中国中医急症２０１４年８月第２３卷第８期ＪＥＴＣＭ．Ａｕｇ．２０１４，Ｖ０１．２３，Ｎｏ．８－１４２５－・研究报告・当归挥发油中藁本内酯对实验性非细菌性前列腺炎镇痛作用的研究木杨晶１袁博２颜红１张熙１彭买姣１贺菊乔２△（１．湖南中医药大学，湖南长沙４１０２０８；２．湖南中医药大学第一附属医院，湖南长沙４１０００７１中图分类号：Ｒ２８５．５文献标志码：Ａ文章编号：１００４—７４５Ｘ（２０１４）０８—１４２５－０３ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４—７４５Ｘ．２０１４．０８．０１２【摘要】目的观察当归挥发油中藁本内酯对实验性非细菌性前列腺炎的镇痛作用。方法以昆明小鼠与ＳＤ大鼠为实验对象，用阿司匹林与哌替啶为对照药物．设计了３个实验分别选择镇痛率、痛阔值及ＮＧＦｍＲＮＡ等指标对藁本内酯镇痛作用的量效关系和干预机理进行探讨。结果藁本内酯可以有效缓解醋酸、热板刺激所引起的小鼠疼痛反应，并能显著降低前列腺组织中ＮＧＦｍＲＮＡ的表达水平，且其量效关系呈现出一定的正相关性。结论藁本内酯具有较好的镇痛抗炎的效果。其镇痛作用的机制与降低非细菌性前列腺炎前列腺组织中ＮＧＦｍＲＮＡ的表达水平密切相关。【关键词】Ｒｅｓｅａｒｃｈｒｉａｌ当归藁本内酯前列腺炎镇痛ｔｈｅＥｆｆｅｃｔｏｆＬｉｇｕｓｔｉｌｉｄｅｉｎＡｎｇｅｌｉｃａＮａｐｈｔｈａＹＡＮＧＪｉｎｇ，ＹＵＡＮＢｏ，ＹＡＮＨｏｎｇ，ｅｔＡｎａｌｇｅｓｉｃＡｃｔｉｏｎｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＮｏｎｂａｃｔｅ－ｏｎｏｎＰｒｏｓｔａｔｉｔｉｓａ１．ＨｕｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｗｉｎｅ，Ｈｕｎａｎ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１０２０８，Ｃｈｉｎａ【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｔａｌｎｏｎｂａｃｔｅｒｉａｌａｎｄｐｅｔｈｉｄｉｎｅｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｌｉｇｕｓｔｉｌｉｄｅｉｎａｎｇｅｌｉｃａｎａｐｈｔｈａｍｉｃｅｏｎａｓａｎａｌｇｅｓｉｃａｃｔｉｏｎｏｆｅｘｐｅｒｉｍｅｎ—ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｐｒｏｓｔａｔｉｔｉｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＫｕｎｍｉｎｇｗｅｒｅａｎｄＳＤｒａｔｓｗｅＩ℃ｓｅｌｅｃｔｅｄｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｔｏｏｂｊｅｃｔａｎｄａｓｐｉｒｉｎｒａｔｅ，ｐａｉｎｒｅ－ｃｈｏｓｅｎａｓｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄｄｒｕｇｓ．３ａｓｗｅｒｅｄｅｓｉｇｎｅｄｂｙｃｈｏｓｉｎｇａｎａｌｇｅｓｉａｔｈｒｅｓｈｏｌｄａｎｄｍｏｄｅｌＮＧＦｍＲＮＡｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｉｎｄｉｃａｔｏｒｓｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｌｉｇｕｓｔｉｌｉｄｅ＇ｓｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ－ｒｅｓｐｏｎｓｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐａｎｄｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆａｎａｌｇｅｓｉｃｍｉｃｅｃａｕｓｅｄｂｙａｃｅｔｉｃａｃｉｄａｎｄｈｏｔｐｌａｔｅ，ａｎｄｐｒｏｓｔａｔｅｔｉｓｓｕｅ．Ｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ—ｒｅｓｐｏｎｓｅａｃｔｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＬｉｇｎｓｔｉｌｉｄｅＣａｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｃｅｒｔａｉｎｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙｒｅｌｉｅｖｅｔｈｅｐａｉｎｉｎｌｅｖｅｌｓｉｎｃａｎｒｅｄｕｃｅｔｈｅＮＧＦｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｏｓｉｔｉｖｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｐｒｅｓｅｎｔｅｄｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ａｃｔｉｏｎｉｓｃｌｏｓｅｌｙｒｅｌａｔｅｄｔｏＬｉｇｎｓｔｉｌｉｄｅｈａｓｇｏｏｄａｎａｌｇｅｓｉｃａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔ．ＴｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆａｎａｌｇｅｓｉｃｒｅｄｕｃｉｎｇｔｈｅＮＧＦｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｉｎｎｏｎｂａｃｔｅｒｉａｌｐｒｏｓｔａｔｅｔｉｓｓｕｅ．【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】Ａｎｇｅｌｉｃａ；Ｌｉｇｕｓｔｉｌｉｄｅ；Ｐｍｓｔａｔｉｔｉｓ；Ａｎａｌｇｅｓｉａ当归为常用的中药材之一，当归挥发油的主要成分是藁本内酯（Ｌｉｇｕｓｔｉｌｉｄｅ），其对中枢急性疼痛和急、慢性炎症均有明显抑制作用，具有一定的镇痛消炎作用［１］。前列腺炎是青壮年男性的一种常见病、多发病，在中国１５～６０岁男性报告前列腺炎症状的比例为８．４％Ｅ２】。会阴、小腹等部位胀痛不适为其主要的临床表能在抗炎镇痛方面有着不可替代的作用。本实验旨在探究当归挥发油中藁本内酯对实验性非细菌性前列腺炎的镇痛作用。１材料与方法１．１动物昆明种小鼠，体质量１８～２２ｇ，ＳＰＦ级；ＳＤ现之一。除外单纯的细菌感染，目前对前列腺炎的发病机制、病理生理学改变还不十分清楚，以至于在非细菌性前列腺炎症状消除方面尚无有效的治疗手段。而当归是中医临床治疗前列腺炎众多方药的重要组成部分，藁本内酯又作为当归发挥功效的主要承载部位．可雄性大鼠，体质量１８０－２００ｇ，ＳＰＦ级，均由湖南中医药大学实验动物中心提供，许可证号：ＳＣＸＫ（湘）２０１３—００１１。１．２药物藁本内酯由湖南中医药大学中药现代化重点实验室从当归挥发油中提取分离，纯度在８５％以上，用浓度为２％的吐温一８０生理盐水溶液溶解。阿司匹林肠溶片，５０ｍｓ／片，上海信谊药厂有限公司。盐酸哌替啶片，５０ｍｓ／片，青海制药厂有限公司。前两药使｝基金项目：湖南省科技厅资助项目（２０１３ＦＪ６０３９）△通信作者万方数据－１４２６－中国中医急症２０１４年８月第２３卷第８期ＪＥＴＣＭ．Ａｕｇ．２０１４，Ｖ０１．２３，Ｎｏ．８用时均用蒸馏水配成溶液。１．３试剂与仪器醋酸，湖南尔康制药股份有限公司生产，制成０．６％蒸馏水溶液。水合氯醛，青岛宇龙海藻有限公司生产，制成３．５％蒸馏水溶液。角叉菜胶，沈阳生物制品研究所生产，制成１％生理盐水溶液。甲醛，分析纯，湖南尔康制药股份有限公司。引物序列：（１）神经生长因子（ＮＧＦ），扩增片段大小（产物长度）５０４ｂｐ，上游引物５’一ＧＡＴＣＧＧＣＧＴＡＣＡＧＧＣＡＧＡＡＣ一３’．下游弓ｌ物５’一ＧＧＣＴＣＧＧＣＡＣｌ３＂ＧＧＴＣＴＣＡＡ一３’；（２）Ｂ—ａｃｔｉｎ（内参），扩增片段大小４１０ｂｐ，上游引物５＇－ＧＡＡＡＴＣＧＴＧＣＧＴＧＡＣＡＴＩ＇ＡＡ一３７，下游引物５’一ＣＴＡＧＡＡＧＣＡｒＩＴ】盯ＧＣＧＧＴＧＣＡ一３７。微量进样器，宁波市镇海三爱仪器厂。ＭＧＬ９６Ｇ型ＰＣＲ仪，杭州朗基科学仪器有限公司。ＧＩＳ凝胶图像处理系统，Ｔａｎｏｎ２５００全自动系统，上海天能科技有限公司。ＹＬＳ一６Ａ智能热板仪，山东省医学科学院设备站。１．４藁本内酯对醋酸致小鼠疼痛反应的影响５０只小鼠，雌雄各半，随机分成５组，每组１０只，即对照组，藁本内酯低、中、高剂量组（４、１２、２０ｍｇ／ａ），盐酸哌替啶片组（０．３ｍｇ／ｄ）。灌胃给药每日１次，每次每只０．５ｍＬ。对照组给予等量蒸馏水，均连续３ｄ。于末次给药后１ｈ，各鼠腹腔注射０．６％醋酸０．２ｍＬ／只。观察３０ｍｉｎ内各组内每只小鼠出现扭体反应（腹部内凹，伸展后肢，臀部抬高）次数，计算每组的平均值及各药镇痛率。镇痛率＝（对照组扭体次数一给药组扭体次数）／对照组扭体次数ｘ１００％。１．５藁本内酯对热板刺激小鼠疼痛反应的影响雌性小鼠随机分成５组，每组１０只，即对照组，藁本内酯低、中、高剂量组（４、１２、２０ｍ鲥），盐酸哌替啶片组（０．３ｍｇ／ｄ）。重复测其正常痛阈值，取３次平均值，作为该鼠给药前痛阈值。灌胃给药每日１次，每次每只０．５ｍＬ。对照组给予等量蒸馏水，均连续３ｄ。末次给药后０．５、１ｈ分别将小鼠放在５６℃热板上，记录自足底接触热板至开始舔后足的时间即给药后痛阈值。１．６藁本内酯对实验性非细菌性前列腺炎前列腺组织ＮＧＦｍＲＮＡ表达的影响大鼠随机分成６组，每组１０只，即正常对照组，模型对照组，藁本内酯低、中、高剂量组（４０、１２０、２００ｍｇ／ａ），阿司匹林肠溶片组（６０ｍｇ／ｄ）。灌胃给药每日１次，每次每只３ｍＬ。正常对照组、模型对照组给予等量蒸馏水，均连续１０ｄ。以２ｍＬ０．３％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，固定动物，开腹，暴露膀胱，用镊子轻轻拉出膀胱后颈部的前列腺，用无菌微量进样器向前列腺腹叶内注人３．３ｍｏｌ／Ｌ甲醛一巴豆油（８：２）混合致炎致痛液２０斗Ｌ，随机取其中１０只大鼠向前列腺腹叶内注入２０¨Ｌ生理盐水为正常对照组，将膀胱复位，逐层关腹。各组大鼠在末次给药后１ｈ，用０．３％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后处死，剖腹，剖取前万方数据列腺，除去脂肪组织后，立即投入液氮中保存，作进一步的逆转录一聚合酶链反应（ＲＴ—ＰＣＲ）实验。前列腺组织用嘶ｚｏｌ一步法提取总ＲＮＡ．用ＲＴ—ＰＣＲ方法扩增ｃＤＮＡ，扩增产物经电泳分离后，用凝胶成像系统照相。用图像分析软件分析凝胶图像检测ＮＧＦｍＲＮＡ显色条带的灰度值，与内参Ｂ—ａｃｔｉｎ之比值即表示ＮＧＦｍＲＮＡ表达水平口］。１．７统计学处理应用ＳＰＳＳｌ７．０统计软件。对计量资料进行正态性、方差齐性检验。满足正态性者，使用单因素方差分析（Ｆ检验），两两比较方差齐者采用ＬＳＤ法，方差不齐者采用Ｔａｍｈａｎｅｓｒ法；不满足正态性者使用秩和检验。Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。２结果２．１藁本内酯对醋酸致小鼠疼痛反应比较见表ｌ。与对照组比较，各给药组３０ｍｉｎ内扭体次数均增加（Ｐ＜Ｏ．０１）：与藁本内酯低剂量组比较，藁本内酯高剂量组及盐酸哌替啶片组３０ｍｉｎ内扭体次数减少（Ｐ＜０．０１）。提示藁本内酯具有较强的镇痛效果，其高剂量对醋酸致小鼠疼痛反应的镇痛率与盐酸哌替啶片近似。表１各组醋酸致小鼠疼痛反应的比较（石岛）与对照组比较，＋Ｐ＜０．０５，“Ｐ＜０．０１；与低剂量组比较，Ａｐ＜０．０５，“Ｐ＜０．０１。下同。２．２藁本内酯对热板刺激小鼠疼痛反应的比较见表２。给药前各组痛阈值未见明显差异。给药后０．５ｈ与对照组比较．藁本内酯中、高剂量组及盐酸哌替啶片组痛阈值均有所延长（Ｐ＜０．０５）；与藁本内酯低剂量组比较，盐酸哌替啶片组痛阈值显著延长（Ｐ＜０．０１）。给药后１ｈ与对照组比较，藁本内酯中、高剂量组及盐酸哌替啶片组痛阈值均延长（Ｐ＜０．０５）；与藁本内酯低剂量组比较，藁本内酯中、高剂量组及盐酸哌替啶片组痛阈值均延长（Ｐ＜０．０５）。表２各组热板刺激小鼠疼痛反应的比较（ｓ，省盎）２．３藁本内酯对实验性非细菌性前列腺炎前列腺组中国中医急症２０１４年８月第２３卷第８期ＪＥＴＣＭ．Ａｕｇ．２０１４，Ｖｄ．２３，Ｎｏ．８—１４２７０织ＮＧＦｍＲＮＡ表达的影响见表３。与正常对照组比到重视，现已为指南推荐的治疗药物。植物制剂主要指较，模型对照组前列腺组织中ＮＧＦｍＲＮＡ表达水平显花粉类制剂与植物提取物。其药理作用较为广泛，如非著增高（Ｐ＜０．０１）。与模型对照组比较，藁本内酯和阿特异性抗炎、抗水肿、促进膀胱逼尿肌收缩与尿道平滑司匹林肠溶片可降低前列腺组织中ＮＧＦｍＲＮＡ表达肌松弛等等［引，不良反应也较小。代表性药物如普适泰水平（Ｐ＜０．０５）。与低剂量组比较，藁本内酯高剂量组（舍尼通）。藁本内酯是当归、川芎等传统中药的主要有及阿司匹林肠溶片组前列腺组织中ＮＧＦｍＲＮＡ表达效成分之一，具有较强的药理作用，是一个极具开发价水平明显降低（Ｐ＜０．０１）。藁本内酯可以抑制实验性非值的化合物［６３。本研究利用从当归挥发油中提取分离细菌性前列腺炎前列腺组织中ＮＧＦｍＲＮＡ的表达．且出的藁本内酯，设计了３个实验针对其对非细菌性前其量效关系呈现一定的正相关性，以高剂量作用最为列腺炎的镇痛作用进行了探讨，实验结果显示，藁本内明显。酯对醋酸引起的小鼠疼痛反应具有较强的缓解作用，表３各组小鼠前列腺组织ＮＧＦｍＲＮＡ表达的影响（互虹）随着剂量的递增，其镇痛效果得以提升。藁本内酯还可减轻热板刺激所致的小鼠疼痛反应，但其起效速率及镇痛强度与哌替啶尚存在一定的差距。藁本内酯能够有效降低实验性非细菌性前列腺炎前列腺组织ＮＧＦｍＲＮＡ的表达水平，且其量效关系呈现明显的正相关性，以高剂量组的作用效果最优。综上所述，藁本内酯具有较好的镇痛抗炎的作用，可能为当归治疗非细菌性前列腺炎的有效部位所在。其镇痛作用的机制与降低前列腺组织中ＮＧＦｍＲＮＡ的表达水平密切相与正常对照组比较，’Ｐ＜Ｏ．０５，一Ｐ＜Ｏ．０ｌ；与模型对照组比较，△Ｐ＜０．０５，６△Ｐ＜Ｏ．０１；与低剂量组比较，＃Ｐ＜Ｏ．０５，槲Ｐ＜０．０１。关。然而藁本内酯要想开发成治疗前列腺炎的新药制剂还需要进一步优化提取工艺．阐明其抗炎镇痛的作３讨论用机理。近年来医学界围绕非细菌性前列腺炎疼痛症状的参考文献病理机制展开了一些研究，目前认识到其为多种因素［１］左爱华，王莉，肖红斌．藁本内酯药理学和药代动力学研究综合作用的结果，其中炎症介质、细胞因子扮演的角色进展［Ｊ］．中国中药杂志，２０１２，３７（２２）：３３５０—３３５３．尤为重要。当下研究最多的是ＮＧＦ，ＮＧＦ有调节伤害［２］Ｌｊ粕ｇＣＣ，ＵＨＪ，Ｗ柚ｇＺＰ，ｅｔａ１．ｎｅｐｒｅｖＭｅｎｃｅｏｆｐｍｓｍｔｉ－感觉神经元的作用并可调节和放大神经源性炎症。并ｔｉｓ－ｌｉｋｅｓｙｍｐｔｏｍｓｉｎＣｈｉｎａＥＪ］．ＪＵｗｌ，２００９，１８２（４）：５５８－与多种致炎介质之间形成一正反馈调节。参与慢性疼５６３．痛的形成和维持Ｈ］。在组织炎症时，成纤维细胞和施旺［３］郑佑君．芍药甘草汤加昧对慢性前列腺炎疼痛症状的临床细胞释放的ＮＧＦ可以刺激相应的靶细胞分泌炎症介观察及止痛机理研究［Ｄ］．长沙：湖南中医药大学，２０１１．质及细胞因子，使机体对伤害性刺激的敏感性增加．且［４］王秀丽．阿片肤及糖皮质激素与疼痛的神经免疫调节［Ｊ］．中华老年多器官疾病杂志２００５，４（２）：１４１—１４４．症状持续难以缓解。ＮＧＦ在神经源性炎症和伤害感受［５］那彦群，叶章群，孙光．中国泌尿外科疾病诊断治疗指南器上的作用以及其与前列腺痛的关系充分表明ＮＧＦ（２０ｌｌ版）［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，２０１１：１４３．基因表达与前列腺炎／前列腺痛的发病机理密切相关。［６］汪程远，杜俊蓉，钱忠明．藁本内酯的研究进展［Ｊ］．中国药植物制剂在Ⅱ型和Ⅲ型前列腺炎中的治疗作用日益受学杂志，２００６，４１（１２）：８８９—８９１．（收稿日期２０１４—０４—０２）（上接第１４１０页）核和呼吸杂志，２０１３，３６（４）：１－１０．吸杂志，２００７，４６（３）：２５４—２６１．［３］中华医学会呼吸病学分会慢性阻塞性肺疾病学组．慢性阻（收稿日期２０１４—０５—２４）塞性肺疾病诊治指南（２００７年修订版）［Ｊ］．中华结核和呼万方数据当归挥发油中藁本内酯对实验性非细菌性前列腺炎镇痛作用的研究
作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：
杨晶， 袁博， 颜红， 张熙， 彭买姣， 贺菊乔
杨晶,颜红,张熙,彭买姣(湖南中医药大学,湖南长沙,410208)， 袁博,贺菊乔(湖南中医药大学第一附属医院,湖南长沙,410007)
中国中医急症
Journal of Emergency in Traditional Chinese Medicine2014,23(8)
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