阿维菌素、埃比菌素的残留检测

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2018.08.021

云oodResearchAndDevelopment食品研究与开发圆园18年4月

第39卷第8期

119阿维菌素、埃比菌素的残留检测

陈吉香，谢体波，冯才伟*

（贵州勤邦食品安全科学技术有限公司，贵州贵阳550009）

摘

要：为验证阿维菌素“三合一”酶联免疫吸附剂测定（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）检测试剂盒对白

胡菜、胡萝卜、干洋葱及高淀粉含量食物的检测效果，用酶联免疫检测法和国标中的液相色谱-质谱/质谱法对白菜、结果表明：萝卜、干洋葱以及土豆4个样品中阿维菌素、埃比菌素残留量进行检测，比对两种方法试验结果间的差异。ELISA检测试剂盒特异性强、灵敏度高，阿维菌素测定时4种样品平均回收率在92.0%~99.6%之间，埃比菌素测定阳性结果一致，谱-质谱/质谱法检测样品的阴、检测结果稳定。埃比菌素；检测；稳定关键词：酶联免疫吸附剂测定；阿维菌素；

时4种样品平均回收率在91.3%~100.1%之间，变异系数均小于10%，最低检测限为3滋g/kg。该方法与国标液相色

DetectionoftheAvermectinandAbamectinResidues

（GuizhouKwinbonFoodSafetyScience-TechnologyCo.，Ltd.，Guiyang550009，Guizhou，China）粤遭泽贼则葬糟贼：Inordertoverifytheefficacyof\"threeinone\"avermectinELISAkitforthefoodofcabbage，carrot，driedonionandpotatoes，detectingtheresiduesofavermectinandabamectinincabbage，carrot，driedonionandpotatoeswithenzyme-linkedimmunosorbentassayandLiquidchromatography-massspectrometry/masssampleswasbetween92.0%-99.6%andAbamectin.Determinationof4kindsofbacteriahadaveragesamplespectrometry，andtheresultsarestableandreliable.

spectrometry.Resultsshowedthat：theELISAkitwasspecificandsensitive.Theaveragerecoveryrateof4was3滋g/kg.ThemethodwasconsistentwiththenegativeandpositiveresultsofLiquidchromatography/mass运藻赠憎燥则凿泽：enzymelinkedimmunosorbentassay（ELISA）；avermectin；abamectin；detection；stable

引文格式：

陈吉香，谢体波，冯才伟.阿维菌素、埃比菌素的残留检测[J].食品研究与开发，2018，39（8）：119-124

CHENJixiang，XIETibo，FENGCaiwei.DetectionoftheAvermectinandAbamectinResidues[J].FoodResearchandDevel-opment，2018，39（8）：119-124

CHENJi-xiang，XIETi-bo，FENGCai-wei*

recoveryratewas91.3%-100.1%.Thecoefficientofvariationwaslessthan10%，thelowestdetectionlimit

阿维菌素是一种高效、广谱的抗生素类药物，由链霉菌中灰色链霉菌发酵产生，由一组大环内酯类化伊维合物组成。阿维菌素类药物主要包括阿维菌素、菌素、多拉菌素和埃比菌素等物质[1]，是一种优良的新型农畜两用抗生素[2-3]，其作用机制独特，使用方便，被

（[2016]经科技合基金项目：贵阳经济技术开发区科学技术计划项目同）；贵州省工业和信息化发展专项资金计划第一批技术创新项目（2017002）

（1993—）作者简介：陈吉香，女（汉），学士，研究方向：药学。*通信作者

誉为近几十年来抗寄生虫药物研究进展的重大突破。水果、该物质杀虫活性强，抗菌面广[4]，广泛用于蔬菜、烟草等作物。但在动物体内残留时间长，被世界卫生组织列为高毒化合物[5-6]。具有神经毒性和免疫毒性，多见为中枢神经系统损害[7-8]，大剂量可引起人或动物昏迷乃至死亡[9]。

目前，阿维菌素类药物在蔬菜中的残留分析方法主要是液相色谱法和液相色谱—串联质谱法等仪器分析方法，但仪器法样品前处理复杂，检测时间长，仪器昂贵，成本较高[10-12]。

陈吉香，等：阿维菌素、埃比菌素的残留检测标准与检测

120板zyme该微孔linked研究条上预immunosorlent采用间接竞争包被偶联抗原assay酶联，留，免疫的ELISA吸阿维）附菌方剂测素法类，在定

药物酶（en与标

原酶标板上的偶联抗原竞争阿维菌素抗体，加入酶标二nethy抗后，用lbenzidinep3，3'，5，，TMB5'-四）甲底基物联显色苯胺，终止（3，液3'终止，5，5'-Tetrar反应，用原

酶标仪在450nm处测定吸光度，样本吸光度值与其所

含阿维菌素类药物残留量成负相关，与标准曲线比较，再乘以其对应的稀释倍数，即可得出阿维菌素类药物残留含量。11.1材料与方法

1.1.1材料新材料与鲜蔬与设备

菜试剂

：白菜、胡萝卜；干菜和高淀粉含量样品：干洋葱、土豆；均属市售。

阿维菌素标准品（纯度逸99%）、埃比菌素标准品

纯度逸99%）：上海安谱科学仪器有限公司；甲醇、乙腈、无水硫酸钠、碱性氧化铝（100目~200目）、正己烷，均为分析纯：贵阳诚承化工设备有限公司；去离子水；阿96维孔菌酶素标类板药1物块快速（包检被测试剂有偶联盒抗原产品）[全、标套准产品品包6瓶括：1mL/瓶（0、0.5、1.5、4.5、13.5、40.5滋g/mL）、高浓度标：

准品：1mL/瓶（1mg/L）、酶标二抗12mL（红色帽）、抗

体工作液10mL（绿色帽）、底物液A液7mL（白色帽）、底物液B液7mL（红色帽）、终止液7mL（黄色帽50）mL、20配（伊蓝色浓缩洗液1：帽复）溶]涤：北京液40mL（透明帽）、2伊浓缩复溶液工作勤液

邦生物技术有限公司。

用去离子水将2伊浓缩复溶液1颐1（体积比）进行稀释（1份+1份去离子水）用于样本的复溶。

配液2：洗涤工作液

用去离子水将20伊浓缩洗涤液1颐19（体积比）进行1.1.2稀释（1份+19份去离子水）用于物工程S7-360仪器与股份有微设备

酶标板的洗涤。限孔板公司；酶标仪EV311（450/630旋转蒸nm发）：仪上/Kwin6800海科华生

氮气吹干装置：北京莱伯泰科仪器有限公司；FJ-200均质器：常州国宇仪器制造有限公司；HY-2振荡器：常州国华电器有限公司；GZ-21M离心机：湖南凯达科学仪器有限公司；QL-901涡旋仪：海门市其林贝尔仪器制造有限公司；JY2002天平（感量0.01g）：上海恒平科学仪器有限公司；10mL刻度移液管、洗耳球、10mL玻璃试管、2、50mL聚苯乙烯离心管：贵阳诚承化工设备有限公司；单道20滋L耀200滋L微量移液器、100滋L耀

1000世尔滋科L技微有量限移公司液器。

、多道250滋L微量移液器：赛默

1.2.1.11.2.11.2飞方样法

新品鲜前蔬处菜理

：白菜、胡萝卜

21））称用均取

质1.0器依均0.05质蔬）g菜均样质本后：

的组织样本至50mL10聚苯乙min3），烯3取000离（心管1mLg以上中，上层，加15入清液益（5至59mL10℉正己mL）离洁心烷，净干燥10用min振荡器玻璃；

震动

中，于50益~60益（122℉~140℉）水浴氮气流下吹试干管

4）加入1mL复溶工作液（见配液1），用涡旋仪涡

；动305）s取以上20，滋超L声用10于分min析，。

再用涡旋仪涡动30s，混匀：1.2.1.2样品（干洋葱、土豆）

聚苯乙21））烯称用均离取

（质心管1.0器依均中，0.05质蔬加）入g菜6均样mL质本；

后去离的组子水织，样充本分混至匀50，mL再加入5mL正己烷，用振荡器震动10min，3000g以上，15益（59℉）离心中，于3）4）50取加益1入~60mL上1mL益（层复122清液10min溶工作℉至；

~14010液，℉mL必须）水洁用浴净干燥涡氮气旋仪流玻璃涡下动吹试30干管

；以上，超声10min，再用涡旋仪涡动30s，混匀s

5）取20滋L用于分析。

；1.2.21）样将品所检需测

试剂从冷藏环境中取出，使用之前将模

25具内益所/68有℉试剂~77与℉酶），标将每板放种实验液体桌试剂上回摇温匀至；

室温（20益~

铝箔2袋）取出重新需真空密要数量封的，微保存孔板于，2将益不~8用的益（36微℉孔板~46放℉回

）环境中样本3；

和）编标号准：品将样做2本孔和平标行准，品并对应记录微标孔准按孔序编和样号本，每个

孔所在的位置；

（80样本420）加滋L标到对应准品/样的本微和抗体孔中，然工作后液加：加入抗体入标工作准品液

/

98.6滋L/℉孔），避轻轻光环境振荡中反应混匀，用30min盖；

板膜盖板后置37益

洗涤5工作）洗板液：（小见心配揭液开2盖）250板膜滋，L/将孔孔，内充液分体洗甩涤干4，加次入

~5次，每次间隔10s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净；荡混6匀）加，用酶盖标二的板膜抗头盖：板加戳后入破置酶）

标二37益（抗98.6100℉滋）L/避孔光，轻轻环境振

中

（标准与检测

反应30min，取出重复洗板步骤5；

陈吉香，等：阿维菌素、埃比菌素的残留检测

液B液50滋L/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37益（98.6℉）避光环境中显色15min；

8）测定：加入终止液50滋L/孔，轻轻振荡混匀，

7）显色：加入底物液A液50滋L/孔，再加入底物

盒线性关系良好。

为：y=-0.750x+0.273，相关系数为R2=0.999，说明试剂

将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲

121线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中阿维菌素类药物的实际浓度。其中，新鲜2.2试剂盒特异性的测定结果

蔬菜样本、干菜和高淀粉样本的稀释倍数均为5倍。

特异性用交叉反应率来表示，交叉反应率是指抗

设定酶标仪于450nm处测定每孔OD值（在5min内读完）。2

试剂盒相关指标检测方法

分别对试剂盒的特异性、检测限、精密度、准确度进行试验，并将其中检测限、精密度和准确度与仪器方法检测的检测限、精密度和准确度进行对比。2.1线性关系

标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本

体与结构不同的抗原决定簇发生结合的能力。交叉反应率小，可证明抗体的特异性高。选择与阿维菌素类似结构和类似功能的3种药物，将不同浓度的阿维菌素类似物，替代阿维菌素标准溶液，测定其标准曲线，计算交叉反应率。结果显示如表2。

表2交叉反应率Table2Crossresponserate

药物名称阿维菌素伊维菌素埃比菌素多拉菌素

交叉反应率/%

100.033130<10

并计算IC50抑制浓度，并根据各药物的IC50抑制浓度

的百分吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准（0标准）的吸光度值，再乘以100%，即

百分吸光度值/%=B伊100

B0

式中：B为标准溶液或样本溶液的平均吸光度值；B0为0滋g/L标准溶液的平均吸光度值。

分别测定阿维菌素和埃比菌素0、0.5、1.0、1.5、

其浓度对数值（y）和对应浓度的百分吸光率（x）的线性关系。结果显示如表1。

表1药物标准曲线方程

Table1Equationofstandardcurveofdrugs药物名称阿维菌素埃比菌素

线性关系y=-20210x+1.524y=-0.750x+0.273

相关系数0.9990.999

（A）2.0、2.5滋g/kg6个浓度的标准液的吸光度值。求出

该酶联免疫试剂盒对阿维菌素类药物类似物生2.3试剂盒检测限的测定结果

物交叉反应率均较低，具有良好的特异性。

土豆样本进行分别对20份白菜、胡萝卜、干洋葱、

检测，计算阿维菌素类药物的浓度，测定结果的平均值加上3倍标准差为试剂盒的实际样品的最低检测胡萝限。结果显示如表3，该酶联免疫试剂盒对白菜、卜、干洋葱、土豆中阿维菌素和埃比菌素的检测限均为3滋g/kg。

相关系数为R2=0.999，埃比菌素中标准曲线回归方程

阿维菌素标准曲线回归方程为：y=-2.210x+1.524，

表3试剂盒最低检测限

Table3Minimumdetectionlimitofkit

被检药物名称阿维菌素

样本名称白菜胡萝卜干洋葱土豆

埃比菌素

白菜

类别序号测定值序号测定值序号测定值序号测定值序号测定值

测定结果（/滋g/kg）

2.721组2.782组2.723组2.2.792.572.382.632.752.522.722.582.634组2.792.492.592.712.602.512.742.602.2.745组2.632.572.582.492.572.582.722.2.422.726组2.527组2.702.372.602.572.452.572.692.692.582.538组2.479组平均值/最低检测限/

标准差

（滋g/kg）10组（滋g/kg）2.59

2.

0.12

3.00

2.782.2.512.422.2.412.662.782.39

2.59

0.13

2.98

2.61

0.12

2.97

2.56

0.10

2.86

2.59

0.12

2.95

2.572.622.762.552.672.512.612.2.68

2.632.562.672.632.462.712.632.472.77

2.782.2.2.452.732.792.462.442.46

2.602.772.372.502.502.702.452.512.56

2.702.762.412.572.442.402.492.772.44

122陈吉香，等：阿维菌素、埃比菌素的残留检测

续表3试剂盒最低检测限

Continuetable3Minimumdetectionlimitofkit

标准与检测

被检药物

名称埃比菌素

样本名称胡萝卜干洋葱土豆

类别序号测定值序号测定值序号测定值

测定结果（/滋g/kg）

2.441组2.652组2.493组2.502.602.652.2.522.5组2.452.552.572.662.472.765组2.532.612.632.422.462.766组2.482.432.402.482.692.697组2.562.582.622.692.562.398组2.662.562.462.492.572.769组平均值/最低检测限/

标准差

（滋g/kg）10组（滋g/kg）2.722.682.532.572.602.37

2.56

0.14

2.98

2.56

0.11

2.

2.57

0.09

2.84

2.472.532.412.392.38

2.682.452.782.472.65

2.702.732.602.412.66

2.4试剂盒精密度和准确度测定结果

中分别添加5、10滋g/kg和20滋g/kg阿维菌素、埃比菌素，每种样品、每个浓度各6个平行，用试剂盒提供的操作方法提取测定。分别测定计算样品的回收率及变异系数。结果显示如表4、表5，对于阿维菌素，4种样品平均回收率均在92.0%~99.6%之间，对于埃比菌素，4种样品平均回收率均在91.3%~100.1%之间，批内和批间变异系数均小于10%，说明该酶联免疫试剂

精密度又称可重复性，反应测定方法对某一特定

样品多次测定所得结果的重复程度，这是评价酶联免疫试剂盒质量的最基本参数，常用变异系数表示。准确度是指测定值与真实值间的符合程度，试剂盒的准确度常用回收率表示。

干洋葱、土豆样本在检测为阴性的白菜、胡萝卜、

表4试剂盒准确度检测结果Table4Accuracytestresultsofkit

添加水平

被检药物

名称阿维菌素样本名称

平均回收率93.498.096.092.091.494.694.491.3

5滋g/kg最低回收率87.591.090.086.483.485.884.686.1

最高回收率98.2104.0106.3106.098.9104.3103.597.6

平均回收率98.8.698.098.695.297.495.698.5

10滋g/kg最低回收率95.092.1.2.6.3.293.295.3

最高回收率104.1102.5102.4103.0100.5102.6102.8101.7

平均回收率99.697.8.298.396.7100.198.196.2

20滋g/kg最低回收率96.4.495.692.992.496.095.393.0

%最高回收率102.499.6101.3100.4101.1103.0103.798.7

白菜胡萝卜干洋葱土豆

埃比菌素白菜胡萝卜干洋葱土豆

表5试剂盒精密度检测结果Table5Precisiontestresultsofkit

添加水平

被检药物名称阿维菌素样本名称白菜胡萝卜干洋葱土豆

埃比菌素

白菜胡萝卜干洋葱土豆

7.49.37.07.17.19.49.08.6

5滋g/kg批内变异系数

6.19.84.57.87.59.88.49.3

8.07.86.96.85.78.45.98.2

批间变异系数7.18.96.47.37.19.08.19.5

8.39.28.97.49.75.88.87.7

10滋g/kg批内变异系数

9.49.96.67.67.97.46.07.8

7.88.18.69.18.76.87.97.3

批间变异系数8.49.08.18.28.86.67.58.1

9.99.98.79.69.19.46.58.7

20滋g/kg批内变异系数

7.09.19.28.68.39.79..3

9.49.18.59.98.69.59.69.9

%批间变异系数8.69.38.79.48.49.38.59.6

标准与检测

盒具备较高的精密度和准确度。

陈吉香，等：阿维菌素、埃比菌素的残留检测

1232.5试剂盒与仪器方法检测结果比较

食品中阿维菌素残留量的测定液相色谱-质谱/质。谱法》

5滋g/kg，以此为阳性判定线，高于或等于阳性判定线

仪器方法中阿维菌素与埃比菌素的检测限为

胡萝卜、干洋葱、土随机抽取市场上售卖的白菜、

豆样本各80份，分别用试剂盒和仪器方法进行检测。仪器方法参考GB23200.20-2016《食品安全国家标准

结果显示如表6，的值以实际值表示。公司自主研制的

表6试剂盒与仪器检测方法比较

Table6Comparisonofkitandinstrumentdetectionmethod

检测结果（/滋g/kg）

1组--------------------------------2组--5.755.31--------5.985.65--------6.506.40--6.306.30----3组--------6.306.25--------5.5.52------------4组------------------------6.306.20------5组------6.206.10------6.426.23----5.325.20--------6.506.20

6组6.035.87--------6.105.60--------------------7组--------------------------------8组----------------------------5.215.12--9组----------------6.335.66--------------10组----6.506.30--------------------------

被检药物名称阿维菌素

检测样本白菜

检测方法仪器方法试剂盒方法仪器方法试剂盒方法

胡萝卜仪器方法试剂盒方法仪器方法试剂盒方法

干洋葱仪器方法试剂盒方法仪器方法试剂盒方法

土豆仪器方法试剂盒方法仪器方法试剂盒方法

埃比菌素白菜仪器方法试剂盒方法仪器方法试剂盒方法

胡萝卜仪器方法试剂盒方法仪器方法试剂盒方法

干洋葱仪器方法试剂盒方法仪器方法试剂盒方法

土豆仪器方法试剂盒方法仪器方法试剂盒方法

注：-代表阳性。

124检测水平。3结论与讨论

陈吉香，等：阿维菌素、埃比菌素的残留检测

[2]

标准与检测

阿维菌素三合一酶联免疫试剂盒检测结果与仪器检测结果相吻合，表明这试剂盒的准确度达到国家标准

徐汉虹,梁明龙,胡林.阿维菌素类药物的研究进展[J].华南农业大学学报,2005(1):1-6

[3]冯瑜,盛旋,郑屏,等.阿维菌素类药物残留检测方法研究进展[J].

安徽化工,2008(1):1-4[4]

康慧峰,宋洁,张文娟,等.食品中阿维菌素类药物残留检测方法研究进展[J].山西农业科学2011(8):918-921学通报,2013(19):29-32

本文对自主研发的阿维菌素三合一酶联免疫试剂盒的特异性、检测限、精密度和准确度进行研究，并干洋葱、土豆4种样品中阿维菌素类对白菜、胡萝卜、药物的残留量进行检测，将其检测结果与仪器方法相比较。结果表明，阿维菌素三合一酶联免疫试剂盒特异性强、灵敏度高，对白菜、胡萝卜、干洋葱、土豆4种样品的最低检测限为3滋g/kg：阿维菌素测定时4种样品平均回收率在92.0%~99.6%之间，埃比菌素测定时4种样品平均回收率在91.3%~100.1%之间，批内和批间变异系数均小于10%，说明该酶联免疫试剂盒具其对市售白菜、胡萝卜、干备较高的精密度和准确度；

洋葱、土豆4种样品的检测结果与仪器检测结果相吻合，说明该试剂盒达到国家标准检测水平，且分析周期短，样品前处理方法简单，操作方便，检测设备投入少，耗能低，可实现对蔬菜中残留阿维菌素类药物的快速检测。参考文献：

[1]何方洋,裴道国,万宇平,等.阿维菌素类药物单克隆抗体的制备

和鉴定[J].现代畜牧兽医,2010(7):48-51

[5]李铭心,冯伟,崔玉,等.阿维菌素药物毒理学研究进展[J].安徽农[6]KOLARL,ERZENNK,HOGERWERFL,etal.Toxicityofabamectin

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扈洪波,朱蓓蕾.阿维菌素类药物的毒理学研究进展[J].动物科学与动物医学,2000(3):51-52

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ramectin,ivermectin,andmoxidectininmilkusingliquidchromatog原raphyanduorescencedetection[J].JournalofAOACInternational,1999,82:1340-1342

收稿日期：2017-10-18