６２６ 陕西中医２０１５年第３６卷第５期 电针足三里对ＡＤ小鼠大脑皮层ＡＰＰ和Ａｌ３表达的影响 李摘狮△ 韩燕燕△ 樊小农▲ 天津中医药大学（天津３００１９３） 要 目的：探究电针足三里对老年痴呆小鼠大脑皮层Ｂ一淀粉样肽前体蛋白（ＡＰＰ）及ｐ一淀粉样肽 蛋白（Ａｔｅ）表达的影响。方法：将快速老化小鼠ＳＡＭＰ８随机分为模型组、电针组和非穴组， 并设同源ＳＡＭＲ１小鼠作为对照组。电针组给予足三里电针干预，非穴组针刺双侧固定非 穴位点。应用免疫组织化学ＳＡＢＣ法观察各组小鼠大脑皮层ＡＰＰ及Ａｔ？的表达情况。结 果：ＳＡＭＰ８大脑皮层内ＡＰＰ和Ａ８蛋白呈较高表达的状态，电针治疗后明显下调，与模型 组、非穴组相比，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）；而非穴组与模型组相比，各指标差异无统计 学意义（Ｐ＞０．０５）。结论：电针足三里能有效改善ＡＤ，其机制可能与其下调ＡＤ小鼠大脑 皮层ＡＰＰ及Ａ８蛋白水平的表达有关。 主题词 阿尔茨海默病／针灸疗法 电针 穴，足三里 动物实验 小鼠 【中图分类号】Ｒ７４９【文章标识码】Ａ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００—７３６９．２０１５．０５．０４９ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅｌｅｃｔｒｏ—ａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ａｔ“Ｚｕｓａｎｌｉ’’ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ＡＰＰ ａｎｄ Ａｐ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｒｔｅｘ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ＇ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｍｉｃｅ Ｔｉａｎｊｉｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ｔｉａｎｊｉｎ ３００１９３）Ｌｉ Ｃｈｏｎｇ Ｈａｎ Ｙａｎｙａｎ Ｆａｎ Ｘｉａｏｎｏｎｇ ＡＢＳＴＲＡＣＴ Ｏｂｊ ｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＡＰＰ ａｎｄ Ａｔ？ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｗｉｎｇ ｔＯ ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｅ— ｌｅｃｔｒｏ—ａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ａｔ“Ｚｕｓａｎｌｉ”ｉｎ Ｓｅｎｅｓｅｅｎｅｅ ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ ｍｉｃｅ（ＳＡＭＰ８）ｂｒａｉｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ Ｓｅｎｅｓｅｅｎｅｅ ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ ｍｉｃｅ（ＳＡＭＰ８）ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍＬｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ３ ｇｒｏｕｐｓ：ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ，ａｎｅｌｅｃｔｒｏ—ａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ｇｒｏｕｐ，ａｎｄ ｓｈａｍ—ａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ ＳＡＭＲ１ ｗａｓ ｕｓｅｄ ａｓ ｃｏｎｔｒｏ１．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＡＰＰ ａｎｄ ＡＢ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｅｒｅ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ｂｙ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏ— ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｓｓａｙｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＡＰＰ ａｎｄ ＡＢ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｒｔｅｘ ｏｆ Ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｈｉｇｈ．Ｔｈｅｙ ｗｅｒｅ ｂｏｔｈ ｒｅｄｕｃｅｄ ｂｙ ｅｌｅｃｔｒｏ—ａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ ｏｒ ｓｈａｍ—ａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｗｅｒｅ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ％０．０１，Ｐ＜０．０１）．Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｎｏ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｖａｒｉｏｕｓ ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ ｉｎ ｓｈａｍ—ａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＞Ｏ．０５，Ｐ＞０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ＇ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ ｂｙ Ｅｌｅｃｔｒｏ—ａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ａｔ“Ｚｕｓａｎｌｉ”．Ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｗａｓ ｐｏｓｓｉｂｌｙ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｅｘ— ｐｒｅｓｓｉｎｇ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＡＰＰ ａｎｄ １ｔ３ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｒｔｅｘ ｏｆ ＳＡＭＰ８． ＫＥＹ ＷｏＲＤＳ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ／ａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ—ｍｏｘｉｂＵＳｔｉｏｎ Ｅ１ｅｃｔｒｏａＣｕｐｕｎｅｔｕｒｅ Ｐｏｉｎｔ ＳＴ３６ Ａｉｎｍａ１ ｅｘｐｅｒｉ— ｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｍｊｃｅ 阿尔兹海默病（ＡＤ）即老年性痴呆，统计资料显示我国目 前有老年性痴呆患者约５００万，到２０２０年患病人数将超过６００ 响，以探讨电针足三里延缓ＡＤ进程的可能作用机制。 １ 实验材料 雄性快速老化小鼠亚系（Ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ—ａｃｃｅｌ— 万，并以每年三四十万人的数量增长，给家庭和社会带来沉重 的负担和危害Ｅ］－３３。现代医学对其尚缺乏理想的治疗手段，而 中医针灸却有其独到之处。 ｃｒａｔｅｄ ｍｏｕｓｅ ｐｒｏｎｅ／８，ＳＡＭＰ８），６月龄，清洁级，共１８只。健 康同月龄抗快速老化小鼠亚系（Ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ—ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ ｍｏｕｓｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｌ／１，ＳＡＭＲ１），清洁级，共６只。所有小鼠均由天津中 目前有关针灸治疗阿尔兹海默病的研究虽然取得了可观 医药大学第一附属医院动物中心提供。 ＡＰＰ及ＡＢ兔抗大鼠一抗试剂盒、ＳＡＢＣ山羊抗兔二抗试 的进展，但针灸是如何对ＡＤ发挥其治疗作用的，尚未达成共 识。多项研究表明：电针多个穴位对ＡＤ有较好的疗效［４ ］，但 剂盒及ＤＡＢ显色剂（北京中杉试剂有限公司）；图像分析系统 （同济医科大学千屏影像工程公司）。 ２ 实验方法 ２．１ 分 组 将１８只ｓＡＭＰ８小鼠随机 分为３组：模型组、电针组和非穴组，每组６只。同源ＳＡＭＲ１ 其最佳组方目前尚不统一。疗效可靠、作用机制明确的单穴位 针灸治疗ＡＤ鲜见报道。本研究选取快速老化小鼠ＳＡＭＰ８为 研究对象，以ＳＡＭＲ１小鼠为对照，观察电针足三里对ＳＡＭＰ８ 鼠大脑皮层Ｄ 淀粉样肽前体蛋白ＡＰＰ及ＡＤ表达水平的影 小鼠６只，作为对照组，饲养条件完全相同。 ２．２针刺方法 取穴：根据华兴邦《大鼠穴位图谱的研 制》［７］，足三里穴定位于小腿前外侧，当犊鼻下三寸，距胫骨前 ＊天津市高等学校科技发展基金项目（２００９０２０６） △天津中医药大学第一附属医院病理科（天津３００１９３） ▲天津市针灸研究所（天津３００１９３） 缘一横指处。非穴位点定位于季肋部，髂嵴上方约３ ｍｍ处。 针刺操作：电针组：束缚小鼠，左侧足三里穴处垂直进针，进针 深度５ｒａｍ，连接电针治疗仪，疏密波，电流强度３ｍＡ，电针频率 ６２８ ４讨 论 ＡＤ是一种神经系统退行性疾病，以进行性记 忆减退和认知障碍为主要临床特征。Ｂ一淀粉样肽蛋白（Ａ口）聚 集形成老年斑（ＳＰ）为其主要病理特征＿８ ］。而Ａ口由ｐ淀粉样 前体蛋白（ＡＰＰ）水解产生，任何影响ＡＰＰ水解的因素，均可导 致ＡＢ的沉积，从而引起脑部神经元的凋亡、坏死及淀粉样变， ［１］何陕西中医２０１５年第３６卷第５期 参考文献 滨，吴巍巍．老年痴呆症的预防和护理［Ｊ］．吉 林医学，２０１０，３１（３４）：６３９８． ［２］李艳梅，宋立中，陈少宗．择时温针灸关元、足三里 对老年人超氧化物歧化酶、Ｔ细胞亚群的影响［Ｊ］．辽宁中医杂 志，２０１４，４１（４）：７７９～７８１． 此为老年斑形成的始动因子及构成老年斑的核心组分，进而激 活胶质细胞，产生神经毒性。 快速老化小鼠ＳＡＭＰ８既有学习记忆缺陷的快速衰老特 性，又有淀粉样变性增加、老年斑等ＡＤ的重要特征，是目前较 ［３］Ｆａｎｇ Ｊ Ｑ，Ｚｈｕ Ｓ Ｘ，Ｚｈａｎｇ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｅｌｅｃ— ｔｒｏａｃｕｐｕｎｅｔｕｒｅ ｏｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ Ｐ。 Ｍ ａｎｄ ＩＬ一 １ ｂｅｔａ ｉｎ ｆｒｏｎｔａｌ ｌｏｂｅ ａｎｄ ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ ｉｎ ｒａｔｓ ｗｉｔｈ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ Ｓ 为理想的衰老模型¨１ 。本实验试图通过降低ＳＡＭＰ８小鼠 ＡＰＰ和Ａ８的表达来抑制老年斑的形成，降低激活神经胶质细 ｄｉｓｅａｓｅ ＥＪ］．Ｚｈｅｎ Ｃｉ Ｙａｎ Ｊｉｕ，２ｏ１３，３８（１）：３５—３９． ［４］杨春壮，马 英，刘艳翠，等．针刺对神经干细胞海 胞的数量，以达到保护神经细胞的作用，从而探究延缓ＡＤ进程 的作用机理。 国内外有关治疗老年性痴呆的方法目前大多数仍处于临 床实验阶段，且长期服用一些西药极易引起严重的肝肾损 伤 。针灸疗法作为祖国医学的重要部分，副作用极少，故而， 本实验探究电针对ＡＤ小鼠老化关键性蛋白ＡＰＰ与ＡＢ表达 影响，为电针治疗ＡＤ的临床选穴提供参考。祖国医学认为 ＡＤ系老年肾精亏虚、痰凝血瘀所致。足三里为“足阳明胃经” 的主要穴位之一，是一身中重要的强壮大穴。传统中医认为， 按摩或针灸足三里可以调理脾胃、补中益气、通经活络、疏风化 湿。研究还发现针刺足三里能使微血管新生，从而增加脑微循 环血流量，改善脑组织供氧 。Ｚｈｕ ＳＸ等也报道电针百会、太 西、足三里可以降低激活的神经胶质细胞的数量，从而保护神 经元，改善ＡＤ大鼠的学习记忆能力¨ｌ ；张雪竹等研究发现针 刺膻中、血海、足三里等穴位能改善脑细胞病理形态，从而提高 老年痴呆小鼠的学习记忆能力，改善其认知功能 。因此本实 验选取“足三里”为其治疗用穴。 实验以ＳＡＭＲ１小鼠为对照，观察电针足三里对ＳＡＭＰ８ 小鼠大脑皮层ｐ一淀粉样肽前体蛋白ＡＰＰ及Ａｐ表达水平的影 响，结果显示：ＳＡＭＰ８模型组小鼠大脑皮层内ＡＰＰ和ＡＢ蛋白 呈较高表达的状态，电针治疗后明显下调，表现为胞体明显变 小，染色强度减弱，数量减少，阳性物质总面积、百分比及积分 光度均降低，差异有统计学意义；而电针组ＡＰＰ和ＡＩ？蛋白的 表达较ＳＡＭＲ１对照组仍高，差异有统计学意义。提示电针足 三里可明显降低ＡＰＰ及ＡＢ的蛋白表达水平，可在一定程度上 改善ＡＤ；并且实验还发现电针组和非穴组相比，ＡＰＰ和ＡＢ蛋 白的表达均降低，差异有统计学意义，提示电针足三里较其他 部位疗效可靠、作用明确，具有穴位特异性。 综上所述，电针足三里可能通过下调ＡＤ小鼠大脑皮层 ＡＰＰ及ＡＧ蛋白的表达水平，从而抑制老年斑的形成，降低激活 神经胶质细胞的数量，达到保护神经细胞的作用，延缓ＡＤ进 程。但是电针足三里治疗ＡＤ的途径复杂多样，减少ＡＰＰ水解 产生Ａ８可能仅是途径之一。此实验只选用了单个穴位，为了 更好的为临床服务，仍需要配穴组方进一步验证，从选取最佳 组方的角度来探讨针灸延缓ＡＤ进程的作用机理。 马内移植老年性痴呆大鼠行为学和ＮＰＹ表达的影响［Ｊ］．陕西 中医，２０１２，３３（７）：９２１－９２３． ［５］ Ｚｈａｎｇ Ｐ，Ｇｕａｎ Ｓ Ｓ，Ｊｉａｎｇ Ｇ Ｈ．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅｌｅｃｔｒｏａ— ｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ｏｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ａｂｅｔａ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｅｌｌｓ ｏｆ ｔｈｅ ｈｉｐｐｏ ｃａｍｐｕｓ ａｎｄ ＳＯＤ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｒａｔｓ ｗｉｔｈ ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｃｉｎ—Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ Ｓ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｚｈｏｎｇｇｕｏ Ｚｈｅｎ Ｊｉｕ，２０１０，３０（１２）：１００７—１０１０． ［６］ Ｚｈａｎｇ Ｙ Ｆ，Ｙｕ Ｊ Ｃ，Ｚｈａｎｇ Ｘ Ｚ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｃ ｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｏｎ ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ｎｅｕｒｏｎ ｌｏｓｓ ａｎｄ ａｓｔｒｏｃｙ— ｔｏｓｉｓ ｉｎ ＳＡＭＰ ８ ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｚｈｅｎ Ｃｉ Ｙａｎ Ｊｉｕ，２０１３，３８（５）：３５８— ３６４． ［７］华兴帮．大鼠穴位图谱的研制Ｉ－Ｊ］．实验动物与动物 实验，２００１，（１）：１－５． ［８］ Ｍｏｉｒ Ｒ Ｄ，Ｔａｎｚｉ Ｒ Ｅ．ＬＲＰ—ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｌｅａｒａｎｃｅ ｏｆ Ａｂｅｔａ ｉｓ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｂｙ ＫＰＩ—ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｉｓｏｆｏｒｍｓ ｏｆ ＡＰＰ［Ｊ］．Ｃｕｒｒ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ Ｒｅｓ，２００５，２（２）：２６９－２７３． ［９］ Ｓｃｈｏｎｒｏｃｋ Ｎ，Ｇｏｔｚ Ｊ．Ｄｅｃｏｄｉｎｇ ｔｈｅ ｎｏｎ－ｃｏｄｉｎｇ ＲＮＡｓ ｉｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ＇ｓ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ，２０１２，６９ （２１）：３５４３—３５５９． ［１Ｏ］刘金凤，栗振杰，徐思思，等．针刺对快速老化痴 呆模型小鼠ＳＡＭＰ８学习记忆能力的影响［Ｊ］．辽宁中医杂志， ２０１３，４０（６）：１２５６—１２５８． ［１１］ 张桂莲，杜 赞，姚 丽，等．Ｐ 在ＡＢｚｓ 诱导 ＡＤ大鼠不同脑区的表达［Ｊ］．陕西医学杂志，２０１３，４２（¨）： １４５２ １４５５． ［１２］毛庆菊，陈邦国．电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠 大脑皮质微血管的影响［Ｊ］．中华物理医学与康复杂志，２Ｏ１１， ３３（８）：５７Ｉ－５７４． ［１３］ Ｚｈｕ Ｓ Ｘ，Ｓｕｎ Ｇ Ｊ．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅ１ｅｃｔｒｏａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ｏｎ ｌｅａｒｎｉｎｇ ａｎｄ ｍｅｍｏｒｙ ａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｇｌｉａｌ ｃｅｉｌｓ ｏｆ ｔｈｅ ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｔ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ［－Ｊ］．Ｚｈｏｎｇ ｇｕｏ Ｚｈｅｎ Ｊｉｕ，２００９， ２９（２）：１３３—１３６． ［１４］ 刘金风，张莹，孙金平，等．针刺疗法对老年痴呆 小鼠脑内ｐ５３蛋白表达的影响［Ｊ］．中国中西医结合杂志， ２Ｏ１３，３３（１０）：１３６７一ｌ３７１． （收稿２０１４—１１－２９；修回２０１５ ０１ １３）
