Loading Buffer 蛋白印记

5×SDS-PAGE Loading Buffer的配制（10 ml）

（本方案摘自《蛋白质技术手册》汪家政、范明）

组分：Tris-HCl pH6.8（60 mM）；SDS （2%）；溴酚兰（0.1%）；甘油（25%）；β-巯基乙醇（14.4 mM）

配制过程：

1. 量取1M Tris-HCl （pH6.8） 0.6 ml；50%的甘油5 ml；10%的SDS溶液2 ml；1%的溴酚兰1 ml；

2. 加入去离子水定容至10 ml；

3. 分装；

4. 在4℃可保存数周，-20℃可保存数月之久。

你还可以参考下面这个配方：

2×SDS凝胶加样缓冲液 组分（摘自《分子克隆》第三版）

Tris-HCl pH6.8（100 mM）；SDS （4%）；溴酚兰（0.2%）；甘油（20%）；β-巯基乙醇或二

硫苏糖醇（200 mM）

不含硫代试剂的加样Buffer可在室温保存。β-巯基乙醇或二硫苏糖醇临用前加入。

我想配点儿5X的loading buffer, 分子克隆上写着10%SDS，我的配制思路是（200ml）25ml1M Tris pH6.8, 20gSDS, 及1g溴酚蓝配制到100mL，然后再加100ml甘油，但是问题是20gSDS要溶解到那么小体积的水中实在是困难，我把SDS溶解（其实大部分是不溶的）放到65度烘箱里，放大概几个小时，SDS倒是溶了，但是变得非常黏稠，摇都摇不动的那种，跟果冻似的，请问这样配法是不是正确，如果不正确应该怎样配，请配过的大虾教教我，最好有详细配制流程。

5X的loading buffer已经配制成功，虽然SDS很难溶，但还是溶了。。。因为5X的上样量可以大一些，做western的时候比较有用，2X的我有配好的，呵呵

我想说以下几点：

1.SDS-PAGE loading buffer一般配成2X 的，5X loading buffer确实过于粘稠，且SDS在低温下难溶于水，这就导致你配的buffer“摇都摇不动”了

2.不知你为何要配那么多loading buffer（况且是5X的），这些东西都是用量很少的，建议你少配些，比如……10 ml？

3.以下就以2X loading buffer（配制10 ml）为例说明配制步骤

首先配制1 mol/L Tris-HCl(pH6.8)，10%SDS溶液。

然后称取0.02 g溴酚蓝于小烧杯里，依次加入1 mol/L Tris-HCl(pH6.8) 1ml，10%SDS溶液4ml，甘油2ml，去离子水2ml，2-巯基乙醇1ml。混匀，分装成小份，-20度保存。用时溶解，与样品1:1混合上样。

需要说明的是，2-巯基乙醇是还原剂，也可用前加入，以防失效。

5×SDS-PAGE Loading Buffer TAKARA select

组分浓度：

• 250mM Tris-HCl（PH6.8）;

• 10%（W/V） SDS；

• 0.5%（W/V） BPB；

• 50%（V/V）甘油；

• 5%（V/V） 巯基乙醇（2-ME）

配制量：

• 5ml

配制方法：

1. 量取试剂（1M Tris-HCl（PH6.8） 1.25ml；SDS 0.5g；BPB 25mg；甘油 2.5ml），置于10ml 塑料离心管中。

2. 加去离子水溶解后定容至5ml。

3. 小份分装后室温保存。

4. 使用前加入2-ME（50ul/1ml）

5. 加入2-ME的Loading Buffer可在室温保存一个月左右。

5XSDS上样缓冲液

0.5 mol/L Tris·HCl（pH6.8） 2.5ml 缓冲

二硫叔糖醇（DTT，MW1.5） 0.39g 维持蛋白稳定

SDS 0.5g 形成SDS-PRO复合物，使pro带负电

溴酚蓝 0.025g 示踪指示剂

甘油 2.5ml 增加样品比重，利于加样（胶中甘油可减少

电渗

• 我用的是10ml:

• 0.5mol/L Tris-HCl(pH6.8) 1.0 ml

• 甘油 1.0ml

• 20%SDS(w/v) 1.0ml

• β-巯基乙醇 0.5ml

• 0.1%溴酚蓝（w/v） 0.25ml

• 双蒸水 6.25ml

• dog002 (2014-7-07 17:56:00)

My 2XSDS sample bffer配方是：

2.4 ml 0.5mol/L Tris-HCl(pH6.8)

4 ml 10% SDS

2ml 甘油

0.5ml 0.5% 溴酚蓝

0.1 ml 双蒸水

β-mercaptoethanol

必须在水浴之前新鲜加入， 终浓度是10%

5X Sample buffer (loading buffer):

10% w/v SDS

10 mM Dithiothreitol, or beta-mercapto-ethanol

20 % v/v Glycerol

0.2 M Tris-HCl, pH 6.8

0.05% w/v Bromophenolblue