｏｍｙ，ＮｏｒｔｈｗｅｓｔＳｃｉ—Ｔｅｃｈ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄＦｏｒｅｓｔ，Ｙａｎｇｌｍ￣Ｓｈａａｎｘｉ７１２１００，Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｏｔｔｏｎ ＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣＡＡＳ／ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＣｏｔｔｏｎＢｉｏｌｏｇｙ，Ａｎｙａｎｇ，Ｈｅｎａｎ４５５０００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＧｈＳＰＬ３，ａｎ ＳＰＬ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ，ｗａｓ ｃｌｏｎｅｄ ｆｒｏｍ ｕｐｌａｎｄ ｃｏ￣ｏｎ ｂｙ ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ＲＴ—ＰＣＲ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．Ｔｈｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ ｉｓ ＪＮ７９５１３２ ｉｎ ＧｅｎＢａｎｋ．Ｔｈｅ ＯＲＦ ｌｅｎｇｔｈ ｏｆ ＧｈＳＰＬ３ ｉｓ ４２６ ｂｐ ｗｈｉｃｈ ｅｎｃｏｄｅｓ １４１ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｒｅｓｉｄｕｅｓ．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ＧｈＳＰＬ３ ｃｏｎｔａｉｎｓ ａ ｔｙｐｉｃａｌ ＳＢＰ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｄｏｍａｉｎ ａｎｄ ａ ｎｕｃｌｅａｒ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｓｉｇｎａｌ； Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｔｒｅｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｔｈａｔ ＧｈＳＰＬ３ ａｎｄ ＡｔＳＰＬ３ ｗｅｒｅ ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｉｎ ｓａｍｅ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｕｓ ＧｈＳＰＬ３ ａｎｄ ＡｔＳＰＬ３ ｍｉｇｈｔ ｈａｖｅ ｓｉｍｉｌａｒ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｓｉｎｇａｌ ｏｆ ＧｈＳＰＬ３ ｗａｓ ｌｏｃａｌｉｚｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｎｕｃｌｅ— ＵＳ．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＲＴ—ＰＣＲ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ＧｈＳＰＬ３ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ａｌｌ ｔｉｓｓｕｅｓ．ｂｕｔ ｈｔｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｗｅｒｅ ｄｉｆｅｒｅｎｔ．Ｔｈｅ ＣＸ— ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＧｈＳＰＬ３ ｉｎ ｔｈｅ ｆｌｏｗｅｒｓ ｗａｓ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ，ａｎｄ ｔｈｅ ｌｏｗｅｒ ｗａｓ ｔｈａｔ ｉｎ ｓｈｏｏｔ ａｐｅｘｅｓ ａｎｄ ｉｎ ｓｔｅｍ，ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ ｔｈａｔ ｉｎ ｔｈｅ ｒｏｏｔ ａｎｄ ｉｎ ｔｈｅ ｌｅａｖｅｓ．Ａｍｏｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｓｔａｇｅｓ ｏｆ ｓｈｏｏｔ ａｐｅｘ，ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＧｈＳＰＬ３ ｗａｓ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ａｔ ｔｈｅ ｔｈｉｒｄ ｔｒｕｅ ｌｅａｆ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｓｔａｇｅ ｉｎ ｓｈｏｏｔ ａｐｅｘ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＲＴ—ＰＣＲ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ＧｈＳＰＬ３ ｍｉｇｈｔ ｐｌａｙ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅ ｉｎ ｂｕｄ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，ｔｈｅ ｔｒａｎｓｉｉｔｏｎ ｏｆｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｐｈａｓｅ ａｎｄ ｌｆｏｗｅｒ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ ｈｉｓｒｕｔｕｍ Ｌ．；ＧｈＳＰＬ３；ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ；ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＲＴ—ＰＣＲ ＳＰＬ（Ｓｑｕａｍｏｓａ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ—ｌｉｋｅ） 和环境信号应答等。 转录因子是高等植物所特有的一个转录因子家 ＡｔＳＰＬ３编码的蛋白因为能够识别花分生组 族。在拟南芥等模式植物上的研究发现，ＳＰＬ转 织特征基因ＡＰ１。而被认为与花的发育有关Ｉ】１。后 录因子家族具有诸多重要的生物学功能，主要参 来证实，在拟南芥中过量表达ＡｔＳＰＬ３引起植株 与了植物的花的形成及后期发育，叶的形态建成 幼年期缩短。能够使开花期提前ｆ２１。白桦树的Ｂｐ一 投稿日期：２０１２ ０２—１７ 作者简介：李洁（１９８７一），女，在读硕十，ｌｉｊｉｅ１９８６１２２３＠１２６．ｃｏｒｎ； 通讯作者：ｙｕ＠ｃｒｉｃａａｓ．ｃｏｍ．ｃｎ 基金项目：国家高技术研究发展计划（２０１１ＡＡ１０Ａ１０２）；国家棉花产业技术体系（ＣＡＲＳ一１８） ５期 李洁等：陆地棉ＧｈＳＰＬ３基因的克隆、亚细胞定位及表达分析 ４ｌ５ ＳＰＬ１基因与拟南芥的ＡｔＳＰＬ３具有很高的同源 明书进行。 性，能特异结合ＢｐＭＡＤＳ５启动子，参与调节花 １．３基因的获得 发育【３Ｊ。拟南芥的ＳＰｌＬ８不仅影响花药的发育而且 根据同源基因在不同物种问相对保守的特 参与ＧＡ的合成【 】：ＳＰＬ１４作为负因子 点，在ＴＡＩＲ网站上下载ＳＰＬ３的蛋白序列，以其 影响营养生长和开花的转换过程［ 】：ＳＰＬ９、ＳＰＬ１５ 为探针在ＮＣＢＩ上的陆地棉ＥＳＴ数据库进行 的功能缺失导致营养生长时期叶原基形成间隔 ｔｂｌａｓｔｎ检索，将所得ＥＳＴ序列用ＣＡＰ３在线拼 期变短，以及花序结构改变和分支增强同。 接，挑取与ＡｔＳＰＬ３同源性高的Ｃｏｎｔｉｇ，利用 ＳＰＬ转录因子在不同植物中已被成功克隆， ＮＣＢＩ进行ＯＲＦ（Ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ）搜索，设计引 如水稻［７１、桦树【３Ｊ、草莓【踟等，但在棉花中尚未见报 物扩增ｃＤＮＡ序列，引物序列（Ｐ１一ＵＰ，Ｐ１一ＤＷ）见 道。棉花开花早晚和产量、品质性状之间存在显 表１。回收目标条带，连接ｐＧＥＭ Ｔ—ｅａｓｙ载体，将 著相关关系『９１．已有研究表明ＡｔＳＰＬ３与控制开花 阳性克隆送往上海生工测序验证。 时间有关，因此研究棉花ＳＰＬ基因功能和表达特 １．４序列比较及进化树分析 性很有必要。本研究利用ＥＳＴ（Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｓｅ— 测序结果利用ＤＮＡｓｔａｒ软件分析，利用 ｑｕｅｎｃｅ ｔａｇ）数据库采用电子克隆的方法，从陆地 ＭＥＧＡ４．１软件进行ＳＰＬ３蛋白的系统进化分析， 棉中克隆了一个ＳＰＬ３基因，通过亚细胞定位分 进化树利用Ｎｅｉｇｈｂｏｒ—Ｊｏｉｎｉｎｇ方法构建，其中进 析其是否具有核定位功能，荧光定量ＲＴ．ＰＣＲ 行１０００次Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ分析以使得分枝的结果更 （Ｑｕａｎｔｉｔ￣ｉｖｅ ｒｅａｌ ｔｉｍｅ ＰＣＲ）分析其表达模式，初 可靠。 步探讨其在棉花生长发育中的作用，为进一步研 １．５亚细胞定位 究该基因的功能奠定基础。 用性内切酶Ｘｂａ Ｉ、Ｓｐｅ Ｉ酶切质粒 ｐＢＩ１２１一ＧＦＰ。应用Ｃｌｏｎｔｅｅｈ公司的Ｉｎｆｕｓｉｏｎ在线 １ 材料和方法 引物设计软件设计用于亚细胞定位的Ｉｎｆｕｓｉｏｎ引 １．ｊ实验材料 物（引物序列Ｐ２一ＵＰ，Ｐ２一ＤＷ见表１），以棉花顶 供试材料为短季棉品种中棉所３６（ｃｃｍ 芽ｃＤＮＡ为模板扩增ｃＤＮＡ片段，Ｃｌｏｎｔｅｃｈ公司 ３６），于２０１０年种植于中国农业科学院棉花研究 的Ｉｎ—ｆｕｓｉｏｎ快速连接试剂盒构建融合蛋白瞬时 所老所部试验地（河南安阳），分别取棉花的根、 表达载体ｐＢｌ １２１一ＧＦＰ—ＧｈＳＰＬ３，农杆菌浸染法转 茎、叶、花、纤维、顶芽等不同组织，棉花不同发育 化洋葱表皮细胞。将转化过的洋葱表皮置于 时期的顶芽在液氮中速冻，一８０℃冰箱保存备用。 １／２ＭＳ培养基上２８℃培养２ ｄ，最后在共聚焦显 １．２ ＲＮＡ的提取和ｃＤＮＡ的制备 微镜下观察并拍照。 ＣＴＡＢ法提取总ＲＮＡＶ０１。总ＲＮＡ经反转录 １．６荧光定量ＲＴ－ＰＣＲ分析 制备ｃＤＮＡ第一链，反转录按照Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司 利用ＡＢＩ公司的荧光定量试剂盒在ＡＢＩ ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔｌＩＩ Ｆｉｒｓｔ—Ｓｔｒａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ Ｋｉｔ说 ７５００ Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｓｙｓｔｅｍ荧光定量仪上采用 表１ 引物序列及用途 Ｔａｂｌｅ１ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ｐｒｉｍｅｒｓ ａｎｄ ｕｓｅ 编号ＣｏｄｅＮｏ． 序列Ｓｅｑｕｅｎｃｅ（５’ｔｏ ３’） 用途Ｕｓｅ Ｃｏｔｔｏｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ ４１６ 棉 花学报 ２４卷 ＳＹＢＲ ｇｒｅｅｎ Ｉ荧光染料法进行荧光定量 ＲＴ—ＰＣＲ．用相对定量Ｃｔ法分析，棉花ＡＣＴＩＮ为 内参，采用的基因引物序列（Ｐ４一ＵＰ，Ｐ４．ＤＷ）和 ＡＣＴＩＮ引物序Ｙ０（Ｐ５一ＵＰ，Ｐ５．ＤＷ）见表１。 １．７过表达载体的构建 ８００ｂｐ 应用Ｃｌｏｎｔｅｃｈ公司的Ｉｎｆｕｓｉｏｎ在线引物设计 软件设计Ｉｎｆｕｓｉｏｎ引物（引物序列Ｐ３一ＵＰ，Ｐ３．ＤＷ ５００ｂｐ 见表１）．扩增目的片段并回收纯化，同时用 ２００ｂｐ 性内切酶ＳｍａＩ和ＥｃｏＲＩ双酶切植物表达载体 ｐＲＩ１０１质粒，按照Ｉｎ—ｆｕｓｉｏｎ快速连接试剂盒说明 书进行连接，转化大肠杆菌ＤＨ５￣ｘ之后筛选阳性 图１ ＧｈＳＰＬ３基因ＰＣＲ产物（Ｍ：Ｍａｒｋｅｒ ＩＩＩ） 克隆并测序验证后转化农杆菌ＬＢＡ４４０４用于转 Ｆｉｇ．１ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｆ ＧｈＳＰＬ３（Ｍ ｉｓ 基因研究。 Ｍａｒｋｅｒ ＩＩＩ】 针，通过电子克隆和ＲＴ—ＰＣＲ，得到４２６ ｂｐ的 ２结果与分糯 ＯＲＦ，推测编码１４１个氨基酸，其中包含一个高 ２．１ 基因的克隆与分析 度保守的ＤＮＡ结合结构域一ＳＢＰ结构域且Ｃ末 利用拟南芥中ＳＰＬ３基因的蛋白序列为探 端带有保守的核定位信号（图２）。 １ ａｔ嚣鬈Ｃ酏ｃ∞ｇｃ８霸穗鬈ｃｔｇ矗８ｇ意蒜氆ａ｛堪ｇｇａｇａｃｃｇａａｇｇａ挑ｔｇ 艟 Ａ Ｓ Ｋ Ａ Ｅ Ｇ Ｋ Ｒ Ｒ Ｐ Ｋ Ｅ ４６ ｇｇｇｇａｇｇａｇｇａａｇａａｇａａｇａａｇａａｇａｇｇａｃｇａｇｇａｔａａｔａｇｔａ￣ｔ Ｇ Ｅ Ｅ Ｅ Ｅ Ｅ Ｅ Ｅ Ｅ Ｄ Ｅ Ｄ Ｓ Ｔ ９ １ ｌａｃ ｔ馨 ｔ ｇａｃｌｌｇａｔｇａｃａａｇａａｇｅｕｌ￣ａｇｌｇｃ鑫趣攫扭ｇａｇｇ ｔ ｃｃａｇｔ Ｔ Ｇ Ｄ Ｄ Ｄ Ｋ Ｋ Ｋ Ｋ Ｇ Ｋ Ｒ ６ Ｓ Ｓ ｌ ３６扭ｃ ｇｇｔ ｇｇｔｃｇｇａｇｇｃｔｃｃｔｇ ｔｃｔ ｔｃｃａｇｃｃ ｔｇｔ ｃａｇｇｔｃｇａｇａａｃ Ｇ Ｇ ｓ ｃ Ｌ Ｐ ｜ ｃ ｊ ｉ毽 毽 ｌ８ｌ ｔｇｃａＳｔｇｃｃｆａｃａｔｇａｃｃｇａｔｇｃｃａａａｃｇｇｔ薯ｔｃｃａｔｃｌｇｇｃｇ拽ｃ８ｔ ｃ 氛≮ 薯ｌ＇Ｉ薹 薯 ｔ 氛薯 ｜ ≯强｜ 采一 Ｒ。｜ ２２６ ａａｇｇｔｇｔｇｔｇ￣ｇｔｔＣＣａｔｇｃｃ￣ａｇｇｃｔ尊 ｔｇ￣ｇｇｔｔ￣ｇ鑫窖ｔｌ：ｇｃｌ： Ｉ ｘ｜ｔ ≥ ｃ ｊ琶｜ １墅｜冀｜ ｊ氛；。Ｋ≮ ｊ，氧 尊 臻 薯 ＲＩ Ｙ薯巍 ２７１ ｇｇｇａｔｃｅａｔｃａａｃｇｃｔｔｔｔｇｔｃａａｃ￣ｌ：ｇｔ扭ｇｃ＆ｇｇｔｔｃｃ穗ｔｇ８霉 ０ Ｑ 誊ｃＩ鼍 磊 —ｑ ｃｌ ｊｓ参 ｜ 誉 ０ ｜毫 ３１６ ｔｔａｔｅａｇａｇ￣ｔｔ茹扛ｔｇ８曩穗 ａ审ｕＢ８８ｌｇ掌矗摹ｃｔ孽ｔｃｇ８ｃ鬈ａｃｇｔｔｔ鬈 曩§ Ｅ 毫 羲 ｉ弧 蕊一ｌ ．．琵 嚣 ． ．ｉ基＇＿－＿嚣＿ ．ｋ ３６ｌ ｇｃｃｇｇａｃａｃａａｃｇａｇｃｇｃｃｇｔｃｇｇ８舱鑫ｇｔｔｃａｔｃｇｇａｔａｔｅ８ｔ 氧．．． １． 。 ．＿鏊一 毪．一 鏊． 一． 警Ｉ．益 ．Ｋ｜ ｓ誊 ｓ ｓ Ｅ Ｈ ４Ｏ６ ｇｇａｇａａｇｇｃ￣ｃ氆趋旧Ｌｔ它ｔ ｔｔ魏氨４２６ Ｇ Ｅ Ｇ Ｓ Ｆ 堆 阴影部分为ＳＢＰ结构域，下划线部分为核定位信号。 ＳＢＰ ｄｏｍａｉｎ ｉｓ ｓｈａｄｅｄ ａｒｅａ；ｕｎｄｅｒｌｉｎｅ ｉｓ ｎｕｃｌｅａｒ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｓｉｇｎａ１． 图２ ＧｈＳＰＬ３ ０ＲＦ全长与推导氨基酸序列 Ｆｉｇ．２ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ＧｈＳＰＬ３ ０ＲＦ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｄｅｄｕｃｅｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ２．２分子进化树分析 （ＡＴｌＧ２７３７０．１），ＳＰＬ１ｌ（ＡＴ１Ｇ２７３６０．１），ＳＰＬ１５ 利用ＭＥＧＡ ４．１对ＴＡＩＲ网站中收录的拟南 （ＡＴ３Ｇ５７９２０．１）和ＧｈＳＰＬ３进行系统进化树分 芥蛋白序列 ＳＰＬ３（ＡＴ２Ｇ３３８１０．１），ＳＰＬ４ 析。发现ＧｈＳＰＬ３和ＡｔＳＰＬ３聚为一组，推测棉花 （ＡＴ１Ｇ５３１６０．１），ＳＰＬ５ （ＡＴ３Ｇ１５２７０．１），ＳＰＬ６ ＧｈＳＰＬ３和拟南芥ＡｔＳＰＬ３在结构和功能上可能 （ＡＴ１Ｇ６９１７０．１），ＳＰＬ９ （ＡＴ２Ｇ４２２００．１），ＳＰＬ１０ 有着一定的相似性。 ５期 李洁等：陆地棉ＧｈＳＰＬ３基因的克隆、亚细胞定位及表达分析 ４１９ 化，因此推测当三片真叶展平时棉花花芽开始集 中分化，ＧｈＳＰＬ３的高调表达促进了这一活动。 在开花网络中，ＡｔＳＰＬ３直接激活花分 生组织基因ＬＦＹ、ＦＵＬ和ＡＰ１从而开花时 问『１３］。同时，ＳＰＬ基因还受开花途径整合因子 ＳＯＣ１的。ＳＯＣ１一ＳＰＬ模式整合了光周期途径 和赤霉素途径开花诱导信号从而控制开花时 ４１。 棉花中ＳＰＬ３基因是否在开花途径中起着同样的 作用，有待于进一步探索。而构建好的超表达载 体为进一步通过转基因验证ＧｈＳＰＬ３功能．深入 分析ＧｈＳＰＬ３在棉花生长发育中的作用奠定了 基础 参考文献 ［１］ＣＡＲＤＯＮ Ｇ，Ｋｌｅｉｎ Ｊ，Ｈｕｉｊｓｅｒ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆｔｈｅ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ＳＢＰ—ｂｏｘ ｇｅｎｅｓ［Ｊ］．Ｇｅｎｅ，１９９９，２３７（１）：９１一 ｌ０４． ［２］ＣＡＲＤＯＮ Ｇ Ｈ，Ｈｏｈｍａｎｎ Ｓ，Ｎｅｔｔｅｓｈｅｉｍ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆｔｈｅ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ ＳＢＰ—ｂｏｘ ｇｅｎｅ ＳＰＬ３：ａ ｎｏｖｅｌ ｇｅｎｅ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｆｌｏｒａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｊｏｕｒｎａｌ，１９９７，１２ （２）：３６７—３７７． ［３］ＬＡＮＮＥＮＰＡＡ Ｍ，Ｊａｎｏｎｅｎ Ｉ，Ｈｏｌｔｔａ—Ｖｕｏｒｉ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ａ ｎｅｗ ＳＢＰ—ｂｏｘ ｇｅｎｅ ＢｐＳＰＬ１ ｉｎ ｓｉｌｖｅｒ ｂｉｒｃｈ（Ｂｅｔｕｌａ ｐｅｎｄｕｌａ）『Ｊ１．Ｐｈｙｓｉ— ｏｌｏｇｉａ Ｐｌａｎｔａｒｕｍ，２００４，１２０（３）：４９１—５００． ［４］ＺＨＡＮＧ Ｙ，Ｓｃｈｗａｒｚ Ｓ，Ｓａｅｄｌｅｒ Ｈ，ｅｔ ａ１．ＳＰＬ８，ａ ｌｏｃａｌ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｉｎ ａ ｓｕｂｓｅｔ ｏｆ ｇｉｂｂｅｒｅｌｌｉｎ—ｍｅｄｉａｔｅｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ ｉｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．Ｐｌｎａｔ Ｍｏｌｅｃｕｌｒａ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００７，６３（３）：４２９—４３９． ［５】ＳＴＯＮＥ Ｊ Ｍ，Ｌｉａｎｇ Ｘ，Ｎｅｋｌ Ｅ Ｒ，ｅｔ ａ１．Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ＡｔＳＰＬ１４，ａ ｐｌｎａｔ－ｓｐｅｃｉｉｆｃ ＳＢＰ—ｄｏｍａｉｎ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ，ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅｓ ｉｎ ｐｌａｎｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｔｏ ｆｕｍｏｎｉｓｉｎ Ｂ１ ．Ｐｌａｎｔ Ｊｏｕｒ－ ｎａｌ，２００５，４１（５）：７４４—７５４． 【６］ＳＣＨＷＡＲＺ Ｓ，Ｇｒａｎｄｅ Ａ，Ｂｕｊｄｏｓｏ Ｎ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｍｉｃｒｏＲＮＡ ｒｅｇｕ－ ｌａｔｅｄ ＳＢＰ—ｂｏｘ ｇｅｎｅｓ ＳＰＬ９ ａｎｄ ＳＰＬ１５ ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｈｏｏｔ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ｉｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．Ｐｌｎａｔ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００８，６７（１／２）：１８３— １９５． ［７］ＹＡＮＧ Ｚ，Ｗａｎｇ Ｘ，Ｇｕ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ＳＢＰ—ｂｏｘ ｇｅｎｅ ｆａｍｉｌｙ ｉｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ａｎｄ ｒｉｃｅ［Ｊ］．Ｇｅｎｅ，２００８，４０７（１／２）：１— １１． ［８】赵晓初，李贺，代红艳，等．草莓ｍｉＲ１５６靶基因ＳＰＬ９的克 隆与表达分析［ＪＪ＿中国农业科学，２０１ １，４４（１２）：２５１５—２５２２． ＺＨＡＯ Ｘｉａｏ—ｃｈｕ，Ｌｉ Ｈｅ，Ｄａｉ Ｈｕｎｇ—ｙａｎ，ｅｔ ａ１．Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ Ｅｘ— ｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｍｉＲ１ ５６一Ｔａｒｇｅｔｅｄ ＳＰＬ９ Ｇｅｎｅ ｆｒｏｍ Ｓｔｒａｗ— ｂｅｒｒｙ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｔｉａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａ Ｓｉｎｉｃａ，２０１ １，４４（１２）：２５１５－２５２２． ［９】郭伟锋，曹新川，胡守林，等．海岛棉开花性状的发育遗传研 究Ⅲ．华北农学报，２００８，２３（ｔ￣）：１７３—１７６． ＧＵＯ Ｗｅｉ—ｆｎａｇ，Ｃａｎ Ｘｉｎ—ｃｈｕａｎ，Ｈｕ Ｓｈｏｕ—ｌｉｎ，ｅｔ ａ１．Ｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌ— ｙｓｉｓ ｆｏｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｂｅｈａｖｉｏｒ ｏｆ ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ ｒｔａｉｔｓ ｉｎ ｉｓｌａｎｄ ｃｏｔ— ｔｏｎ［Ｊ］，Ａｃｔａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｅ Ｂｏｒｅａｌｉ—Ｓｉｎｉｃａ，２００８，２３（Ｓｕｐｐ１）：１７３— １７６． ［１Ｏ］胡根海，喻树迅． 利用改良的ＣＴＡＢ法提取棉花叶片总 ＲＮＡ ｆＪ１．棉花学报，２００７，１９（１）：６９—７０． ＨＵ Ｇｅｎ—ｈａｉ，Ｙｕ Ｓｈｕ—ｘｕｎ．Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆｈｉｇｈ—ｑｕａｌｉｔｙ ｔｏｔａｌ ＲＮＡ ｉｎ ｃｏＲｏｎ ｌｅａｆｗｉｈｔ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ＣＴＡＢ ｍｅｔｈｏｄ［Ｊ］．ＣｏＵｏｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２００７，１９（１）：６９—７０． ［１１］ＹＡＮＧ ＪＨ，ＺｈａｎｇＭＦ，Ｙｕ ＪＱ．Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎ ｃｙｔｏｐｌａｓ— ｍｉｃ ｍａｌｅ ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ ａｎｄ ＳＰＬ－Ｉ￣ｅ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｓｔｅｍ ｍｎｓ— ｔａｒｄ［Ｊ］．Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉａ Ｐｌａｎｔａｒｕｍ，２００８，１３３（２）：４２６－４３４． 【１２］ｗｕ Ｇ，Ｐｏｅｔｈｉｇ Ｒ Ｓ．Ｔｅｍｐｏｒａｌ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｈｏｏｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｉｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ ｂｙ ｍｉＲ１５６ ａｎｄ ｉｔｓ ｔａｒｇｅｔ ＳＰＬ３［Ｊ］．Ｄｅ— ｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２００６，１３３（１８）：３５３９—３５４７． ［１３］ＹＡＭＡＧＵＣＨＩ Ａ，ｗｕ Ｍ Ｆ，Ｙａｎｇ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｍｉｃｒｏＲＮＡ ｒｅｇｕ— ｌａｔｅｄ ＳＢＰ—Ｂｏｘ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ＳＰＬ３ ｉｓ ａ ｄｉｒｅｃｔ ｕｐｓｔｒｅａｍ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｏｆＬＥＡＦＹ，ＦＲＵＩＴＦＵＬＬ ａｎｄ ＡＰＥＴＡＬＡ１ｆＪ］．Ｄｅｖｅｌ— ｏｐｍｅｎｔＣｅｌｌ，２００９，ｌ７（２）：２６８—２７８． 【１４］ＪＵＮＧ Ｊ Ｈ，Ｊｕ Ｙ，Ｓｅｏ Ｐ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ＳＯＣ１一ＳＰＬ ｍｏｄｕｌｅ ｉｎｔｅ— ｇｒａｔｅｓ ｐｈｏｔｏｐｅｒｉｏｄ ｎａｄ ｇｉｂｂｅｒｅｌｌｉｃ ａｃｉｄ ｓｉｇｎａｌｓ ｔｏ ｃｏｎｔｒｏｌ ｆｌｏｗ— ｅｒｉｎｇ ｔｉｍｅ ｉｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．Ｐｌｎａｔ Ｊｏｕｒｎａｌ，２０１１，６９（４）：５７７— ５８８． ●
