第１８卷第４期 四川解剖学杂志 ＳＩＣＨＵＡＮ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＡＮＡＴＯＭＹ ＶＯＩ．１８ Ｎｏ．４ Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２０１０ ２０１０年 １２月 双侧颈总动脉夹闭法构建脑缺血再灌注 损伤模型的经验总结 令狐艳 余资江 肖朝伦 戈 果 （贵阳医学院人体解剖学教研室，贵阳５５０００４） 【摘要】双侧颈总动脉夹闭法因其操作简单、动物死亡率低、模型成功率高等优点正在受到广泛的应用，本文通过 对原有的双侧颈总动脉夹闭法构建脑缺血再灌注损伤模型进行了一定的优化，并总结了一些成功的经验和体会，以 期能为模型制作提供一定的参考。 【关键词】脑；缺血再灌注损伤；颈总动脉结扎；模型；经验 【中图分类号】Ｒ７４３ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１００５—１４５７（２０１０）０４—１９—０２ Ａｎｉｍａｌ Ｍｏｄｅｌ Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ Ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ ｆｏｒ Ｃｅｒｅｂｒａｌ Ｉｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｂｙ Ｂｉｌａｔｅｒａｌ Ｃａｒｏｔｉｄ Ａｒｔｅｒｙ Ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ Ｌｉｎｇｈｕ Ｙａｎ Ｙｕ Ｚｉｊｉａｎｇ Ｘｉａｏ Ｃｈａｏｌｕｎ Ｇｅ Ｇｕｏ （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ａｎａｔｏｍｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｇｕｉｙａｎｇ ５５０００４，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｂｅｃａｕｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ａｄｖａｎｔａｇｅｓ ｏｆ ｉｔｓ ｓｉｍｐｌｅ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ，ｌｏｗ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ｏｆ ａｎｉｍａｌ ａｎｄ ｈｉｇｈ Ｓｕｃｃｅｓｓ ｒａｔｅ，ｔｈｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎｊ ｕｒｙ ｍｏｄｅｌ ｂｙ ｂｉｌａｔｅｒａｌ ｃａｒｏｔｉｄ ａｒｔｅｒｙ ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ ｉｓ ｂｅｉｎｇ ｗｉｄｅｌｙ ｕｓｅｄ．Ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ ｗａｓ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｔＯ ｉｎｔｒｏｄｕｃｅ ｃｅｒｔａｉｎ ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ｏｎ ｔｈｅ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｍｅｔｈｏｄ，ａｎｄ ｔｏ ｓｕｍｍａｒｉｚｅ ｓｏｍｅ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕ１ ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ ａｎｄ ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇｓ，ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｐｒｏｖｉｄｅ ｓｏｍｅ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ ａｂｏｕｔ ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｍａｋｉｎｇ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］Ｂｒａｉｎ；Ｉｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎｊｕｒｅ；Ｃａｒｏｔｉｄ ａｒｔｅｒｙ ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ；Ｍｏｄｅｌ；Ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ 近年来，随着缺血性脑血管病发病率的逐年上 升，相关动物模型的构建受到了广泛的关注。双侧 颈总动脉夹闭法因其操作简单、损伤较小，动物死亡 廉、抗病力强、易饲养，加上转基因小鼠的日益应用， 使得小鼠在脑缺血再灌注模型中被广泛使用。在众 多种系的小鼠中又以昆明小鼠生存能力最强，使用 最为广泛，易于购买，且脑血管结构与人类相似等特 点Ｌ２］，因而成为实验的首选。小鼠以６周龄左右，体 重２２￣２５ ｇ为宜。２Ｏ ｇ以下的小鼠抵抗力差，对麻 醉药品敏感，易发生麻醉意外，同时对缺血等操作也 不易耐受，容易死亡；而３０ ｇ以上的小鼠体重过重， 脂肪多，钝性分离血管神经时易引起出血过多而导 率低，模型成功率高，缺血和再灌注时问易于控制， 能很好模拟人类脑梗塞再灌时脑组织病理生理的演 变过程等优点倍受学者们的青睐［１］。以往的模型建 立由于缺乏详尽的细节描述，致使动物实验的重复 性、稳定性和实验数据的可靠性受到了严重的影响。 本文通过对原有双侧颈总动脉夹闭法构建脑缺血再 灌注损伤模型进行了一定的优化，并在反复实践中 积累了一些成功的经验和体会，现报告如下。 致模型稳定性和重复性较差，甚至动物死亡。另外， 在性别的选择上由于雌性小鼠易受到生理周期的影 响，同时雌激素对脑缺血也有一定的保护作用［３］，因 而造模主要选用了雄性小鼠。 １实验动物的选择 在脑缺血再灌注研究中，动物模型多以大鼠、家 兔、猴等为主，但这些动物价格相对比较昂贵，在大 ２ 术前准备 好的术前准备是动物模型成功的重要步骤。小 鼠生性胆小，但适应性较强，因而在术前３～７ｄ应将 动物领回实验室，置于单独笼内进行适应性喂养，使 其适应新的环境。另外，脑对缺血再灌注损伤的耐 受程度与缺血前血液和脑内的葡萄糖浓度有关。过 量使用时受到一定，而小鼠因其体积小、价格低 基金项目：贵阳医学院院基金（Ｋ２００９—２１），贵阳市科技局计划项目（筑 科计合同字第２００８－１５－２１号）。 作者简介：令狐艳（１９７９一），女，讲师，硕士，主要从事脑缺血方向研究。 Ｅ－ｍａｉｌ：５５５１４２９３１＠ｑｑ．ｃｏｒｎ。 ２０ 四川解剖学杂志 第１８卷 高和过低的葡萄糖浓度均可导致动物的神经元损伤 加重和死亡，血糖浓度正常的动物不仅缺血后复苏 较快，其后恢复情况亦较好 。以往有研究认为术 前８～１２ ｄ需对动物进行禁食，但在动物模型构建 的实践操作中，我们发现在自由饮食更有利于提高 小鼠对缺血的耐受力，减少术中、术后动物的死亡 率，提高手术的成功率。我们认为这可能与小鼠的 胃肠容纳能力较小，术前长时间的禁食易引起低血 糖的发生，导致术中动物的死亡。另外，对于啮齿类 动物来说没有呕吐反射，故也无需术前禁食。 ３ 麻醉 对实验动物实行预定的手术操作前，必须要对 动物进行理想的麻醉。过深的麻醉常常导致动物在 术中死亡，而麻醉过浅又会阻碍手术的正常进行。 在脑缺血再灌注损伤模型中常用的物有乙 醚，戊巴比妥钠及水合氯醛等。在之前的试验中我 们发现使用乙醚麻醉，麻醉剂的浓度、时问难以控 制，易造成麻醉深度不够或麻醉过量而造成动物在 手术中反复清醒或死亡，影响手术进程和手术成功。 戊巴比妥钠虽对动物生理指标影响较小，但对呼吸 中枢有较强抑制作用，易引起喉痉挛和支气管痉挛 而导致动物死亡。而水合氯醛是一种安全有效的镇 静催眠药，可腹腔注射麻醉，麻醉效果良好，小鼠一 般在术后半小时左右即可苏醒，但在使用过程中应 注意水合氯醛的麻醉剂量和中毒剂量接近，安全范 围较小，故以浓度５ ，３００ ｍｇ／ｋｇ为宜，如首次麻醉 不完全切忌追加剂量，否则容易引起小鼠死亡。 ４操作人员要求 手术操作是造模成功的关键。首先要求操作者 必须经过专业的培训，熟知实验目的、动物的解剖结 构、技术操作过程及要领等。其次，还必须要求操作 者做到技术娴熟，在术中操作规范、切忌粗暴，尽量 避免损伤小鼠颈部周围组织、血管，减少不必要的出 血，导致小鼠血容量降低，影响模型的稳定性和重复 性，同时也可减少动物的死亡率。 ５模型构建方法 参照蔡竖平等［５ 方法并稍加改进，小鼠称重，以 水合氯醛腹腔注射麻醉，待小鼠无翻正反射后仰卧 固定于手术台上，保持呼吸通畅，常规消毒，经颈部 做０．８～ｌ ｃｍ正中切口，切开皮肤和皮下组织，钝性 分离二腹肌和胸锁乳突肌，暴露颈动脉鞘，然后小心 分离双侧颈总动脉及迷走神经约０．５～１ ｃｍ，并于 颈总动脉下穿以零号丝线，备用。提拉丝线，以无创 伤性微动脉夹夹闭颈总动脉阻断血流１５ ｍｉｎ，然后 去除，恢复灌注１５ ｍｉｎ，如此反复３次。最后缝合皮 肤，消毒，以青霉素肌注抗炎。模型制作过程中，应 注意：①分离血管神经时，尤其注意勿钳夹、牵拉和 损伤迷走神经，如麻醉过深小鼠在实验过程中一旦 刺激迷走神经，很容易引起小鼠呼吸、心跳的停止， 导致动物死亡；②于近心端夹闭颈总动脉，避免损伤 和刺激颈动脉窦引起迷走减压反射引起动物死亡， 同时也可避免误夹颈外动脉，导致造模失败；③分离 手术完毕后以及颈总动脉夹闭、松开过程中均应用 浸有温热生理盐水的纱布或棉花覆盖切口表面，保 持组织湿润；④由于很多，如水合氯醛、戊巴 比妥钠、苯巴比妥钠等均可导致动物体温的下降，因 而在术中还应密切关注体温的变化，整个手术过程 中给予局部加热毯或白炽灯等加热保暖，维持体温 在３７℃左右为宜。 ６ 术后处理 一个模型复制的成功，不仅是手术的顺利完成， 动物的术后处理也是必不可少的。术后处理不当的 危险性，不亚于手术本身，如低体温休克、伤口损伤、 细菌感染等。术后小鼠麻醉苏醒前还需予以白炽灯 或孵育箱继续保温，防止低温休克的发生，室温维持 在２６～２８℃为宜；动物单独饲养，防止被其它动物 攻击和咬伤；另外饲养环境应清洁、卫生，垫料应避 免使用粘附伤口的木屑和刨花等，尽量使用毛巾和 棉布等，避免伤口感染，对于无菌条件较差的实验室 还可酌情使用如青霉素、庆大霉素等肌注抗炎。 总之，建立具有良好的重复性和稳定性的小鼠 脑缺血再灌注损伤模型是研究脑缺血再灌注损伤必 不可少的工具，在实际操作中每个细节往往都会影 响到模型的质量，重视并严格操作实验中的每一个 步骤，不断总结经验，才会使模型的制作越来越完 善，满足实验研究的需要。 参 考 文 献 ［１］马丛，王蕾．小鼠脑缺血再灌注模型方法及中药的药理作用 ［Ｊ］．中华中医药学刊，２００８，２６（２）：２８０—２８２． ［２］高大宽，章翔，蒋晓帆，等．小鼠脑Ｗｉｌｌｉｓ环的解剖及其对局灶 性脑缺血模型的影响［Ｊ］．陕西医学杂志，２００６，３５（１）：３－５． ［３］Ｊｉａｎｇ Ｙｕｎ，Ｃｈｅｎ Ｇｕａｎｇ－ｈｕｉ，Ｚｏｕ Ｇｕｏ－ｑｌｎｇ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ ｉｎ— ｌｆａｍｍａｔｏｒｙ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｅｓｔｒｏｇｅｎ ａｆｔｅｒ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ－ ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｒｅｈａｂｉｌｉｔａ— ｔｉｏｎ，２００６，１０（４６）：２１４－２１５． ［４］王梧霖，史小军，侯天德，等．小鼠脑缺血再灌注模型的构建及 条件优化［Ｊ］．现代生物医学进展，２０１０，ｌＯ（１）：７０—７３． ［５］蔡竖平，桂秋萍，韩志涛，等．脑缺血再灌注后小鼠海马神经元两种 不同的形态学改变ｒＪ］．中国临床康复，２００４，８（３４）：７６８６—７６８７．
