骨髓活检标本脱钙及除酸方法的改良

骨髓活检标本脱钙及除酸方法的改良

骨髓病理在某些血液病的诊断中起着关键性的作用，但是由于骨髓塑胶包埋成本较高的缘故，好多医疗单位骨髓病理都没有作为常规工作开展，本文介绍应用50%的甲酸甲醛水溶液对骨髓病理标本进行脱钙处理2小时左右，并在切片染色前用5%的碳酸钠除去残留酸。本法简单、方便，低耗、高效。适合一般单位日常工作。标签：骨髓;活检标本;脱钙;除酸;改良HGF染色过程为：Harris苏木素染色2-3分钟，流水冲洗3-5分钟，姬姆萨染2-3分钟，流水冲洗3-5分钟，酸性品红染色10-15秒，流水冲洗3-5分钟，75%、85%、95%乙醇3-5秒，无水乙醇1分钟脱水、透明、封 固。结果：本法处理的细胞结构完整，染色效果理想，各系各阶段细胞区分明显，核浆对比清楚。免疫组织化学染色：常规操作如下：1） 标本以2um厚连续切片，全部切片在 60℃低温烘烤1～2小时备用。2） 石蜡切片经二甲苯脱蜡3次，每次10分钟。3） 放入的无水乙醇3次后水化，每次3分钟。 4）蒸馏水洗3分钟，5%的碳酸钠处理本法切片3-5分钟。5） PBS 3次，每次3分钟。6）3％H2O2去离子水（无色液体）孵育10分钟，以消除过氧化物酶活性。7） PBS3次，每次3分钟后，按照要求进行抗原修复。8） 滴加一抗，37℃孵育1小时。 9） PBS冲洗3次，每次3分钟。 10） 滴加酶标记的二抗，37℃孵育15分钟。 11） PBS冲洗3次，每次3分钟。12） 滴加显色剂。13）自来水充分冲洗，清除残留显色液。14）淡苏木素复染细胞核，自来水充分冲洗。15）70％、80％、90％、95％、100％酒精脱水各一次，每次1分钟。16）二甲苯透明2次，每次6分钟。17）中性树胶封片。结果：染色结果明显、阴阳对比清楚。讨论：在以往的工作中，由于采用无机强酸，尽管浓度较低，时间仍不易控制，需要随时观察，否则可能会脱钙不彻底或脱钙过度，若脱钙不彻底，制片难度加大，甚至切不出蜡片。脱钙过度致使细胞溶解和组织破坏，致使无法诊断，特别是同时接收的骨髓标本大小、质地有别，同时处理更是难以控制时间，必须不断观察。而Bouin氏液脱钙时间较长，影响临床诊断及治疗。其他有机酸，例如冰醋酸进行脱钙时，刺激气味较大。其他有机酸工作中不大常用，不在被选范围。因而改用较高浓度的有机强酸-甲酸来做脱钙处理。尽管浓度较高，由于甲酸电离度低，酸度较小，几个标本脱钙可以同步进行，工作量减小，省去不断观察的麻烦，即使偶尔出现意外事件，稍微延长脱钙时间，对组织影响比较小，不会出现象无机强酸脱钙，出现标本报废的情况。虽然也要根据组织大小、质地调整时间，但不需反复观察，只需控制在1.5-2.5小时内先从脱钙液中取出较小、较软组织，后取较大较硬组织即可。试剂易得，配方简单。我科也曾尝试用其他其他浓度的甲酸脱钙，浓度过高，脱钙时间缩短，有些标本时间不易控制，特别是几个标本同时脱钙处理时。如果浓度太低，时间延长。另外，甲酸是一种弱酸，亦避免使用其它强酸和混合脱钙液在配制时接触可能出现的种种意外。配方中2种试剂，甲酸会使组织膨胀，甲醛会使组织收缩，因此保证细胞形态完好。且甲酸是甲醛的氧化形式，因此不会互相作用，对试验有不良影响。但是在使用中同其它有机试剂一样须注意放火安全。5%碳酸钠在脱蜡至水后除去残留酸，较之对组织处理，时间更短，较之其它试剂，如氢氧化钠等强碱，更加柔和，效果更好。我们曾经尝试不做残留酸的处理，发现切片染色后呈毛玻璃样，不够清晰。另外经实验发现免疫学检查受影响较小，因为（1）若抗原不耐酸，在固定过程中已遭破坏；（2）若耐酸则不受影响。且用碳酸钠处理切片后对抗原

结构恢复效果较好。参考文献［1］浦权，杨梅如.血液病骨髓诊断病理学［M］.北京科学出版社，2002.9［2］浦权，杨梅如.血液病骨髓组织病学［M］.上海科学技术文献出版社，2000.1