屈玉兰等 白细胞介素１Ｏ通过抑制自噬调节树突状细胞功能第３期 ・３３３・ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－４８４Ｘ．２０１７．０３．００３ 白细胞介素１０通过抑制自噬调节树突状细胞功能① 屈玉兰邓捷文②③邓常文夏福灿④郭振红③ 白 冲 （第二军医大学长海医院呼吸与危重症医学科，上海２００４３３） 中图分类号［摘１１３９２．１２ 文献标志码Ａ 文章编号１０００－４８４ｘ（２０１７）０３－０３３３－０５ 要］ 目的：研究白细胞介素ｌ０（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一１０，ＩＬ－１０）对树突状细胞（Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ，ＤＣｓ）自噬及功能的影响。方 法：体外培养Ｃ５７ＢＬ／６小鼠骨髓来源的ＤＣｓ分为对照组、ＬＰＳ刺激组、ＩＬ－１０干预组、ＩＬ一１０与雷帕霉素干预组、雷帕霉素干预 组，分别通过流式细胞术分析ＤＣｓ表面共刺激分子ＣＩＭ０、ＣＤ８０的表达、ＤＣｓ摄取ＯＶＡ抗原的比例以及诱导ＯＴ２细胞增殖比 例，ＥＬＩＳＡ检测ＤＣｓ分泌ＩＬ－６，ＴＮＦ一０【的水平等ＤＣｓ相关功能；蛋白免疫印迹法检测ＤＣｓ自噬蛋白ＬＣ３的表达，比较组间差 异，以探讨ＩＬ—ｌ０对ＤＣｓ功能及自噬的影响。结果：（１）与ＬＰＳ刺激组比较，ＩＬ一１０处理组ＤＣｓ的表面共刺激分子ＣＤ４０、ＣＤ８０ 的表达下降、分泌ＩＬ－６、ＴＮＦ—ｄ水平下降、刺激Ｔ细胞增殖的比例明显减弱、摄取ＯＶＡ抗原的能力增加，ＩＬ．１０＋雷帕霉素干预 组的ＤＣｓ与ＩＬ－１０单独处理组相比，表面ＣＤ８０的表达明显增加（Ｐ＜０．０５）、分泌ＩＬ－６、ＴＮＦ—ｏｔ能力及刺激Ｔ细胞增殖的能力均 明显增加（Ｐ＜０．０００ １）。（２）ＤＣｓ的自噬相关蛋白（ＬＣ３Ｈ／ＬＣ３ Ｉ比例）明显下降。结论：ＩＬ一１０可能通过抑制ＤＣｓ自噬水平调 节树突状细胞功能。 ［关键词］ 白细胞介素１０；树突状细胞；自噬；调节功能 Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１０ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ ｔｈｒｏｕｇｈ ａｕｔｏｐｈａｇｙ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ Ｑｕ Ｙｕ—Ｌａｎ，ＤＥＮＧ Ｊｉｅ—Ｗｅｎ，ＤＥＮＧ Ｃｈａｎｇ—Ｗｅｎ，ＸＩＡ Ｆｕ—Ｃａｎ，ＧＵＯ Ｚｈｅｎ－Ｈｏｎｇ，ＢＡＩ Ｃｈｏｎｇ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＲｅｓｐｉｒａ— ｔｏｒｙ Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｃａｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｃｈａｎｇｈａｉ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅ￣ｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２００４３３，Ｃｈｉｎａ ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ＯＭｅｅｔｉｖｅ：Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一１０（ＩＬ一１０）ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ（ＤＣｓ）．Ｍｅｔｈ－ ｏｄｓ：Ｃｕｌｔｕｒｅｄ Ｃ５７ＢＬ／６ ｍｏｕｓｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ－ｄｅｒｉｖｅｄ ＤＣｓ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ５ ｇｒｏｕｐｓ：ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ＬＰＳ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｇｒｏｕｐ，ＩＬ一１０ ｔｒｅａｔｅｄ ｇｒｏｕｐ，ＩＬ一１０＋Ｒａｐａｍｙｃｉｎ ｔｒｅａｔｅｄ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ Ｒａｐａｍｙｃｉｎ ｔｒｅａｔｅｄ ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ＩＬ－１０ ｏｎ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｅｖａｌｕａ－ ｔｅｄ ｆｒｏｍ ＤＣｓ ｆｕｎｃｔｉｏｎ，Ｆｌｏｗ ｅ￣ｏｍｅｔｙ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｒｏ ａｎａｌｙｓｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＤＣｓ ｓｕｒｆａｃｅ ｃｏ—ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ ＣＤ８０，ＣＤ４０ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｔｈｅ ａｂｉｌ— ｉｔｙ ｏｆ ｕｐｔａｋｉｎｇ ａｎｔｉｇｅｎ ａｎｄ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｔ ｃｅｌｌ ｔｏ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｅ；ＥＬＩＳＡ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｅｙｔｏｋｉｎｅｓ ＩＬ－６ ａｎｄ ＴＮＦ一 ．Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ａｎａｌｙｓｅ ｔｈｅ ａｕｔｏｐｈａｇｙ ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ＬＣ３．Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｇｒｏｕｐｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：（１）Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｏ ＬＰＳ ｓｔｉｍｕ— ｌａｔｅｄ ｇｒｏｕｐ，ＩＬ一１０ ｔｒｅａｔｅｄ ｇｒｏｕｐ，ＤＣｓ ｓｕｒｆａｃｅ ｃｏ—ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ ＣＤ４０，ＣＤ８０ ｗｅｒｅ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ，ＩＬ－６ ａｎｄ ＴＮＦ— ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ａｎｄ ｔｈｅ ａｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｓｔｉｍｕｌａｔｅ Ｔ ｃｅｌｌ ｔｏ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｅ ｗｅｒｅ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ，ｔｈｅ ａｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｃａｐｔｕｒｅ ＯＶＡ ａｎｔｉｇｅｎ ｗａｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ．Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｏ ＩＬ・１０ ｔｒｅａｔｅｄ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ＤＣｓ ｓｕｒｆａｃｅ ｃｏ－ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ ＣＤ８０ ｗａｓ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５）．１Ｌ－６ ａｎｄ ＴＮＦ一仪ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ａｎｄ ｔｈｅ ｂｉａｌｉｔｙ ｔｏ ｓｔｉｍｕｌａｔｅ Ｔ ｃｅｌｌ ｔｏ ｐｒｏｌｉｆｅｒ－ ａｔｅ ｗｅｒｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜Ｏ．０００ Ｉ）ｉｎ ＩＬ—１０＋Ｒａｐａｍｙｃｉｎ ｔｒｅａｔｅｄ ｇｒｏｕｐ．Ｉｎ ａｄｄｉｔｉｏｎ，ａｕｔｏｐｈａｇｙ ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ＬＣ３ Ｈ／ＬＣ３ １ ｗａｓ ｄｅ・ ｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ＩＬ・１０ ｔｒｅａｔｅｄ ｇｒｏｕｐ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＩＬ一１０ ｍａｙ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ＤＣｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｔｈｅ ａｕｔｏｐｈａｇｙ ｏｆ ＤＣｓ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一１０；Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ；Ａｕｔｏｐｈａｇｙ；Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ 树突状细胞（Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ，ＤＣｓ）作为目前最 强大的抗原递呈细胞，在肿瘤、炎症及其他免疫反应 中起着关键作用，与多种疾病（如：肿瘤、哮喘、自身 免疫性脑脊髓炎等）密切相关 Ｊ。ＤＣｓ逐渐成熟的 过程中，其表面共刺激分子及ＭＨＣ ｌＩ表达增加，成 为Ｔ淋巴细胞依赖的免疫反应最有效的诱导者。 因此ＤＣｓ的功能对抑制疾病的发生发展具有 至关重要的作用。ＩＬ．１０是Ｔｈ２型细胞因子的家族 ①本文受国家自然科学基金面上项目（８１２７００７３，８１５７００１９）资助。 ②共同第一作者。 ③第二军医大学医学免疫学国家重点实验室，上海２００４３３。 ④浙江大学医学院免疫研究所，杭州３１００５８。 作者简介：屈玉兰（１９９０年一），女，在读硕士，主要从事慢性气道疾病 与树突状细胞相关性的机制研究。 成员，目前被认为最重要的负因子之一，具有强 大的抗炎和免疫抑制作用。包括树突状细胞在内， 其他如Ｔ细胞、巨噬细胞、Ｂ细胞在参与免疫反应时 通讯作者及指导教师：白冲（１９６４年一），男，博士，教授，主要从事 慢性呼吸道疾病的相关研究，Ｅ—ｍａｉｌ：ｂｃ７８７ ８＠ｓｏｂｕ．ｃｏｉｎ 都能产生ＩＬ一１Ｏ＿２ Ｊ。ＩＬ．１０ 小鼠生存能力及感染严 重程度也明显低于野生组。既往研究表明ＩＬ．１０能 中国免疫学杂志２０１７年第３３卷 够影响ＤＣｓ的分化及其表面共刺激分子的表达。 如ＩＬ－１０能够抑制ＩＦＮ一＾ｙ和ＴＮＦ—ｏ【对ＤＣｓ表面共刺 激分子的活化 ，４ Ｊ。但是ＩＬ—ｌ０到底如何调节ＤＣｓ 的功能仍然存在争议。 处死Ｃ５７ＢＬ／６小鼠，无菌取出股骨胫骨，１ ｍｌ注射 器冲洗出骨髓细胞，用移液吹成单细胞悬液后离 心，Ｔｒｉｓ．ＮＨ Ｃ１溶解红细胞，过滤后离心，用完全培 养基（ＲＰＭＩ１６４０培养基＋１０％胎牛血清＋ｍＧＭ－ＣＳＦ １０ ｎｇ／ｍｌ＋ｍｌＬ－４ １ ｎｇ／ｍ１），重悬后加入６孔板培养， 培养３ ｄ后，弃除培养基及悬浮细胞，重新加入新鲜 自噬是广泛存在于真核生物的基本生命现象复 制，在大多数细胞内起着“清道夫”的作用，是细胞 内细胞器和其他结构自然减员和更新的正常途 径 Ｊ。自噬分为大自噬、小自噬和分子伴侣介导的 自噬，而大自噬是最主要的方式。。 。自噬作为一种 完全培养基，以后每天换液。第５天的为未成熟骨 髓来源的树突状细胞（ｉｍｍｕｔｕｒｅ ｂｏｎｅ ｍａ￣ｏｗ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ，ｉｍ—ＢＭＤＣ），第７天以后的为成熟的树 进化保守的细胞降解途径，涉及广泛，在包括肿瘤、 衰老、炎症在内的各种免疫反应中都起重要作 用Ｅ５，７］，研究发现自噬不仅在ＤＣｓ的发育过程中起 着重要的作用，即外周血单核细胞在向ＤＣｓ转化的 过程中，自噬明显增强 ｊ，而且自噬与ＤＣｓ的功能 也存在一定的关系，如ＲＳＶ病毒感染后，能诱导 ＤＣｓ发生自噬从而分泌炎性因子，发生天然免疫反 应 。ＴＬＲ信号通路的激活能明显促进ＤＣｓ的成 熟及炎症因子的分泌，ＬＰＳ作为经典的ＴＬＲ４刺激 剂也能通过促进ＤＣｓ自噬从而活化ＤＣｓ【１０，１１ Ｊ。因 此通过抑制ＤＣｓ自噬可能成为抑制ＤＣｓ活化的途 径。我们研究发现ＩＬ一１０能抑制ＬＰＳ对ＤＣｓ的活化 作用，并且这一作用可能通过抑制ＤＣｓ自噬实现 的。这一研究有望为临床治疗ＤＣｓ相关疾病提供 新的思路。 １材料与方法 １．１实验材料、试剂Ｃ５７ＢＬ／６小鼠，雄性，６～８ 周龄，均购自上海必凯实验动物有限公司［许可证 号：ＳＹＸＫ（沪）２０１３－００５８］。Ｃ５７／Ｂ６及ＯＴ２小鼠均 在第二军医大学免疫学国家重点实验室ＳＰＦ级动 物房饲养［许可证号：ＳＹＸＫ（沪）２０１３－００１６］。所有 动物实验经第二军医大学实验动物伦理委员会批 准。Ｃｈｉｃｋｅｎ Ｏｖａｂｕ ｍｉｎ（ＯＶＡ）购自美国Ｓｉｇｍａ公 司。不同荧光标记的大鼠抗小鼠流式抗体ＣＤ１１Ｃ— ＰＥ ＣＤ１ １ ｃ—ＡＰＣ ＣＤ８６一ＰＥ ＣＤ８０－ＦＩＴＣ ＣＤ４０．ＰＥ ＩａＫｂ—ＦＩＴＣ、ＣＤ４一ＡＰＣ，以及ＦＩＴＣ、ＡＰＣ或者ＰＥ标记 的同行对照ＩｇＧ２等均购自美国ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ公 司，分装后于４￣Ｃ保存；ｒｍＩＬ．１０购自美国ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ 公司。小鼠重组ＧＭ—ＣＳＦ、ＩＬ４购自Ｐｒｏｍｅｇａ公司， 分装后一８０℃保存备用。ＩＬ．６、ＴＮＦ— ＥＬＩＳＡ试剂盒 均购自ｅ－Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ公司。细胞裂解液（Ｃｅｌｌ ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ）、蛋白酶抑制剂（Ｐｒｏｔｅａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｃｏｃｋｔａｉｌ ｓｅｔ １１，ＥＤＴＡ—Ｆｒｅｅ）ＬＣ３Ｂ抗体等均购自美国ＣＳＴ公司。 １．２方法 １．２．１小鼠骨髓树突状细胞的培养颈椎脱臼法 突状细胞（ｉｎ－ＢＭＤＣ）。 １．２．２ ＢＭＤＣｓ表面共刺激分子及分泌细胞因子的 检测观察ＩＬ．１０对培养ＢＭＤＣ作用时，将常规培 养的ＢＭＤＣ于第５天吹下疏松贴壁的增值性细胞 聚集体，即为富集的ＢＭＤＣ。离心后用含１０％ＦＢＳ 的血清重悬细胞并铺于２４孑Ｌ板（１×１０。细胞／孔）， 将实验分为：（１）空白对照组；（２）ＬＰＳ １００ ｎｇ／ｍｌ刺 激组；（３）ＩＬ－ｌ０干预组；（４）ＩＬ一１０＋雷帕霉素干预 组；（５）雷帕霉素干预组。３７℃、５％ＣＯ 孵箱中培养 １２ ｈ后，分别收集各孔的细胞及培养上清。ＥＬＩＳＡ 法检测各组细胞培养上清中的ＩＬ－６、ＴＮＦ．ｏｌ的水平， 流式细胞术分析ＤＣｓ表面共刺激分子的表达水平。 １．２．３流式检测ＢＭＤＣｓ摄取ＯＶＡ抗原的能力 观察ＩＬ一１０对ＢＭＤＣｓ对ＯＶＡ抗原的摄取能力时， 将实验分为空白对照，ＬＰＳ（１００ ｒｉｇ／ｍ１）刺激组，ＩＬ一 １０预处理后ＬＰＳ刺激组。即预先用ＩＬ．１０处理ＢＭ． ＤＣｓ １０ ｈ后，用ＬＰＳ刺激１２ ｈ，将细胞收集后转入 １．５ ｍｌ ＥＰ管中，各组分为４℃冰箱中孵育组和３７℃ 孵箱中孵育组。处理Ｂｌａｎｋ组，不加入ＯＶＡ外，余 各组加入荧光标记的ＯＶＡ（１：２ ０００）孵育２ ｈ后，冷 的ＰＢＳ洗涤２次后，加入ＣＤ１１ｃ—ＰＥ流式抗体，４ｃｃ 孵育３０ ｍｉｎ后用冷的ＰＢＳ洗涤后重悬，进行流式 检测。 １．２．４ Ｔ淋巴细胞增殖实验及Ｔ细胞活化反应检 测颈椎脱臼发处死ＯＴ２小鼠，无菌取出脾脏，研 磨制备单细胞悬液，用Ｔｒｉｓ．ＮＨ Ｃ１破红后，滤网过滤 后离心，弃上清，ＣＤ４磁珠分选出Ｔ细胞并细胞计 数。ＣＦＳＥ进行细胞染色，用预冷的ＲＰＭＩ１６４０培养 基洗涤１次。ＯＴ２细胞计数后用１０％１６４０培养基 调整细胞浓度为１０。个／ｍｌ，并以１Ｏ 个／孔铺板于 ９６孔圆底培养板，各组ＤＣｓ加入到预置孔中，以 ＤＣｓ：Ｔ＝１：１０比例铺板。３７℃、５％ＣＯ 的孵箱中孵 育７２ ｈ后检测Ｔ细胞增殖情况。 １．２．５ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测各组ＢＭＤＣ自噬水平 收集第５天的ＢＭＤＣ，以３×１０。铺板于６孔板。用 ＬＰＳ刺激ＤＣｓ，收集不同时间点的ＤＣｓ。找出ＬＰＳ 屈玉兰等白细胞介素１０通过抑制自噬调节树突状细胞功能第３期 刺激ＤＣｓ发生自噬的最强时间点；用ＩＬ．１０预处理 ＤＣｓ后，加入ＬＰＳ（１００ ｎｇ／ｍ１）刺激，在上述得出的 最佳时间点收集细胞，用冷ＰＢＳ洗涤后，加入细胞 裂解液冰上裂解半小时，４ｃＩ＝离心机１２ ０００ ｒ／ｍｉｎ 离心１０ ｍｉｎ后吸取上清。ＢＣＡ法测定蛋白浓度并 将浓度配平后，加入准备好的上样缓冲液，于 １００￣Ｃ水浴锅煮沸５ ｍｉｎ，各取３０ ｇ蛋白进行 １２％ＳＤＳ—ＰＡＧＥ电泳，６０ Ｖ电泳３０ ｍｉｎ后以１２０ Ｖ 电泳６０ ｍｉｎ，再以１００ Ｖ、９０ ｒａｉｎ恒压转移到ＮＣ膜 上。再用５％脱脂奶粉／ＴＢＳＴ室温下封闭１．５ ｈ， 分别用羊源的 ．ａｃｔｉｎ抗体（１：５００），兔来源的Ｐ６２ 抗体（１：３ ０００），ＬＣ３ ＩＩ（１：１ ０００），４℃孵育过夜。 次日用相对应的二抗在室温孵育１ ｈ后，加入ＡＢ 液曝光。 １．３统计学分析所有实验数据使用Ｐｒｉｓｍ Ｇｒａｐｈ— Ｐａｄ ６．０软件进行统计学分析，所有计量数据均以 ± 表示。对各组数据先进行正态检验和方差分 析，符合正态分布和方差齐性的数据采用单因素方 差分析，不符合正态分布和方差齐性的数据则采用 Ｋｒｕｓｋａｌ—Ｗａｌｌｉｓ检验。Ｐ＜０．０５表示差异具有统计学 意义。 ２ 结果 ２．１ ＩＬ．１０能抑制ＤＣｓ功能且能被自噬促进剂雷 帕霉素逆转 ２．１．１ ＩＬ一１０能抑制ＤＣｓ表面活化标记在细胞培 养第５天时，将ＩＬ—ｌ０预处理ＤＣｓ后，再用ＬＰＳ刺激 后发现，ＬＰＳ能明显刺激ＤＣｓ活化，而用ＩＬ—ｌ０处理 后则能明显抑制ＤＣｓ表面共刺激分子ＣＤ８０、ＣＤ４０ 的表达（图１Ａ、Ｂ），并且差异均具有统计学意义（各 组问比较，ＦＡ＝２１．２８，ＦＢ＝４８．２９；ＰＡ＿Ｂ＜０．０００ １）。 且ＩＬ—ｌ０对ＤＣｓ的抑制能够被雷帕霉素部分逆转 （图１Ａ、Ｂ）。结果显示ＩＬ－１０可以抑制ＬＰＳ对ＤＣｓ 的活化。 ２．１．２ ＩＬ．１０抑制ＤＣｓ分泌细胞因子ＥＬＩＳＡ检测 细胞因子也发现，ＬＰＳ刺激组ＤＣｓ分泌ＩＬ－６、ＴＮＦ－０【 水平明显增高。而ＩＬ一１０处理后的ＤＣｓ分泌这两种 细胞因子的能力均明显下降（图２），并且具有统计 学意义（各组间比较，Ｆ ＝４６．２５，ＦＢ＝９０４．９；Ｐ枷＜ ０．０００ １）。重新加入自噬刺激剂雷帕霉素后却能部 分逆转ＤＣｓ分泌这两种细胞因子的功能（如图２所 示，ＤＣｓ＋ＬＰＳ＋ＩＬ一１０组与ＤＣｓ＋ＬＰＳ＋ＩＬ－１０＋Ｒａｐａ组 相比差异都具有统计学意义）。 ２．１．３ ＩＬ一１０增加ＤＣｓ摄取ＯＶＡ抗原 未成熟 ＤＣｓ具有更好的摄取抗原能力，而随着ＤＣｓ的不断 成熟，ＤＣｓ抗原摄取能力不断下降而抗原处理和递 呈能力不断增加，从而刺激Ｔ细胞增殖。结合之前 的结果显示，ＬＰＳ虽然能明显活化ＤＣｓ，其摄取ＯＶＡ 抗原的能力却是明显下降的，但是ＩＬ．１０处理ＤＣｓ 后，ＤＣｓ摄取ＯＶＡ的能力又开始增加（图３Ａ），并且 具有统计学意义（各组间比较，Ｆ＝１９．４８，Ｐ＝０．００２ ４， 图３Ｂ），这也表明ＩＬ一１０能够抑制ＤＣｓ的活化及 成熟。 ２．１．４ ＩＬ．１０抑制Ｔ细胞增殖及Ｔ细胞活化将不 同组的ＤＣｓ与ＤＯ１１．１０小鼠来源的脾脏Ｔ细胞，即 ０ＶＡ３２３—３３９特异性的ＣＤ４ 细胞（ＯＴ２细胞），共 培养７２ ｈ后，流式检测ＣＦＳＥ＋ＣＤ４ Ｔ ｃｅｌｌ增殖情况 发现：加入ＤＣｓ后，ＣＦＳＥ染色的ＯＴ２细胞增殖明显 增强，ＬＰＳ则能进一步促进ＤＣｓ刺激Ｔ细胞的增殖， 而ＩＬ．１０处理后的ＤＣｓ组，ＣＦＳＥ增殖的比例则明显 减少，但ＩＬ－ｌ０对ＤＣｓ的这一抑制过程可以被自噬 刺激剂雷帕霉素部分逆转（图４Ａ）。并且差异具有 统计学意义（图４Ｂ，各组间比较，Ｆ＝１１２．７，Ｐ＜ ０．０００ １）。 ２．２ ＩＬ一１０能抑制ＤＣｓ自噬 目前认为细胞发生 自噬时，ＬＣ３蛋白合成后，其羧基端会被ＡｔＢ＊譬ｇｇ＝０ ￡君４所剪 孽菩 切，产生细胞浆定位的ＬＣ３一Ｉ，ＬＣ３一Ｉ会被包括 Ａｔｇ７和Ａｔｇ３在内的泛素样体系所修饰和加工，产生 ＬＣ３．ＩＩ并定位到自噬小体中。这样ＬＣ３－１Ｉ／ＬＣ３一Ｉ Ａ Ａ ３ ＿ ＩＬ－１０抑制ＬＰＳ诱导ＤＣｓ的活化 １ ＩＬ－１０ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ＤＣ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ＬＰＳ ： ．Ｐ＜０．０５； Ｐ＜０．００１；△．Ｐ＜０．０００ １． Ｂ 图２几－１Ｏ抑制ＤＣｓ分泌细胞因子 Ｆｉｇ．２ ＩＬ－１０ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ＤＣｓ ｔｏ ｓｅｃｒｅｔ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ Ｎｏｔｅ： ｝．Ｐ＜０．０１； Ｐ＜０．００１；△．Ｐ＜０．０００ １． 免疫学杂忠２０１７年第３３卷 ， （７３ ＩＩ ａｃｔｉｎ Ｉ ＰＳｆｔＯ０ｎｇ／＂．】） 一 ０ 鞭≯ 黪 －叠 誊 嘴 ＋ｌ 镧 ４，－ ２ 嘲嘲 十 Ｉ２ ２４ ＋ ３ ＋ ６ 习……一 …一 缸 Ｉ Ｉ工ｌ ｌ ＩＩＦ Ｉ￣１１１＂Ｔ＿Ｉ１１ｅ【ｌｌ１ （、 ＝０・６ 苎＿生＿ ｏ．４ 二 ００ ０．２ — ａＪ”‘” “ Ｉ ”‘ ””“ …ｊ ｛ ｉ １…ｌ ｌ ｌ ｌ ｆ 二 Ｉ｛ｎｌ『ｌ 二 警… 图４ ＩＬ一１０抑制ＤＣｓ刺激Ｔ细胞增殖的能力 Ｆｉｇ．４ ＩＬ一１０ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ＤＣｓ ｔｏ ｓｔｉｍｕｌａｔｅ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ｎｏｔ，． ： 、．１ｎｈｉｌ￣ｉｌｉｏｎ ｏｆ ｎａｉｖｅ ＣＩ）４ （）ＶＡ—ｓｐｅｅｉｉｆ（・ｔｒａｎｓｇｅｎｉ（‘１）０１ １ ｌ０ Ｔ ｔ‘ｒＩｌｓ‘。ｕｈｕｒｅｄ ｗｉｔｈ １）Ｃｓ ｉｎ ｄｉｔｆ＇ｅｌｅｎ［ｓｉｔｕａｌｌｏｎ ｐｕｌｓｅｄ ｗｉｔｈ ｌ１（）一 Ｖｉｔ３２３－３３９ｆ ＤＣ：Ｃ１）４ Ｔ＝Ｉ：ｌ０）Ｎｅｇａｔｉｖｅ ＣＦＳＥ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｉｌ１． ‘ Ｉ ｐｒｏＪｉｆｅｒａｔｉｏ．ｏｌ ＣＤ４ Ｔ（＇ｅｌｌｓ．（）Ｉｔｅ Ｉｌｆ ｔｈｒｅｅ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｌ ｅｘ［ｎ ｒｉｍｅｎｌｓ ａｒｅ ｓｈｉ）／＇ｄｌ：Ｂ．Ｉｔｉｓｌｏｇｒａｍｓ ｓｈｏｗ Ｃｌ ＳＥ ｇａｔｅｄ ＣＩＭ”ｒ ｐｒｏｌｉ ｒａｔｉ￣ｌｌ１ ｂｙ ＤＥｓ ｉＩ１【Ｉ（ｉｆｅｒｅｎｔ ｓｉｔｕａｔｉｏｎ．１）ａｔａ ｓｈｏｗｎ ａｒｅ ｒｅｒ．，ｔ，． ｓ｛ －ＩＩ｜ａｌｉｖ（ ｔ）ｆ＇ｔｈｒｅｅ ｉｎｄｅｐｅｉ￣ｄｅｎｉ ｅｘｐｅｒｈｎｅｎｌｓ．Ｄａｌａ ｗＰｒＰ ａｒｉａｌ、ｚＰＩ｛ ｗｉｔｈ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｖａｒｉａｎ￣‘（ （ＡＮＯＶＡ） ．Ｐ＜０．０５：Ａ ，’＜０．０００ ｌ 含・ＩｌｔＬ ．ｊ发生自噬的程度成正比，并Ｈ．作为细胞自噬 的标 在体外用ＬＰＳ刺激Ｉ）Ｃｓ诱导自噬，观察 不…时ｌｈＪ点树突状细胞的自噬情况。发现ＬＰＳ刺 激１２ ｈ后ＤＣｓ发乍白噬最强（图５Ａ）。而用ＩＬ—ｌ０ 处理ＤＣｓ发现，相比于阳性对照组，Ｉ Ｃ３Ⅱ／Ｉ Ｃ３ Ｉ明 显＿Ｆ降，即提示ＤＣｓ自噬减弱（图５Ｂ），用Ｉｍａｇｅ Ｐｒｏ—Ｉ’ｈｓ６软件测量厌度值后统计分析显示ＩＩ 一ｌ０能 明 降低ＬＣ３ ＩＩ／ＬＣ３ Ｉ的比值，统汁具有统计学意 义（【 ５Ｃ，各组问比较，Ｆ＝５７．７７，Ｐ＝０．０００ １）。 ０ Ｊ’ ｔ Ｉ 。 图５ ＩＬ－１０抑制ＬＰＳ诱导ＤＣｓ的自噬 Ｆｉｇ。５ ＩＬ－１０ ｄｉｓｒｕｐｔｓ ａｕｔｏｐｈａｇｙ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｏｆ ＤＣｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ＬＰＳ Ｎｏｌｅ：Ａ Ｗｅｓｌｅｎ１ ｂｌｏｔ ｏｆ ａｕｔｏＩ“ｍｇｙ ｒｔ ｌａｔｅ（Ｉ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌ』（：３ ｆｒｏｎｌ‘－¨一Ｉ）Ｃ ｓｔｉｍｔｉｈｆｌｅ（Ｉ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅ１）｜ｔｉｍ（ ｎｉｌ（１ ｒｉｏｔ ｓｔｉｍｕｌａｔ￣、Ｉ１ ｗｉｌｈ ｌｌｆ ： Ｂ。Ｗｅｓｔｅｌｉ１ １）ｌｏｉ ｏｆ ａｕｔ（￣ｐｈａｇｙ Ｍａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ １ ｔ：３ ｆｒｏｍ ｅｌｒ—Ｉ）Ｃ ａｌｌｄ ｌＬ，１ ０ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ ＤＣ．ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ａｎｄ Ｉｌ１）ｔ ｓｔｉｍｕｈｆｌｅ￣１ ｗｉｔｈ ＩＪ Ｓ ａｔ １２ ｈ ａＩ ｓｈｏｗ（１．Ａｎｔｉ—Ｂ一｜ｌｔ’ｔｉｎ ｗＨｓ ｕｓｅｄ ａｓ ｅｏｉｌｈ＇ｏ］（）｜ｌｃ ｏｌ ｔｈ ｒｅｅ ｉｎ— ｄｅｐｅｎｌｌｅｎｔ ｅｘ１）ｅｒｉｎｌｅｎｔｓ ａｌ＇ｆ｝ｓｈｏｗｎ；Ｃ Ｈｉｓｔ（）ｇｒａｉｌ＞ｓ１］（ｉｖ，ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ Ｌｔ：３Ⅱ／Ｉ （ ３ ｌ ｉｎ ｅｒｒ—Ｄ（ｉ ａｉｒＩ ｉｎ ＭＳＣ—ｅｏｎｄｉｌ；ｏｎｌ （Ｉ Ｉ）（：ａｌ＇ｈ ｉ，１ ２ Ｉｉ ｉ）ｔ Ｕ Ｓ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ．１）ａｔａ ＳＩＩｏｗＩＩ ａｉＰ，’ｅｐｒｅｓｅｎｌａｌｉｖｔ 【１ｆ ｔｉｌｔＰｒ ｉＭｅｐｅｎｄ— ｅｎｌ ｐｘｐｅｉ ｉｍｅｉｌｌＳ．１）ａｌａ ｗｔ ｒＰ ａｎａｌｙｚｅｄ ｗｉｌｈ ａｎａｉ＇￣＇ｓｉｓ ｏｌ ＶＤＩ ｔａｉｌ（‘Ｐ ｆＡＮｔ）ＶＡ）＃Ｐ＜Ｏ Ｏ０１． ３讨论 自噬作为一种通过自我消化错误折叠蛋白或者 细胞碎片获取“营养”，实现细胞自我更新及发挥功 能的重要途径，是大自然普遍存在的生命现象，自噬 不仅参与体内稳态及细胞功能的维持，自噬的紊乱 也与多种疾病密切相关。既往研究表明，包括阿尔 茨海默病、帕金森氏病在内的多种神经退行性病变 的患者巾都存在自噬体的聚集，而在肝脏疾病、衰老 等患者的相应部位也能发现此现象 自噬 感 染、免疫反应，以及炎症性疾病更是密不可分的。有 研究认为，自噬在活化的天然免疫和适』 性免疫反 应中都具有重要作用。在适应性免疫反应巾，ＤＣｓ 等抗原提呈细胞在处理内源性或者外源抗原至 ＭＨＣ分子时都需要自噬的参与。那么， 某些可能 由于自噬水平增加引起免疫反应增强的疾病中，抑 制自噬的水平显得尤为重要。ＩＬ—ｌ０作为口前认为 最强的免疫抑制性的细胞【大Ｊ子，在多种细胞或者药 物缓解疾病的过程中表达也明显增高 Ｈ 那么ＪＩ １０是否通过抑制自噬水平从而抑制免疫反应？本 研究以最重要的抗原提呈细胞ＤＣｓ为ｆ预对象，展 开研究。结果发现ＩＬ—ｌ０预处理ＤＣｓ后，ＬＰＳ活化 屈玉兰等 白细胞介素１０通过抑制自噬调节树突状细胞功能第３期 ＤＣｓ的能力明显下降：ＤＣｓ表面共刺激分子的表达， 炎症因子的分泌，刺激Ｔ细胞增殖能力均明显下 参考文献： ［１］ Ｓｔｅｉｎｍａｎ ＲＭ，Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ Ｊ．Ｔａｋｉｎｇ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｉｎｔｏ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，２００７，４４９（７１６１）：４１９－４２６． 降。这与既往研究是保持一致的 Ｊ。然而ＩＬ，１，０对 ＤＣｓ的功能抑制，在加入自噬刺激剂雷帕霉素之后， ＤＣｓ表面共刺激分子ＣＤ８０、ＣＤ４０的表达水平，刺激 Ｔ细胞增殖以及分泌细胞因子的能力都出现了完全 或者部分逆转。这表明ＩＬ—ｌ０可能通过抑制细胞自 ［２］Ｍｏｓｓｅｒ ＤＭ，Ｚｈａｎｇ Ｘ．Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一１０：ｎｅｗ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ ｏｎ ａｎ ｏｌｄ ｅｙｔｏｋｉｎｅ［Ｊ］．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ，２００８，２２６：２０５－２１８． ［３］Ｐａｒｅｉｎａ Ｍ，Ｍｉｒａｎｄａ—Ｇａｒｃｉａ ＭＡ，Ｄｕｒｌａｎｉｋ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｐａｔｈｏｇｅｎ—ｔｉｒｇ— ｇｅｒｅｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌａｓｍａｅｙｔｏｉｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｉｎｄｕｃｅｓ ＩＬ－・１０－－ｐｒｏ・－ 噬实现对ＤＣｓ功能的抑制。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ进一步对 自噬相关蛋白ＬＣ３进行检测发现，ＩＬ一１０处理组能 ｄｕｃｉｎｇ Ｂ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ［Ｊ］．Ｊ Ｉｍｍｕ— ｎｏｌ，２０１３，１９０（４）：１５９１．１６０２． 明显降低ＬＣ３一ＩＩ／ＬＣ３．Ｉ的比值，表明ＩＬ一１０能抑制 ＤＣｓ自噬。初步得出结论：即ＩＬ一１Ｏ可能通过抑制 ＤＣｓ自噬下调ＤＣｓ的功能。既往研究已经提示自噬 在ＤＣｓ的发育过程中起着重要的作用，外周血单核 细胞在向ＤＣｓ分化的过程中自噬不断增强。而ＩＬ一 １０处理后，这个过程可被抑制，使得ＤＣｓ停留在其 前体单核细胞的阶段＿８ Ｊ。但是该研究对ＤＣｓ的功 能未做讨论，以及外界环境对ＤＣｓ的影响引起的 ＤＣｓ的自噬是否能被ＩＬ一１Ｏ抑制以及与ＤＣｓ功能的 关系也未做探讨。也有研究发现ＤＣｓ能够选择性 地利用自噬机制，如ＡＴＧ５，摄取及处理胞外抗原， 通过ＭＨＣⅡ分子递呈给ＣＤ４ Ｔ细胞，从而发生免 疫反应 。本研究则在体外模拟炎症环境，通过 ＬＰＳ刺激未成熟的ＤＣｓ促进其成熟活化，并探讨其 与ＤＣｓ自噬的关系发现，ＬＰＳ刺激ＤＣｓ功能增强至 最大的时间点ＤＣｓ自噬的时间点基本是吻合的。并 发现ＩＬ一１０预处理ＤＣｓ后，ＬＰＳ对ＤＣＳ的活化作用 明显降低，而这也是伴随着ＤＣｓ自噬的下降的。当 再次加入自噬刺激剂雷帕霉素时，这种抑制作用出 现了部分逆转。这些证据均提示：ＩＬ一１０可能通过抑 制ＤＣｓ自噬下调 ＤＣｓ的功能的，为ＩＬ．１０如何 ＤＣｓ的功能做了进一步的机制研究。但是自噬是一 个复杂的过程，对于ＩＬ．１０到底通过什么抑制ＤＣｓ 自噬，是某一明星分子扮演了重要角色还是ＩＬ—ｌ０ 抑制了自噬过程中某一环节，仍然值得进一步探讨。 但是值得肯定的是ＤＣｓ自噬和其功能存在一定关 系，一定范围内，自噬越强，ＤＣｓ功能越强。自噬是 把双刃剑，适当的自噬能够促进细胞的生存及代谢， 过度自噬则会引起细胞凋亡增加，从而降低细胞功 能口 。因此 如何合理调节自噬，游刃有余地控 制自噬，从而调节细胞的功能显得尤为重要。深人 研究ＩＬ—ｌ０如何影响ＤＣｓ功能有助于更好地研究这 － 一科学问题。 ［４］Ｄｏｚ Ｅ，Ｌｏｍｂａｒｄ Ｒ，Ｃａｒｒｅｒａｓ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ｍｙｅｏｂａｅｔｅｒｉａ—ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｄｅｎ— ｄｒｉｔｉｅ ｃｅｉｌｓ ａｔｔｒａｃｔ ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ ｔｈａｔ ｐｒｏｄｕｃｅ ＩＬ一１０ ａｎｄ ｓｐｅｃｉｉｆｃａｌｌｙ ｓｈｕｔ ｄｏｗｎ Ｔｈｌ７ ＣＩＭ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅｉｒ ＩＬ一１０ ｒｅｃｅｐｔｏｒ［Ｊ］．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１３，１９１（７）：３８１８－３８２６． ［５］ Ｒｙｔｅｒ ＳＷ，Ｍｉｚｕｍｕｒａ Ｋ，Ｃｈｏｉ ＡＭ．Ｔｈｅ ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ａｕｔｏｐｈａｇｙ ｏｎ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｍｏｄａｌｉｔｉｅｓ［Ｊ］．Ｉｎｔ Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，２０１４，２０１４：５０２６７６． ［６］ Ｍｉｚｕｍｕｒａ Ｋ，Ｃｈｏｉ ＡＭ，Ｒｙｔｅｒ ＳＷ．Ｅｍｅｒｇｉｎｇ ｒｏｌｅ ｏｆ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ａｕｔｏ－ ｐｈａｇｙ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｄｉｓｅａｓｅｓ［Ｊ］．Ｆｒｏｎｔ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２０１４，５：２４＿４． ［７］Ｈｕｒｌｅｙ ＪＨ，Ｓｃｈｕｌｍａｎ ＢＡ．Ａｔｏｍｉｓｔｉｃ ａｕｔｏｐｈａｇｙ：ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｓｅｒｆ－ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ，２０１４，１５７（２）：３００－３１１． ［８］ Ｍａｒｔｉｎ Ｃ，Ｅｓｐａｉｌｌａｔ ＭＰ，Ｓａｎｔｉａｇｏ—Ｓｃｈｗａｒｚ Ｆ．ＩＬ一１０ ｒｅｓｔｉｒｃｔｓ ｄｅｎ— ｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ（ＤＣ）ｇｒｏｗｔｈ ａｔ ｔｈｅ ｍｏｎｏｃｙｔｅ—ｔｏ－ｍｏｎｏｃｙｔｅ—ｄｅｒｉｖｅｄ ＤＣ ｉｎ— ｔｅｒｆａｃｅ ｂｙ ｄｉｓｒｕｐｔｉｎｇ ａｎｔｉ—ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ａｎｄ ｃｙｔｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ａｕｔｏｐｈａｇｉｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｃｈｉｎｅｒｙ［Ｊ］．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ，２０１５，６３（１－３）：１３１—１４３． ［９］ Ｍｏｒｒｉｓ Ｓ，Ｓｗａｎｓｏｎ ＭＳ，Ｌｉｅｂｅｎｒｍｎ Ａ，ｅｔ ａ１．Ａｕｔｏｐｈａｇｙ＇ｍｅｄｉａｔｅｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｉｎｎａｔｅ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ＡＰＣ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉｌａ ｖｉｕｒｓ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ［Ｊ］．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１１，１８７（８）：３９５３－３９６１． ［１０］ Ｏｈ ＪＥ，Ｌｅｅ ＨＫ．Ｐａｔｔｅｒｎ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ ａｕｔｏｐｈａｇｙ［Ｊ］． Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１４，５：３００． ［１ １］Ｄｅｌｇａｄｏ ＭＡ，Ｅｌｍａｏｕｅｄ ＲＡ，Ｄａｖｉｓ ＡＳ，ｅｔ ａ１．Ｔｏｌｌ—ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｃｏｎｔｏｒｌ ａｕｔｏｐｈａｇｙ［Ｊ］．ＥＭＢＯ Ｊ，２００８，２７（７）：１１１０—１１２１． ［１２］ Ｍｕｎｚ Ｃ．Ａｕｔｏｐｈａｇｙ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ａｎｔｉｇｅｎ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｆｏｒ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｎ ＭＨＣ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ［Ｊ］．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ，２０１６，２７２（１）：ｌ７－２７． ［１３］Ｌｅｖｉｎｅ Ｂ，Ｋｒｏｅｍｅｒ Ｇ．Ａｕｔｏｐｈａｇｙ ｉｎ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｄｉｓｅａｓｅ ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ，２００８，１３２（１）：２７－４２． ［１４］ Ｍｉｔｔａｌ ＳＫ，Ｒｏｃｈｅ ＰＡ．Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｇｅｎ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ ｂｙ ＩＬ－ １０［Ｊ］．ＣｕｒｒＯｐｉｎＩｍｍｕｎｏｌ，２０１５，３４：２２－２７． ［１５］Ｌｅｅ ＨＫ，Ｍａｔｔｅｉ ＬＭ，Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇ ＢＥ，ｅｔ ａ１．Ｉｎ ｖｉｖｏ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ ｆｏｒ Ａｔ ｉｎ ａｎｔｉｇｅｎ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ ｂｙ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ， ２０１０，３２（２）：２２７－２３９． ［１６］ Ｓｈｉｎｔａｎｉ Ｔ，Ｋｌｉｏｎｓｋｙ ＤＪ．Ａｕｔｏｐｈａｇｙ ｉｎ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ：ａ ｄｏｕｂ－ ｌｅ—ｅｄｇｅｄ ｓｗｏｒｄ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００４，３０６（５６９８）：９９００９５． ［１７］ Ｏｒｌａ ０，Ａｋｋｏｃ Ｙ，Ｂａｙｒａｋｔｒａ ０，ｅｔ ａ１．Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｐａｔｈｏｌｏｇｉ－ ｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌｒａ ｃｒｏｓｓ—ｔａｌｋ ｂｅｔｗｅｅｎ ａｕｔｏｐｈａｇｙ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｈｉｓｔｏｌ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ，２０１６，３１（５）：４７９－４９８． ［收稿２０１６－０８—１３修回２０１６－１０－２５］ （编辑张晓舟）
