华北农学报・２０１ ６，３１（５）：６２－７０ ＳＳＣ．ｍｉＲ．４８６靶基因预测及生物信息学分析 张秀秀，黄万龙，郭云涛，苗向阳 （中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京 １００１９３） 摘要：通过对ｓｓｃ—ｍｉＲ－４８６进行靶基因预测及生物信息学分析，以探索其影响猪脂肪沉积的作用机制。首先利用 实时荧光定量ＰＣＲ技术对脂肪沉积能力相差较大的莱芜猪和大白猪皮下脂肪组织中ｓｓｃ—ｍｉＲ－４８６表达情况进行比较 研究，然后利用ｍｉＲＢａｓｅ、Ｅｎｓｅｍｂｌ、 ＮＣＢＩ等数据库及ｍｉＲａｎｄａ、ＰＩＴＡ、ＲＮＡｈｙｂｒｉｄ、Ｃｙｔｏｓｃａｐｅ、ＪＡＳＰＡＲ、Ｐｒｏｍｏｔｅｒ Ｓｃａｎ等软 件对ｓｓｃ．ｍｉＲ４８６进行生物信息学分析，包括保守性分析、转录因子结合位点预测、靶基因预测、Ｇ０富集分析和ＫＥＧＧ 信号通路富集分析。结果表明，ｓｓｃ。ｍｉＲ４８６在脂肪沉积能力较强的莱芜猪皮下脂肪组织中发生显著上调。生物信息 学分析结果发现，ｍｉＲ－４８６在各物种间非常保守，ｓｓｃ—ｍｉＲ４８６启动子区域有ＳＲＥＢＰ１、ＳＲＥＢＰ２等多个转录因子结合位 点，获得的２２９个靶基因显著富集于脂质代谢、脂质生物合成、细胞代谢等生物学过程及类固醇生物合成、磷脂肌醇代 谢、ＰＰＡＲ等信号转导通路中。结果表明，ｓｓｃ．ｍｉＲ．４８６参与了猪脂肪沉积或脂肪代谢的，为今后研究脂肪沉积提 供基础理论支撑。 关键词：ＳＳＣ—ｍｉＲ－４８６；生物信息学；脂肪沉积；猪 中图分类号：Ｑ７８ 文献标识码：Ａ 文章编号：１０００—７０９１（２０１６）０５—００６２—０９ ｄｏｉ．１０．７６６８／ｈｂｎｘｂ．２０１６．０５．０１０ Ｔａｒｇｅｔ Ｇｅｎｅ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＳＳＣ－ｍｉＲ－４８６ ＺＨＡＮＧ Ｘｉｕｘｉｕ，ＨＵＡＮＧ Ｗａｎｌｏｎｇ，ＧＵＯ Ｙｕｎｔａｏ，ＭＩＡＯ Ｘｉａｎｇｙａｎｇ （Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １００１９３，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｔａｒｇｅｔ ｇｅｎｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＳＳＣ・ｍｉＲ－４８６ ｗｅｒｅ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｉｔｓ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｔｈｅ ｐｏｒｃｉｎｅ ｆａｔ ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ．Ｆｉｒｓｔ，ｔｈｅ Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｗａｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＳＳＣ－ ｍｉＲ．４８６ ｉｎ ｔｈｅ ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ Ｌａｉｗｕ ｐｉｇ ａｎｄ Ｌａｒｇｅ Ｗｈｉｔｅ ｐｉｇ ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｑｕｉｔｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｉｎ ｔｅｒｍｓ ｏｆ ａｔｆ ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ．Ｔｈｅｎ ｗｅ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＳＳＣ—ｍｉＲ４８６ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｔｈｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｔａｒｇｅｔ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅｓ，ｔｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｖｏｌｖｅｄ Ｇｅｎｅ Ｏｎｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ ＫＥＧＧ ｐａｔｈｗａｙ ｏｆ ｉｔｓ ｔａｒｇｅｔ ｇｅｎｅｓ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｄａｔａｂａｓｅｓ ｓｕｃｈ ａｓ ｍｉＲＢａｓｅ，Ｅｎｓｅｍｂｌ ａｎｄ ＮＣＢＩ ａｎｄ ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃ ｓｏｆｔｗａｒｅｓ ｓｕｃｈ ａｓ ｍｉＲａｎｄａ，ＰＩＴＡ，ＲＮＡｈｙｂｒｉｄ，Ｃｙｔｏｓｃａｐｅ，ＪＡＳＰＡＲ ａｎｄ Ｐｒｏｍｏｔｅｒ Ｓｃａｎ．ｓｓｅ—ｍｉＲ－４８６ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ。 ｌｙ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ Ｌａｉｗｕ ｐｉｇ ｗｉｔｈ ｅａｓｉｌｙ ｆａｔ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｅｓ ａｎａｌ‘ ｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｍｉＲ－４８６ ｗａｓ ｖｅｒｙ ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅ ａｍｏｎｇ ｖａｒｉｏｕｓ ｓｐｅｃｉｅｓ ａｎｄ ｍｕｈｉｐｌｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅｓ ｓｕｃｈ ａｓ ＳＲＥＢＰ１ ａｎｄ ＳＲＥＢＰ２ ｗｅｒｅ ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ａｒｅａ ｏｆ ＳＳＣ—ｍｉＲ４８６．Ａｄｄｉｔｉｏｎａｌｌｙ ｔｈｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ２２９ ｔａｒｇｅｔ ｇｅｎｅｓ ｏｆ ＳＳＣ．ｍｉＲ－４８６ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｅｎｒｉｃｈｅｄ ｉｎ ｍａｎｙ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ，ｆｏｒ ｅｘａｍｐｌｅ ｌｉｐｉｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ， ｌｉｐｉｄ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，ｅｔ ａｌ ａｎｄ ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｐａｔｈｗａｙｓ ｓｕｃｈ ａｓ ｓｔｅｒｏｉｄ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｉｎｏｓｉｔｏｌ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ａｎｄ ＰＰＡＲ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｕｇｇｅｓｔ ｔｈａｔ ＳＳＣ—ｍｉＲ４８６ ｐｌａｙｓ ａ ｃｅｒｔａｉｎ ｒｏｌｅ ｉｎ ａｔｆ ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｌｉｐｉｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｏｆ ｐｉｇｓ ａｎｄ ｐｒｏｖｉｄｅ ａ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｆａｔ ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎ ｔｈｅ ｆｕｔｕｒｅ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ＳＳＣ—ｍｉＲ４８６；Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ；Ｆａｔ ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ；Ｐｉｇ 肥胖是一种代谢综合征，是当今全球侵蚀人类 健康的常发病之一。目前，肥胖已经成为重要的世 收稿日期：２０１６—０７—２１ 界性健康问题，据保守估计，大约有５０％人口处于 超重状态，而且，在未来的几年里，肥胖的人数将达 基金项目：转基因生物新品种培育科技重大专项（２００９ＺＸ０８００８￣０４Ｂ；２００８ＺＸ０８００８－００３）；国家“８６３”计划项目（２００８ＡＡ１０Ｚ１４０）；国家自 然科学基金项目（３０５７１３３９）；中国农业科学院农业科技创新项目（ＡＳＴＩＰ－ＩＡＳ０５）；国家重点基础研究发展计划（“９７３”计划项 目）（２０１５ＣＢ９４３１００）；中国农业科学院创新基金项目（２００４－院一１）；级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目 （２０１３ｙｗｆ－ｙｂ－５；２０１３ｙｗｆ－ｚｄ一２） 作者简介：张秀秀（１９８９一），女，山西大同人，硕士，主要从事分子育种研究。 通讯作者：苗向阳（１９６３一），男，山东莱州人，研究员，博士，博士生导师，主要从事基因工程和功能基因组学及分子育种研究。 － Ｃ Ｔ ｎ ５期 张秀秀等：ＳＳＣ—ｍｉＲ－４８６靶基因预测及生物信息学分析 ￣６ＲＩＣＵＬＴＵＲＡＥ ６３ １到７亿 。此外，肥胖并发症比如心脑血管疾病、 二型糖尿病、胰岛素抵抗、阻塞性睡眠呼吸暂停综合 征等的发病率在逐年升高，明显地增加了全球的发 病率和死亡率 ，因此阐明肥胖发生的机制，制定 有效的治疗方案已迫在眉睫。研究表明，脂肪组织 不仅是能量储存器官，而且是机体重要的调节能量 平衡的内分泌器官，它可以产生和分泌多种生物活 性肽，即脂肪因子，参与葡萄糖和脂质代谢、能量平 衡、成脂分化、血管功能等多个生物学过程的调 控 ，脂肪组织功能紊乱会导致肥胖及其并发症的 发生 ，因此脂肪组织是主要治疗肥胖的靶标。 脂肪组织功能受到ｐＲＢ—Ｅ２Ｆ、ＭＡＰＫ、ＰＰＡＲ、 ＷＮＴ等重要信号通路以及ＳＲＥＢＰＳ、Ｃ／ＥＢＰＳ和 ＰＰＡＲ＇，／等关键转录因子的严格，此外，近年来 越来越多的研究证明ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）在成脂分 化和脂代谢中也发挥了重要作用。ｍｉＲＮＡ是一种 长为１８～２２ ｎｔ的内源性非编码ＲＮＡ，在细胞内由 ７０～８０ ｎｔ的单链ＲＮＡ前体经Ｄｉｃｅｒ酶剪切加工而 来，广泛存在于植物、线虫和哺乳动物细胞中，具有 高度的进化保守性 ，它可通过与靶基因的３ 非翻 译区（３ ＵＴＲ）互补配对，引起靶基因ｍＲＮＡ降解或 转录后翻译抑制，从而对基因表达进行转录后调 控 ，在动物细胞的增殖、分化、凋亡和代谢等许 多生物学过程中发挥重要作用… 。２００３年，ｘｕ 等¨ 在研究果蝇时发现ｍｉＲ．１４参与了三酰基甘油 和二酰基甘油水平的调节，自此ｍｉＲＮＡ对脂代谢的 作用受到了关注，２００４年，Ｅｓａｕ等¨ 发现ｍｉＲ一 １４３可以通过靶基因ＭＡＰ２Ｋ５促进脂肪细胞分化， 自此第１个影响脂肪细胞分化的ｍｉＲＮＡ被鉴定出 来，随后一系列的脂代谢及成脂分化的ｍｉＲ— ＮＡｓ陆续被发现，例如ｍｉＲ １０３促进了成脂分 化 １６］，ｌｅｔ一７和ｍｉＲ．２７家族抑制了成脂分化… ， ｍｉＲ一３３了脂肪酸、甘油三脂和胆固醇的稳态 等 。。 。本试验利用生物信息学对另外１个在莱 芜猪皮下脂肪组织中发生显著上调的ｍｉＲＮＡ—ＳＳＣ－ ｍｉＲ－４８６进行了功能研究，猪是人类疾病研究的医 学模型，在脂肪沉积的很多方面与人类相似 ，故 研究ＳＳＣ．ｍｉＲ－４８６在猪脂肪组织中的作用，不仅 有助于猪的肉质改善，更有望为治疗肥胖提供有用 信息。 ｍｉＲ－４８６是由Ｆｕ等 在２００５年利用人的胎肝 组织研究ｍｉＲＮＡ鉴定方法时首次鉴定并注册的５ 种新ｍｉＲＮＡ之一，目前关于ｍｉＲ－４８６的研究多集中 在肺癌、肝癌、大肠癌、胃癌等癌症的研究中，然而近 来ｍｉＲ４８６在脂肪组织中的功能也逐渐受到了研究 ＤＯＲＥｌｌＬＩ—ＳＩＨＩＣＩＩ 者们的关注。Ｐｒａｔｓ—Ｐｕｉｇ等 对肥胖和正常儿童进 行循环ｍｉＲＮＡ表达谱比较研究时发现，在肥胖儿童 的血清中ｍｉＲ－４８６的浓度显著高于对照组，而且其 浓度的指标与体重指数及其他的肥胖指数例如体脂 率、区域性脂肪分布等密切相关，表明血清中ｍｉＲ一 ４８６的表达异常是青春期前肥胖的１个重要生物标 志。此外，Ｌｉｕ等 钊通过荧光素酶报告和转染试验 证明ｍｉＲ－４８６通过靶向ＨＡＴ１阻碍了ＡＢＣＡ１介导的 胆固醇外流，从而促进了巨噬细胞中胆固醇的积累， 增加了动脉粥样硬化的发生率。基因与细胞工程实 验室前期对不同脂肪沉积能力的莱芜猪和大白猪的 皮下组织小ＲＮＡ进行高通量测序，结果发现ＳＳＣ— ｍｉＲ－４８６在脂肪沉积能力较强的莱芜猪中发生了显 著上调，ｑＰＣＲ也验证了这一点。基于以上发现，推 测ｍｉＲ－４８６可能是一个潜在的参与脂肪沉积的 重要ｍｉＲＮＡ。目前，最权威的ｍｉＲＢａｓｅ数据库对 ＳＳＣ—ｍｉＲ－４８６的功能没有注释，ｍｉＲ－４８６对猪脂肪沉 积的影响机制尚不清楚，因此，本试验主要利用生物 信息学方法对ｍｉＲ－４８６在脂肪沉积中的功能进行进 一步探索和挖掘，为ＳＳＣ．ｍｉＲ４８６在猪脂肪沉积中的 研究提供理论指导，为治疗人类脂肪疾病提供潜在 的靶点。 １ 材料和方法 １．１试验材料 以莱芜市大千农牧有限公司莱芜猪场的莱芜猪 和大白猪作为试验材料，选取在相同条件下饲养的 莱芜猪和大白猪各３头。屠宰后取相同部位的皮下 脂肪组织，迅速放于１．８ ｍＬ的冻存管中，并立即投 入液氮速冻，然后一８０℃冰箱保存备用。 １．２ ｑＰＣＲ检测两品种猪皮下脂肪组织中ＳＳＣ－ ｍｉＲ－４８６的表达变化 利用ＴＲＩｚｏｌ试剂盒（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）提取皮下脂肪 组织各样本的总ＲＮＡ，检测总ＲＮＡ的质量和完整 性，检验合格后用ＳＧ Ｏｎｅ—Ｓｔｅｐ ｍｉＲＮＡ ＲＴ Ｋｉｔ试剂 盒合成ｃＤＮＡ，试验操作按产品说明书进行。以 ｃＤＮＡ为模板，在Ｓｔｅｐ Ｏｎｅ ＰＬＵＳ荧光定量ＰＣＲ仪 （ＡＢＩ，美国）中进行ｑＰＣＲ试验，每个物种３个重复， 反应体系为１５ Ｌ：２×ＳＧ Ｇｒｅｅｎ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ ７．５ ＩｘＬ， 上下游引物（１０￣ｘｍｏｌ／Ｌ）各０．２５ ｐ，Ｌ，ｃＤＮＡ模板 １ Ｌ，ｄｄＨ：Ｏ补至１５ Ｌ。反应条件：９５ ｑＣ预变性 １０ ｒａｉｎ；９５ ｑＣ变性１５ Ｓ，６０℃退火延伸１５ ｓ，４５个循 环；ＰＣＲ产物溶解曲线的反应条件：９５ ｏＣ １５ ｓ， ６０℃３０ Ｓ，９５℃１５ Ｓ。引物为５ －ＴＣＣＴＧＴＡＣＴ— ＧＡＧＣＴＧＣＣＣＣＧＡＧＴＴ．３’，由北京信诺金达生物科技 ＾ Ｃ Ｔ ● ８０ｎ脏ｌｌＣ札Ｕ卜ｆ射ＵＨＲＩｌｃ１．Ｅ 华北农学报 ３１卷 有限公司合成。以 为内参基因，利用２｜△ 计算 ＳＳＣ．ｍｉＲ－４８６的相对表达量，ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５统计软 件对ＳＳＣ—ｍｉＲ－４８６在不同样本中的相对表达量进行 统计分析（ｔ－ｔｅｓｔ），数据以“平均值土标准误（ｍｅａｎ± ＳＥ）”表示。 １．３ ＳＳＣ－ｍｉＲ－４８６生物信息学分析 １．３．１ ＳＳＣ．ｍｉＲ－４８６转录因子结合位点（ＴＦＢＳ）预 测在Ｅｎｓｅｍｂｌｅ数据库中检索出ＳＳＣ－ｍｉＲ－４８６的１ 条前体，再利用ＮＣＢＩ数据库检索到其另外１条前 体，取它们上游２ ｋｂ的序列，利用ＪＡＳＰＡＲ ＣＯＲＥ Ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ（ｈｔｔｐ：／／ｊａｓｐａｒｄｅｖ．ｇｅｎｅｒｅｇ．ｎｅｔ）和Ｓｃａｎ Ｖｅｒｓｉｏｎ １．７ ｆ ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ—ｂｉｍａｓ．ｃｉｔ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｍｏｌｂｉｏ／ ｐｒｏｓｃａｎ／）２个在线预测软件对ＳＳＣ－ｍｉＲ－４８６进行 ＴＦＢＳ预测。 １．３．２ ｍｉＲ－４８６保守性分析从ｍｉＲＢａｓｅ（Ｒｅｌｅａｓｅ ２１；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｉｒｂａｓｅ．ｏｒｇ／）中检索出猪（Ｓｕｓ ｓｃｒｏｆａ，Ｓｓｃ）、人（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ，Ｈｓａ）、牛（Ｂｏｓ ｔａｕｒｕｓ， Ｂｔａ）、大猩猩（Ｇｏｒｉｌｌａ ｇｏｒｉｌｌａ，Ｇｇｏ）、猕猴（Ｍａｃａｃａ ｍｕｌａｔｔａ，Ｍｍ１）、黑猩猩（Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ，Ｐｔｒ）、婆罗州 猩猩（Ｐｏｎｇｏ ｐｙｇｍａｅｕｓ，ＰＰＹ）、灰仓鼠（Ｃｒｉｃｅｔｕｌｕｓ ｇｒｉ— ｓｅｕｓ，Ｃｇｒ）、大鼠（Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ，Ｒｎｏ）、小鼠（Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ，Ｍｍｕ）、马（Ｅｑｕｕｓ ｃａｂａｌｌｕｓ，Ｅｃａ）的ｍｉＲ－４８６ 序列，分析其保守性。 １．３．３ ＳＳＣ—ｍｉＲ－４８６靶基因的预测 为了探索ＳＳＣ— ｍｉＲ－４８６的生物学功能，从Ｅｎｓｅｍｂｌｅ数据库中提取 猪所有基因的３ ＵＴＲ序列，在Ｌｉｎｕｘ系统下利用ｍｉ－ Ｒａｎｄａ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｉｃｒｏｒｎａ．ｏｒｇ／ｍｉｃｒｏ ｒｎａ／ｇｅｔ－ Ｄｏｗｎｌｏａｄｓ．ｄｏ）、ＰＩＴＡ（ｈｔｔｐ：／／ｇｅｎｉｅ．Ｗｅｉｚｍａｎｎ．ａｃ． ｉｌ／ｐｕｂｓ／ｍｉｒ０７／ｍｉｒ０７ｄａｔａ．ｈｔｍ１）、ＲＮＡｈｙｂｒｉｄ（ｈｔｔｐ：／／ ｂｉｂｉｓｅｒｖ．Ｔｅｃ ｈｆａｋ．ｕｎｉ—ｂｉｅｌｅｆｅｌｄ．ｄｅ／ｒｎａｈｙｂｒｉｄ／）３种 软件对ＳＳＣ－ｍｉＲ－４８６进行靶基因的预测，并取三者预 测结果的交集，然后结合文献中报道ｍｉＲ－４８６的靶 基因，共同组成ＳＳＣ－ｍｉＲ－４８６的靶基因集合用于后续 的进一步分析。 １．３．４ Ｇｅｎｅ Ｏｎｔｏｌｏｇｙ分析采用Ｃｙｔｏｓｃａｐｅ的插件 ＢＩＮＧＯ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｙｔｏｓｃａｐｅ．ｏｒｇ／）对靶基因进行 功能富集分析，Ｃｙｔｏｓｃａｐｅ是１个开源的生物信息学 处理软件，可用于生物分子、基因等的信息整合，并 实现分子互作网络的可视化，而ＢＩＮＧＯ可实现 Ｇｅｎｅ Ｏｎｔｏｌｏｇｙ数据库中很大一部分功能，如基因的 ＧＯ注释层次分类及富集分析等。从Ｇｅｎｅ Ｏｎｔｏｌｏｇｙ 数据库（ＷＷＷ．ｇｅｎｅｏｎｔｏｌｏｇｙ．ｏｒｇ）中下载最新的猪的 ＧＯ Ｏｎｔｏｌｏｇｙ注释信息，利用ＢＩＮＧＯ对ＳＳＣ・ｍｉＲ４８６ 预测的靶基因集合进行基于生物学过程（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｒｏｃｅｓｓ，ＢＰ）、细胞组分（Ｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ，ＣＣ）和 分子功能（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ＭＦ）３个层面的ＧＯ注 释分析，并利用超几何分析检验法进行统计学分析， 利用Ｂｅｎｊａｍｉｎｉ．Ｈｏｃｈｂｅｒｇ算法进行校正，得到显著 富集的ＧＯ Ｔｅｒｍｓ（ｃｏｒｒ Ｐ—ｖａｌｕｅ＜０．０５）。 １．３．５ ＫＥＧＧ Ｐａｔｈｗａｙ分析Ｃｙｔｏｓｃａｐｅ的另１个插 件ＣｌｕｅＧＯ是Ｂｉｎｄｅａ等 开发的１个可以进行基 因功能注释分析，并以图表和网络的形式展现分类 注释条目的生物信息学平台，该插件可以随时更新 数据库，保证基因注释的全面性。利用ＣｌｕｅＧＯ对 ８ＳＣ—ｍｉＲ－４８６靶基因集合进行基于ＫＥＧＧ的Ｐａｔｈｗａｙ 富集分析，通过超几何分析检验法进行统计学分析， 利用Ｂｅｎｊａｍｉｎｉ．Ｈｏｃｈｂｅｒｇ算法进行校正，得到显著 富集的Ｐａｔｈｗａｙｓ（ｃｏｌｔ Ｐ—ｖａｌｕｅ＜０．０５），再基于Ｋａｐ・ ｐａ值将功能相近的Ｐａｔｈｗａｙｓ分为１组，以图表和网 络的形式呈现（Ｋａｐｐａ≥０．３）。 ２ 结果与分析 ２．１ ｑＲＴ－ＰＣＲ结果 ｑＲＴ ＰＣＲ结果如图１所示，产生的扩增曲线 是“ｓ”型，溶解曲线只有单一峰，说明ＳＳＣ－ｍｉＲ一 ４８６可以进行特异性扩增，数据经ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５统计软件分析后发现，ＳＳＣ－ｍｉＲ－４８６在莱芜 猪皮下脂肪组织中的表达量极显著高于在大白 猪中的表达量（Ｐ＜０．０００ １），莱芜猪是脂肪沉积 能力较强的猪种，而大白猪是典型的瘦肉型猪 种，故推测ＳＳＣ．ｍｉＲ－４８６可能促进了猪的脂肪沉积。 后续对ＳＳＣ—ｍｉＲ－４８６进行生物信息学分析，以进一步 探索和挖掘其功能。 ２．２ ＴＦＢＳ预测结果 使用２种在线软件分别对２条ＳＳＣ—ｍｉＲ－４８６前 体（表１）的上游２ ｋｂ区域ＴＦＢＳ进行预测，发现它 们的启动子区域有增强子激活结合蛋白２（Ａｃｔｉｖａ－ ｔｉｎｇ ｅｎｈａｎｃｅｒ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ２，ＡＰ一２）、转录因子ＳＰＩ （Ｓｐｌ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ，ＳＰ１）、ＣＣＡＡＴ／．ｔ￣强子结合 蛋白 （ＣＣＡＡＴ／ｅｎｈａｎｃｅｒ—ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｌｐｈａ， ＣＥＢＰｃｔ）、ＣＣＡＡＴ／增强子结合蛋白１３（ＣＣＡＡＴ／ｅｎ． ｈａｎｃｅｒ—ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ｂｅｔａ，ＣＥＢＰ１３）、胆固醇调节元 件结合蛋白１（Ｓｔｅｒｏｌ—ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｅｌｅｍｅｎｔ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏ— ｔｅｉｎｌ，ＳＲＥＢＰＩ）、胆固醇调节元件结合蛋白２（Ｓｔｅｒｏｌ－ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｅｌｅｍｅｎｔ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ２，ＳＲＥＢＰ２）、转录因 子ＳＯＸ１７（ＳＯＸ１７ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ，ＳＯＸ１７）、成肌 分化因子１（Ｍｙｏｇｅｎｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ １，ＭＹＯＤ１）等多 个转录因子结合位点（图２一Ａ），其中ＳＰ１、Ｃ／ＥＢＰｏｔ、 Ｃ／ＥＢＰ１３、ＳＲＥＢＰ１、ＳＲＥＢＰ２均参与了脂肪细胞分化 及脂肪代谢的调节。 ｎ Ｃ Ｔ ｎ ５期 张秀秀等：ＳＳＣ ｍｉＲ－４８６靶基因预测及生物信息学分析 ｌＩＩＲＩＣＵＬＴＵＲＡＥ ６５ ｌＢｇＥｌｌＬｌ－ＳＩＨＩ∞ Ａ ０００１ 扩增曲线 Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｌｏｔ Ｂ 谜霞果 冯 ｍ住 霹∞Ｏ０一 ｛垒坌！墨＝：—— —∥ —一 ｎ ５ 溶解曲线Ｍｅｌｔ Ｃｔｎｗｅ ３７ Ｏ０ｏ．０ ３２ ０００．０ ２７ ０００．Ｏ ２２ Ｏ００．Ｏ １７ ｏ（）０．Ｏ ｌ２ Ｏ００．０ ７ Ｏ００．Ｏ １．司一 一 ＾ Ｐ／笔 Ｄ ２ Ｏ０ｎ Ｏ 。．．．．．．． ６５．０ ７０．０ ７５．０ ８０．０ ８５．０ Ｔ岫：７８．６ ０ ９６．０ ０．０ 骥米 品种Ｂｒｅｅｄ Ｌ 温度／℃ Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ 皇Ｉｓｕａ苫 ００蠹 ∞ ０ｎＩ ０∞ｊＨ∞ ∞ 鲁Ｉ１０ ０昌 Ａ．ＳＳＣ－ｍｉＲ－４８６的扩增曲线；Ｂ．ＳＳＣ—ｍｉＲ－４８６的溶解曲线； Ｃ．ＳＳＣ—ｍｉＲ－４８６在两品种猪皮下脂肪组织中的差异表达；Ｌ．莱芜猪，Ｄ．大白猪。 Ａ．Ｔｈｅ ａｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｐｌｏｔ ｏｆ ＳＳＣ－ｍｉＲ－４８６；Ｂ．Ｔｈｅ ｍｅｌｔｉｎｇ ｃｕｒｖｅ ｏｆ ＳＳＣ．ｍｉＲ－４８６：Ｃ．Ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＳＳＣ—ｍｉＲ－４８６ ｉｎ ｔｈｅ ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅ ｆｒｏｍ ｔｗｏ ｂｒｅｅｄｓ ｏｆ ｐｉｇｓ；Ｌ．Ｌａｉｗｕ ｐｉｇ；Ｄ．Ｌａｒｇｅ Ｗｈｉｔｅ ｐｉｇ． 图１ ｑＲＴ－ＰＣＲ结果 Ｆｉｇ．１ Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｑＲＴ—ＰＣＲ 表１ ＳＳＣ－ｍｉＲ－４８６的前体信息 Ｔａｂ．１ Ｔｈｅ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ＳＳＣ－ｍｉＲ一４８６ ２．３ 保守性分析 应用ｍｉＲＢａｓｅ数据库检索猪在内的共１１个物 种的ｍｉＲ－４８６成熟序列进行分析，结果如表２所示， ｍｉＲ－４８６序列在各物种中高度保守。 表２不同物种ｍｉＲ－４８６成熟序列 Ｔａｂ．２ Ｍａｔｕｒｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｍｉＲ－４８６ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｐｅｃｉｅｓ ２．４靶基因预测结果 面，ＳＳＣ．ｍｉＲ－４８６的靶基因主要显著富集于脂质代 谢、脂质生物合成、细胞脂质代谢及磷脂代谢等与脂 类代谢相关的ＧＯ条目中（ｃｏｎ＂Ｐ－ｖａｌｕｅ＜０．０５），在 取ｍｉＲａｎｄａ、ＰＩＴＡ及ＲＮＡｈｙｂｒｉｄ ３种软件预测 结果的交集，共得２１９个基因（图２－Ｂ），再结合文献 中已报道的ｍｉＲ－４８６的１０个靶基因，共计获得ＳＳＣ— 细胞组分（ＣＣ）层面，靶基因显著富集于细胞质、胞 内组分、膜性细胞器及脂粒等ＧＯ条目中（ｃｏｒｒ Ｐ－ ｍｉＲ－－４８６的靶基因为２２９个，作为后续功能注释的 靶基因集合，如表３所示。 ２．５ Ｇｏ分析结果 ｖａｌｕｅ＜０．０５），在分子功能（ＭＦ）层面，靶基因富集 于酰基转移酶活性、类固醇激素受体活性等条目中 （０．０５＜ｃｏｒｒ Ｐ．ｖａｌｕｅ＜０．２０），由于ｃｏｒｒ Ｐ．ｖａｌｕｅ＞ 针对以上２２９个靶基因进行ＧＯ注释分类和富 集分析，结果显示（表４—６），在生物学过程（ＢＰ）层 ０．０５，富集于ＭＦ层面的条目可能具有假阳性。 ｎ Ｃ Ａ６ＲＩＣＵＬ ＤＯＲＥａＬＩ－ ３Ｉ巷 Ａ ～一一ｉｎ｛ＩＩ－４８６ Ｊ 转录 ｎ’内作ＩＩ Ｊ关系 ： ｍ代是转录 』 ，叫肜代表 Ｂ ３种耙Ｊｌ 预测软件对一，・ｉｎｉｌ１４８６靶基冈的预测 ． ，＿Ｊ｛４８６ 、 Ｉ’ＩＩＰ『 ｌ＿、、（１１ｋ｛ｌｔ＇ ＾Ｉ’一ｒａｉｌ｛４８６ ａｎｄ Ｉ、｝’ ： １、ｌ１ｔ ｔｒｉａｎｇｌｅ：－，｝ｔ’１）ｌＰ ｔ 『ＩＩ Ｉ１＂０．１１￣（‘ｒｉｐｔｈｍ ｌ ｃＩｔ’【【Ｉ１ ｈ．１ｈｅ【’ｃｔｌｔ￣ ｉ ｉｈ ｛。 Ｂ 【１ｌ１ ｌＩｌｔ ｄｉ，’ｌｉｏｎ ｌ－ｆ ｓｕｉｔｓ ｌ】 ＩＨ Ｉ。一ＩＩＩｉＩ／４８６ ｌａｉ ｔ ｆ ｇ ｌ１Ｐｓ Ｉ）ｙ Ｉｈ ＴＰ ｋｉｍｌｓ Ｉ Ｊ ＩｆｎＰＩｌｉ｛ Ｉｉｏｎ ｌＩ｝Ｉ、 “ｌｔ・ 图２ ＳＳＣ－ｍｉＲ－４８６转录因子及靶基因的预测结果 Ｆｉｇ．２ Ｔｈｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ＴＦｓ ａｎｄ ｔａｒｇｅｔ ｇｅｎｅｓ ｏｆ ｓｓｅ—ｍｉＲ一４８６ 表３ ｓｓｅ—ｍｉＲ－４８６的部分靶标基因 Ｔａｂ．３ Ｐａｒｔ ｏｆ ｔｈｅ ｔａｒｇｅｔ ｇｅｎｅｓ ｏｆ ＳＳＣ—ｍｉＲ－４８６ ２．６ ＫＥＧＧ富集结果 为ｌ『进一步探索ＳＳ（－一ＩＩＩｉ１１－４８６的功能， （ （）注 释的基钏Ｉ ，利用Ｃｌｕ （ （）埘２２９个靶墙【 进ｊ ＫＥＧＧ通路 ｔ： 集分析，结 ３所，Ｊｊ，靶 凶 著 琏【叫１Ｉ） （ １１￣・Ｉ１） ｌ（）０ Ｉ ５４５８４ ｌＯ０Ｉ４２６６４ ｌ（）０５ Ｉ ８０４９ ｌＯ０ｌ０ｌ９２２ ３９７２１６ ｌ（）（）１ ４２６６８ ｌ（）０７３９２２３ ３９７３９５ ４４５５３７ ３９７０６２ 符号 （、７ＰＩ１（ ｓｙＩ｜ｌＩ’‘Ｊｌ ｆ 人，，， ｔｌＥ、０ １ ＇ｌｌ／ ４ ７ｗ １ ｜ ５ ３ ， ＩＩ，１ 、 ＥＵ３ ＣＩ）４０ Ｓ ｌ ３ｔ ＬＩ ｌ＂ｂ、 ｆ ＩＤ （ ㈩１ ＩＪ） ｌ００５ｌ ８３５０ ３９６５９０ ｌ００５２３７ｌ６ １（）０５ｌ５７７７ １（】（）１３５６６ｌ ｌ（）６５ １０４６６ １００５ ｌ９３８９ ｌ（）０５２３７３０ ｌ（）（）ｌ ５６８０１ ｌ ００５２４５２０ Ｊ ；Ｉ符 （ ｆ－Ｉｌｃ ＶＩ）１１） Ｆｆ ＶＤＣ１ Ｓ《 ０ Ｍ（）Ｌ Ｍ ４１＇４凡２ ， Ｉ？Ｐ６ ＳＣＤ５ ， Ｉ Ｉ）ＯＣＫ３ ＢＣＩ ，，４ 『｛Ｙ『｛，｛ ＤＩＩ、５ 寓集丁９个，ｆ 物学通路【Ｉｆ． ・ｌＩ＿１包括炎…醇中物合 成、磷酸肌 代谢、磷脂眦肌醇信号通路、 磷脂ｆＩ’ Ｕ－转导通路、 ＡＲ信ｌｊ‘通路、ｐ５３价 通路、 ｇａ－－１Ｉｌｌ｝ｌ Ｒ介 的细胞夼噬作 、非小细胞肺癌、 ＩｌｌＴＯＲ信 转 通路 堪Ｊ Ｋａｐｐａ价，瞵酸肌醇代 磷脂眦肌崞信号通路傲分为一组，其他７个通 路千年为一纠【（Ｋａｐｐａ≥０．３）（ ３一Ｂ）． ｒ｝ｒ前４组均 足 ｊ脂质代ｃ［｛ｆ卡¨天的通路．敞推测ＳＳ（－－ｍｉｌ｛一４８６可能 参 了脂Ｊ 代ｃ！ｊ｝的 表４ ＳＳＣ－ｍｉＲ－４８６靶基因在生物学过程（ＢＰ）层面富集结果 Ｔａｂ．４ Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ＳＳＣ・ｍｉＲ－４８６ ｔａｒｇｅｔ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ＢＰ ｌｅｖｅｌ ｎ Ｃ Ｔ ＾ ５期 张秀秀等：一・．ａｆｉＲ－－４８６靶基因预测及生物信息学分析 ６７ ａ日ＲｌＣＵＬＴＵＲＡＥ ＢＯＲＥＡＬＩ－ＳＨＩＣＡ 表５ ＳＳＣ—ｍｉＲ－４８６靶基因在细胞组分（ＣＣ）层面富集结果 Ｔａｂ．５ Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｓｓｃ－ｍｉＲ－４８６ ｔａｒｇｅｔ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ＣＣ ｌｅｖｅｌ 表６ ＳＳＣ—ｍｉＲ－４８６靶基因在分子功能（ＭＦ）层面富集结果 Ｔａｂ．６ Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｓｓｅ－ｍｉＲ一４８６ ｔａｒｇｅｔ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ＭＦ ｌｅｖｅｌ 基因／条目％６ｅｎｅｓ／Ｔｅｍ Ａ ０ ｌ ２ ３ ５ ６ ７ ８ ９ １０ Ｉｌ ｌ２ ｌ３ Ｉ４ Ｓｔｅｒｏｉｄ ｈｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ 吼Ｒ ｓｉｇａａｌｉｇ ｎｐａｔｈｗａｙ ｌｎｏｓｉｔｏｌ Ｄ｝ｌ０ｓＤｈａｔｅ ｍｔａｂｏｌｉ Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｓｙｓｔｅ￣ ｓｐａｉｎｇｏｌｉｐｉｄ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｃａｙ ４３ ｓｉｓ￣ａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｍＴＯＲ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈ￣ｙ Ｆｃ ｇａｍａ Ｒ－ｍｄｉａｔｅｄ ｐｂａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ Ｎｏｎ－ｓａｌｌｔ ｃｅｌｌｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ＰＩ Ｂ Ｃ ＶＥ ＩＮ Ｌ１ ●．羔 ＨＳＨＯ１ ● ＬＩＰＡ ｔｈｅｓｉＳ ＣＹＰ５１ ｇ ￣ｔｈｗａｙ＂ ＡＣＳＢＧ１ Ｒ ｓ ５ Ａ．９个 著富集的ＫＥＧＧ ｐａｌｈｗａｙｓ：’．靶基闲娃著富集的Ｐａｔｈｗａｙｓ（ｅｏｒｌ ｐ－、ｒａｌｕｅ＜Ｏ．０５）．“．靶基冈极显著寓集的Ｐａｔｈｗａｙｓ（ｒｏｒｒ ｐ－ｖａｌｕｅ（ ０．０１）；Ｂ．基于Ｋａｐｐａ值，根据功能注释进行分组的Ｐａ Ｌｌｉｗａｙｓ：９个通路，共分为了８组（Ｋａｐｐａ≥０．３）；Ｃ．富集通路的网络图：大 点代表通路， 小节点代表富集到泼通路中的靶基冈 Ａ．９ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｅｎｒｉｃｈｅｄ ＫＥＧＧ Ｐａｔｈｗａｙｓ： ．Ｓｉｇｎｉｆｗａｎｔ＇ｈ，ｅｎＡｃｂｅｄ ｐａｔｈｗａｙｓ ｏｆ［ａｒｇｅｌ ｇｅｎｅｓ（ｅｏｌ’ｒ，】－ｖａＪｕｅ＜０．０５）．”．Ｈｉｇｈｌｙ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｅｌｌ！‘ｉｅｈｅｄ ．ｐａｔｈｗａｙｓ ｏｔ ｔａｒｇｅｔ ｇｅｎｅｓ（ｅｏｒｒ Ｐ－ｖａｌｕｅ＜０．０１）：Ｂ．Ａｅｅｏｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｐａｔｈｗａｙｓ，９ ＫＥ（ （ ｐａｔｈｗａｙｓ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ８ ｇｒｏｕｐｓ ｂａｓｅｄ Ｉ１ｎ ＩＩ￣ｅｉｒ Ｋａｐｐａ ｓｃｏｒｅ ｌｅｖｅｌ（Ｋａｐｐａ≥０．３）；Ｃ．Ｔｈｅ ｎｔ‘ｔｗｏｒｋ ｏｆ ｅｎｒｉｃｈｅｄ ｐａｔｈｗａｙｓ：ｔｈｅ ｂｉｇ ｉ｜ｏｄｅｓ ｉｌｌｅａｌｌ ｐａｔｈｗａ） Ｓ．ａｎｄ ｔｈｅ ｓｍａｌｌｅｒ ｎｏｄｅｓ ｎｌｅａｌｌ ｔａｒｇｅｔ ｇｅｎｅｓ ｅｎｒｉｃｈｅｄ ｉｎ ｔｈｅｓｅ ｐａｔｈｗａｙｓ． 图３ ＳＳＣ．ｍｉＲ－４８６靶基因的ＫＥＧＧ富集结果 Ｆｉｇ．３ ＫＥＧＧ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｓｓｅ—ｍｉＲ－４８６ ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ ｔａｒｇｅｔ ｇｅｎｅｓ ３ 讨论与结论 目前随着对ｍｉＲＮＡ研究的日益深入，越来越多 的ｍｉＲＮＡ被鉴定出来，但是仍有很多ｍｉＲＮＡｓ的功 能是未知的，ｍｉＲＮＡ功能的实现往往比较复杂，比 如上游的转录因子和下游的靶基因与ＩｎｉＲＮＡ共同 组成１个网络参与生物学过程的调节，此外， １个ｍｉＲＮＡ可能作用于多个靶基凶，多个ｍｉＲＮＡ也 华北农学报 ３１卷 可能作用于１个靶基因，因此面对庞大数量的ｍｉＲ— ＮＡｓ功能的研究，只是利用试验的方法，已经变得相 当困难，再加上高通量技术的应用和发展，大量的 ｍｉＲＮＡｓ被鉴定出来 驯，为ｍｉＲＮＡ功能的探索和 挖掘带来了挑战。生物信息学作为新兴起的学科， 可以对海量和复杂的信息进行分析和处理，为下一 步试验提供指导，在ｍｉＲＮＡ研究中扮演着非常重要 的角色。本试验主要利用生物信息学方法研究和探 索ｓｓｃ－ｍｉＲ－４８６在猪脂肪沉积及脂代谢中发挥的作 用，以期为后续的试验提供数据支持。首先利用 ｑＲＦ—ＰＣＲ技术对莱芜猪和大白猪皮下脂肪组织中 ＳＳＣ．ｍｉＲ－４８６的表达量进行比较，结果发现其在莱芜 猪中显著上调，推测其促进了猪的脂肪沉积，为了进 一步挖掘ＳＳＣ－ｍｉＲ－４８６潜在的生物学功能，通过生物 信息学方法对ＳＳＣ—ｍｉＲ－４８６进行转录因子结合位点 预测、同源性和进化分析、靶基因预测及对靶基因进 行功能富集分析和信号转导通路富集分析，以了解 ＳＳＣ－ｍｉＲ－４８６可能的转录因子位点、进化关系及 其参与的生物学过程和信号通路，进而对其在 猪脂肪沉积中的作用进行探索。ＭｉＲａｎｄａ、ＲＮＡｈｙ。 ｂｒｉｄ、ＰＩＴＡ是目前比较常用的３种可以实现本地化操 作的靶基因预测软件，下载猪所有基因的３ ＵＴＲ区， 利用这３种软件在本地完成了ＳＳＣ．ｍｉＲ－４８６靶基因的 预测，再取３种软件预测结果的交集，减少了假阳性， 保证了靶基因预测的准确性。此：外，在进行后续功能 分析之前，综合了近几年来关于ｍｉＲ－４８６研究中确定 的靶标作为后续分析的靶基因集合，靶基因预测是进 行ｍｉＲＮＡ功能研究的基础，采用上述策略鉴定出的 靶基因保证了后续功能分析的全面性和可靠性。 为了揭示ＳＳＣ－ｍｉＲ－４８６在猪脂肪沉积中的作用， 本试验对预测的靶基因集进行ＧＯ注释分析和 ＫＥＧＧ生物通路富集分析，利用的分析软件分别是 Ｃｙｔｏｓｃａｐｅ的插件ＢＩＮＧＯ和ＣｌｕｅＧＯ，Ｃｙｔｏｓｃａｐｅ 是 １款开源的生物信息学软件，可用于高通量表达数 据及其他生物分子交互作用信息的整合及分子交互 网络的可视化，此外可以利用自身以及第三方开发 的大量功能插件，实现差异基因及分子的功能注释。 ＢＩＮＧＯ与ＣｌｕｅＧＯ分别完成靶基因的ＧＯ Ｏｎｔｏｌｏｇｙ 分析和ＫＥＧＧ Ｐａｔｈｗａｙ分析，这２款插件与其他的功 能注释软件相比，最大的优势在于它们可以随时更 新ＧＯ Ｏｎｔｏｌｏｇｙ和ＫＥＧＧ Ｐａｔｈｗａ Ｙ数据库，保证注释 信息的全面性，这对于注释信息．相对不完善的猪来 说，具有更大的优势。ＳＳＣ．ｍｉＲ－４８６靶基因集的ＧＯ 注释主要显著富集在了脂质代谢、脂质生物合成、细 胞脂质代谢等生物学过程中，由此推测ＳＳＣ・ｍｉＲ－４８６ 在猪的脂质代谢中发挥重要作用。ＫＥＧＧ分析结果 显示，ＳＳＣ—ｍｉＲ－４８６靶基因显著富集在类固醇生物合 成、磷酸肌醇代谢、鞘磷脂信号转导通路、ＰＰＡＲ信 号通路、非小细胞肺癌信号通路等９个信号转导通 路中。类固醇是广泛分布于生物界的一大类环戊稠 全氢化菲衍生物的总称，包括固醇（如胆固醇、羊毛 固醇、谷甾醇、豆固醇、麦角固醇），胆汁酸和胆汁醇 等，鞘磷脂是机体内两大类磷脂之一，磷酸肌醇是１ 种酸性磷脂，大约占细胞磷脂的８％。ＳＳＣ－ｍｉＲ－４８６ 通过靶向作用于信号通路中的靶基因改变了类固醇 生物合成、磷酸肌醇代谢等通路的信号转导，参与了 这些脂质的生物合成及代谢。 ＰＰＡＲ信号通路也是１条关键的与脂肪酸代 谢、固醇代谢以及成脂分化相关的通路 ，该通路 中的核心元件ＰＰＡＲｓ是一类由配体激活的核转录 因子，可以被脂肪酸及其派生物激活，属于受体超家 族成员，最早由Ｉｓｓｅｍａｎ和Ｇｒｅｅｎ从小鼠肝脏中克隆 得到 ，目前已发现有ＰＰＡＲｃｔ、ＰＰＡＲＩ３和ＰＰＡＲ￣／３ 种亚型 ，其中，ＰＰＡＲａ在肝脏、心脏、肾脏及大部 分的动脉血管细胞中高水平表达，具有调节脂质和 脂蛋白代谢，缓和动脉粥样硬化及降低血浆中三酰 甘油含量等功能。ＰＰＡＲ￣几乎在全身所有组织中 都有较高的表达，目前，有关ＰＰＡＲＩ３的研究报道较 少。而ＰＰＡＲ￣／在脂肪组织中的表达最丰富，是核心 的脂代谢和脂肪细胞分化的转录因子 ” 。 此外，ＲＸＲ（视黄醇ｘ受体）也是ＰＰＡＲ信号通路中 的核心元件，当ＰＰＡＲｓ被上游的脂肪酸等配体激活 后，ＲＸＲ与其结合形成异二聚体，然后通过与位于 脂代谢或成脂分化相关基因上游的特异性ＤＮＡ反 应元件（Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｅｌｅｍｅｎｔ， ＰＰＲＥ）结合而基因表达 ，从而完成整个信号 通路的信号转导，实现了对下游脂代谢、脂肪细胞分 化等生物学功能的。 ＳＳＣ—ｍｉＲ－４８６通过靶向ＲＸＲＢ、ＡＣＳＢＧ１等基因参 与了ＰＰＡＲ通路的信号转导，其中ＲＸＲＢ属于视黄 醇ｘ受体基因，ＡＣＳＢＧ１（酰基辅酶Ａ合成酶口胶家 族成员１）属于ＰＰＡＲ通路中ＰＰＡＲｓ作用的下游靶 基因。Ｋｅｌｌｅｒ等 利用凝胶阻滞和共转染试验证明 ＰＰＡＲｃｘ可以与ＲＸＲＢ形成异二聚体，然后共同激活 乙酰辅酶Ａ氧化酶基因的表达，促进脂肪酸的Ｂ一氧 化。ＡＣＳＢＧ１是ＡＣＳＢＧ家族中的成员，又称长链酰 基辅酶Ａ合成酶，催化脂肪酸转变为相应的脂肪酸 辅酶Ａ派生物，促进脂肪酸氧化分解，Ｗａｎｇ等 叫 研究发现，甲福明可以增加小鼠Ｃ２Ｃ１２细胞中脂肪 酸氧化相关基因ＰＰＡＲＤ、ＡＣＳＢＧ１等的表达，从而促 ５期 张秀秀等：ＳＳＣ—ｍｉＲ－４８６靶基因预测及生物信息学分析 ６９ 进脂肪酸氧化，抑制了Ｃ２Ｃ１２细胞中脂肪的沉积。 因此，ＲＸＲＢ与ＡＣＳＢＧ１均是可以促进脂肪酸氧化， ［２］ ［Ｊ］．Ｌａｎｃｅｔ，１９９８，３５１（９１０６）：８５３—８５６． Ｃｕｍｍｉｎｇｓ Ｄ Ｅ，Ｓｃｈｗａｒｔｚ Ｍ Ｗ．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉ 抑制脂肪沉积的基因，推测ＳＳＣ．ｍｉＲ－４８６通过靶向抑 制ＰＰＡＲ信号通路中的这２个基因，抑制了脂肪酸 的分解代谢，从而促进了猪的脂肪的沉积，这与ＳＳＣ— ｍｉＲ－４８６在脂肪沉积能力较强的莱芜猪中发生显著 上调的现象是一致的。 转录因子结合位点预测发现ＳＳＣ．ｍｉＲ－４８６启动 ｏｌｏｇｙ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｏｂｅｓｉｔｙ［Ｊ］．Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， ２００３．５４（１）：４５３—４７１． Ｊ，Ｉｒｉａｒｔｅ Ｊ，Ｓｉｌｖａ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ｓｌｅｅｐ ［３］ Ｓａｌｖａｄｏｒａｐｎｏｅａ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｉｎ ｏｂｅｓｉｔｙ：ａ ｃｏｎｓｐｉｒａｔｏｒ ｉｎ ｔｈｅ ｓｈａｄｏｗ ［Ｊ］．Ｒｅｖｉｓｔａ ｄｅ Ｍｅｄｉｃｉｎａ ｄｅ Ｌａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｄａｄ ｄｅ Ｎａｖａｒｒａ． ２００４，４８（２）：５５—６２． ［４］ Ｓｍｉｔｋａ Ｋ，Ｍａｒｅｓｏｖａ Ｄ．Ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅ ａｓ ａｎ ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ ｏｒ— ｇａｎ：ａｎ ｕｐｄａｔｅ ｏｎ ｐｒｏ—ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ａｎｄ ａｎｔｉ・ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｐｒａｇｕｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｐｏｒｔ，２０１５，１１６ 子区域有Ｃ／ＥＢＰｃ￣、Ｃ／ＥＢＰ￣、ＳＲＥＢＰ１、ＳＲＥＢＰ２等转 录因子的结合位点，ＳＲＥＢＰｓ是脂类代谢调节中的 一个关键转录因子，其中ＳＲＥＢＰ１可以激活参与脂 肪酸、磷脂和甘油三酯合成的基因ＦＡＳＮ、ＳＣＤ、ＡＣＣ 的表达 ，ＳＲＥＢＰ２了参与胆固醇合成和摄 取的基因如ＨＭＧＣＲ、ＬＤＬＲ和ＨＭＧＣＳ的表达 。 Ｃ／ＥＢＰａ是脂肪细胞分化的关键基因 ， Ｃ／ＥＢＰ￣在脂肪细胞分化的早期表达，通过作用于 Ｃ／ＥＢＰ￣和ＰＰＡＲ￣／启动子上的Ｃ／ＥＢＰ调节元件激 活它们的表达，从而调节下游成脂分化标记基因例 如ＦＡＢＰ４、ＬＰＬ、ＦＡＳ、ＧＬＵＴ４等的表达，使脂肪细胞 进入终末分化阶段 。由此可知Ｃ／ＥＢＰａ、 Ｃ／ＥＢＰ￣、ＳＲＥＢＰ１、ＳＲＥＢＰ２是调节脂肪细胞分化和 脂代谢的关键转录因子，它们作用于ＳＳＣ．ｍｉＲ－４８６编 码基因的启动子，可能会对ＳＳＣ—ｍｉＲ－４８６猪脂代 谢或脂肪细胞分化产生影响。 ，本试验预测得到的靶基因还需要进一步的试验 验证。此外，与人、大鼠、小鼠、牛等物种相比，数据 库中猪的注释信息相对较少，对ＳＳＣ．ｍｉＲ－４８６靶基因 的功能注释相对局限，故随着对猪研究的不断深入， 猪的注释信息会不断完善，那么ＳＳＣ．ｍｉＲ－４８６的功能 就有待进一步分析和阐明。总之，本试验主要利用 生物信息学的方法，对ＳＳＣ—ｍｉＲ－４８６进行转录因子、 ＧＯ、ＫＥＧＧ Ｐａｔｈｗａｙ等方面的分析，探索了ＳＳＣ—ｍｉＲ－ ４８６在猪脂肪沉积、成脂分化、脂代谢等方面的 功能，挖掘出了ＳＲＥＢＰｓ等多种转录因子，ＲＸＲＢ、 ＡＣＳＢＧ１等关键靶基因以及ＰＰＡＲ等重要信号通路。 为今后有关ＳＳＣ．ｍｉＲ－４８６的后续研究提供一定的数 据支持和理论指导。 ＳＳＣ－ｍｉＲ－４８６受到ＳＲＥＢＰｓ、Ｃ／ＥＢＰｓ等多个转录 因子的，它可能通过靶向类固醇生物合成、鞘磷 脂信号转导通路、磷酸肌醇代谢、ＰＰＡＲ信号通路中 的靶基因影响这些通路的信号转导，进而参与了猪 的脂肪沉积及成脂分化的。 参考文献： ［１］Ｌｅａｎ Ｍ Ｅ，Ｈａｎ Ｔ Ｓ，Ｓｅｉｄｅｌｌ Ｊ Ｃ．Ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ ｏｆ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ ｌｉｆｅ ｉｎ ｐｅｏｐｌｅ ｗｉｔｈ ｌａｒｇｅ ｗａｉｓｔ ｃｉｒｃｕｍｆｅｒｅｎｃｅ （２）：８７—１１１． ［５］ Ｌａｆｏｒｅｓｔ Ｓ，Ｌａｂｒｅｃｑｕｅ Ｊ，Ｍｉｃｈａｕｄ Ａ Ａ，ｅｔ ａ１．Ａｄｉｐｏｃｙｔｅ ｓｉｚｅ ａｓ ａ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ ｏｆ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓ— ｓｕｅ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ｒ Ｊ］．Ｃｒｉｔｉｅａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏ— ｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１５，５２（６）：３０１—３１３． ［６］ Ｇｙｌｌｅｎｈａｍｍｅｒ Ｌ Ｅ，Ａｌｄｅｒｅｔｅ Ｔ Ｌ，Ｔｏｌｅｄｏ—Ｃｏｒｒａ１ Ｃ．ｅｔ ａ１． Ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ａｎｄ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｃｔｏｐｉｃ ｆａｔ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｄｙｓ— ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ｌａｔｅ ａｎｄ ｐｏｓｔ－ｐｕｂｅｒｔａｌ ｇｒｏｗｔｈ［Ｊ］．Ｉｎｔｅｒｎａ— ｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｂｅｓｉｔｙ，２０１６，４０（４）：６０１—６０６． ［７］ Ｂａｒｔｅｌ Ｄ Ｐ．ＭｉｃｒｏＲＮＡｓ：ｇｅｎｏｍｉｃｓ，ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ，ｍｅｃｈａ— ｎｉｓｍ，ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ，２００４，１１６（２）：２８１—２９７． ［８］ Ｖａｌｅｎｃｉａ－Ｓａｎｃｈｅｚ Ｍ Ａ，Ｌｉｕ Ｊ，Ｈａｎｎｏｎ Ｇ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｎｔｒｏ１ ｏｆ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍＲＮＡ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｂｙ ｍｉＲＮＡｓ ａｎｄ ｓｉＲＮＡｓ ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｓ＆Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２００６，２０（５）：５１５—５２４． ［９］ Ｂａｒｃｋｍａｎｎ Ｂ，Ｓｉｍｏｎｅｌｉｇ Ｍ．Ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｍａｔｅｒｎａｌ ｍＲＮＡ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｉｎ ｇｅｒｍ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｅａｒｌｙ ｅｍｂｒｙｏｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ—Ｇｅｎｅ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，２０１３， １８２９（６／７，ＳＩ）：７１４—７２４． ［１Ｏ］Ｌｏｈ Ｂ，Ｊｏｎａｓ Ｓ，ｈａｕｒｒａｌｄｅ Ｅ．Ｔｈｅ ＳＭＧ５一ＳＭＧ７ ｈｅｔ一 ｅｒｏｄｉｍｅｒ ｄｉｒｅｃｔｌｙ ｒｅｃｒｕｉｔｓ ｔｈｅ ＣＣＲ４一ＮＯＴ ｄｅａｄｅｎｙｌａｓｅ ｃｏｍｐｌｅｘ ｔｏ ｍＲＮＡｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｎｏｎｓｅｎｓｅ ｅｏｄｏｎｓ ｖｉａ ｉｎｔｅｒ— ａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ＰＯＰ２［Ｊ］．Ｇｅｎｅｓ＆Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２０１３，２７ （１９）：２１２５—２１３８． Ｘｕｅ Ｚ，Ｚｈａｏ Ｊ，Ｎｉｕ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｕｐ—Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＭｉＲ－３００ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｖａｓｉｏｎ ｏｆ ｏｓｔｅｏｓａｒｅｏｍａ ｂｙ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ＢＲＤ７［Ｊ］．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，２０１５，１０（５）：ｅ０１２７６８２． ［１２］ Ｖｉｍａｌｒａｊ Ｓ，Ｓｅｌｖａｍｕｒｕｇａｎ Ｎ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｍｉｃｒｏＲＮＡ・ １ ５ ｂ ｒ Ｊ］．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍａｃｒｏｍｏｌｅ— ｃｕｌｅｓ，２Ｏｌ５．７９：４９０—４９７． ［１３］ Ｚｈａｏ Ｍ Ｊ，Ｓｕｎ Ｌ，Ｃｈｅｎ Ｓ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｂｏｒｎａ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ ｉｎ． ｆｅｅｔｉｏｎ ｉｍｐａｃｔｓ ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓ— ｔｅｍ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｃｅｌ１ ｄｉｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｔｈｅ ｈｉｐｐｏｃａｍｐｉ ｏｆ ｎｅｏｎａｔａｌ ｒａｔｓ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕ— ｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｒｅｐｏｒｔｓ，２０１５，１２（３）：３６９７—３７０３． ［１４］ Ｘｕ Ｐ，Ｖｅｒｎｏｏｙ Ｓ Ｙ，Ｇｕｏ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｉ・ ｃｒｏＲＮＡ Ｍｉｒ一１４ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ａｎｄ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｎｏｒｍａｌ ｆａｔ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ［Ｊ］．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００３，１ ３ （９）：７９０—７９５． ［１５］ Ｅｓａｕ Ｃ，Ｋａｎｇ Ｘ Ｌ，Ｐｅｒａｈａ Ｅ，ｅｔ ａ１．ＭｉｃｒｏＲＮＡ一１４３ ｒｅｇｕ— ｌａｔｅｓ ａｄｉｐｏｃｙｔｅ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００４，２７９（５０）：５２３６１—５２３６５． ［１６］ Ｘｉｅ Ｈ，Ｌｉｍ Ｂ．Ｌｏｄｉｓｈ Ｈ Ｆ．ＭｉｃｒｏＲＮＡｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｄｕｒｉｎｇ ａｄｉｐｏｇｅｎｅｓｉｓ ｔｈａｔ ａｃｃｅｌｅｒａｔｅ ｆａｔ ｃｅｌｌ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｒｅ ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｉｎ ｏｂｅｓｉｔｙ［Ｊ］．Ｄｉａｂｅｔｅｓ，２００９，５８（５）： １０５０—１０５７． ［１７］ Ｋａｒｂｉｅｎｅｒ Ｍ，Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃ，Ｎｏｗｉｔｓｅｈ Ｓ，ｅｔ ａ１．ｍｉｅｒｏＲＮＡ ｍｉＲ一２７ ｂ ｉｍｐａｉｒｓ ｈｕｍａｎ ａｄｉｐｏｃｙｔｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｎ Ｂ Ｔ － ＩＩＢＲＩＣＵＬＴＵＲｇＥ ７０ 华北农学报 ３１卷 ＢＯＲ聃ＬＩ－ＳＩＨ曲 ｔａｒｇｅｔｓ ＰＰＡＲｇａｍｍａ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２００９，３９０（２）：２４７—２５１． ［１８］ Ｋｉｍ Ｓ Ｙ，Ｋｉｍ Ａ Ｙ，Ｌｅｅ Ｈ Ｗ，ｅｔ ａ１．ｍｉＲ一２７ａ ｉｓ ａ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｏｆ ａｄｉｐｏｅｙｔｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｖｉａ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｎｇ ＰＰＡＲ ｇａｍｍａ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｒｅ— ｓｅａｒｃｈ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２０１０，３９２（３）：３２３—３２８． ［１９］ Ｓｕｎ Ｔ Ｗ，Ｆｕ Ｍ，Ｂｏｏｋｏｕｔ Ａ Ｌ，ｅｔ ａ１．ＭｉｃｒｏＲＮＡ ｌｅｔ一７ ｒｅｇ— ｕｌａｔｅｓ ３Ｔ３一Ｌ１ ａｄｉｐｏｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏ－ ｇＹ，２００９，２３（６）：９２５—９３１． ［２０］ Ｍａｒｑｕａｒｔ Ｔ Ｊ，Ａｌｌｅｎ Ｒ Ｍ，Ｏｒｙ Ｄ Ｓ，ｅｔ ａ１．ｍｉＲ一３３ ｌｉｎｋｓ ＳＲＥＢＰ一２ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ ｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｓｔｅｒｏｌ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ ｌＪ １．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａ１ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ，２０１０，１０７（２７）：１２２２８— １２２３２． ［２１］ Ｎａｊａｆｉ—Ｓｂｏｕｓｈｔａｒｉ Ｓ Ｈ，Ｋｒｉｓｔｏ Ｆ，Ｌｉ Ｙ，ｅｔ ａ１．ＭｉｃｒｏＲＮＡ一 ３３ ａｎｄ ｔｈｅ ＳＲＥＢＰ ｈｏｓｔ ｇｅｎｅｓ ｃｏｏｐｅｒａｔｅ ｔｏ ｃｏｎｔｒｏＩ ｃｈｏ． １ｅｓｔｅｒｏｌ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１０，３２８（５９８５）： １ ５６６—１５６９． ［２２］ Ｏｎｏ Ｋ，Ｈｏｒｉｅ Ｔ，Ｎｉｓｈｉｎｏ Ｔ，ｅｔ ａ１．ＭｉｃｒｏＲＮＡ一３３ａ／ｂ ｉｎ ｌｉｐｉｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ—ｎｏｖｅｌ”ｔｈｒｉｆｔｙ”ｍｏｄｅｌｓ『Ｊ］．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ Ｊｏｕｒｎａ１ Ｏｆｆｉｃｉａｌ Ｊｏｎｒｎａ１ ｏｆ ｔｈｅ Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ Ｓｏ— ｃｉｅｔｙ，２０１５，７９（２）：２７８—２８４． ［２３］ Ｃａｒｅｙ Ｇ Ｂ．Ｔｈｅ ｓｗｉｎｅ ａｓ ａ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ ｓｔｕｄｙｉｎｇ ｅｘｅｒｃｉｓｅ—ｉｎ— ｄｕｃｅｄ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｌｉｐｉｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ［Ｊ］．Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｓｃｉ． ｅｎｃｅ ｉｎ Ｓｐｏｒｔｓ ａｎｄ Ｅｘｅｒｃｉｓｅ，１９９７，２９（１１）：１４３７—１４４３． ［２４］ Ｆｕ Ｈ Ｊ，Ｔｉｅ Ｙ，Ｘｕ Ｃ Ｗ，ｅｔ ａ１．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｆｅ— ｔａｌ ｌｉｖｅｒ ｍｉＲＮＡｓ ｂｙ ａ ｎｏｖｅｌ ｍｅｔｈｏｄ［Ｊ］．ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ， ２００５，５７９（１７）：３８４９—３８５４． ［２５］ Ｐｒａｔｓ—Ｐｕｉｇ Ａ，Ｏｒｔｅｇａ Ｆ Ｊ，Ｍｅｒｃａ—ｄｅｒ Ｊ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ＭｉｃｒｏＲＮＡｓ ａｒｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｈｉｌｄｈｏｏｄ ｏｂｅｓｉｔｙ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ＆Ｍｅｔａｂｏ— ｌｉｓｍ，２０１３，９８（１０）：Ｅ１６５５一Ｅ１６６０． ［２６］ Ｌｉｕ Ｄ，Ｚｈａｎｇ Ｍ，Ｘｉｅ Ｗ，ｅｔ ａ１．ＭｉＲ－４８６ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｅｆｌｆｕｘ ｂｙ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ＨＡＴ１［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２０１６，４７２（３）：４１８—４２４． ［２７］ Ｂｉｎｄｅａ Ｇ，Ｍｌｅｃｎｉｋ Ｂ，Ｈａｃｋｌ Ｈ Ａ，ｅｔ ａ１．ＣｌｕｅＧＯ：ａ ｅｙｔｏ— ｓｃａｐｅ ｐｌｕｇ・ｉｎ ｔｏ ｄｅｃｉｐｈｅｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｌｙ ｇｒｏｕｐｅｄ ｇｅｎｅ ｏｎ－ ｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｐａｔｈｗａｙ ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ ｎｅｔｗｏｒｋｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔ— ｉｃｓ，２００９，２５（８）：１０９１—１０９３． ［２８］ Ｍｉａｏ Ｘ Ｙ，Ｌｕｏ Ｑ Ｍ，Ｑｉｎ ｘ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｇｅｎｏｍｅ－ｗｉｄｅ ａｎａｌｙ— ｓｉｓ ｏｆ ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ ｔｈｅ ｌｉｐｉｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｐａｔｈｗａｙ ｔｏ ｂｅ ａ ｄｅｆｉｎｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅ ｆｒｏｍ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｓｈｅｅｐ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｔｉｉｆｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ，２０１５，５：１８４７０． ［２９］ Ｍｉａｏ Ｘ Ｙ，Ｌｕｏ Ｑ Ｍ，Ｑｉｎ Ｘ Ｙ．Ｇｅｎｏｍｅ—ｗｉｄｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｒｅ— ｖｅａｌｓ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｍＲＮＡｓ ａｎｄ ｍｉＲＮＡｓ ｉｎ Ｄｏｒｓｅｔ ａｎｄ Ｓｍａｌｌ Ｔａｉｌ Ｈａｎ ｓｈｅｅｐ ｍｕｓｃｌｅｓ［Ｊ］．Ｇｅｎｅ， ２０１５，５６２（２）：１８８—１９６． ［３０］ Ｍｉａｏ Ｘ，Ｑｉｎ Ｑ Ｌ．Ｇｅｎｏｍｅ—ｗｉｄｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｍＲＮＡｓ ａｎｄ ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ ｉｎ Ｄｏｒｓｅｔ ａｎｄ Ｓｍａｌｌ Ｔａｉｌ Ｈａｎ ｓｈｅｅｐ ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｅｃｕｎｄｉｔｙ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕ— ｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，２０１５，４０２（Ｃ）：３２—４２． ［３１］ Ｄｏｅｒｋｓ Ｔ，Ｃｏｐｌｅｙ Ｒ Ｒ，Ｓｃｈｕｈｚ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｉｄｅｎｔｉ— ｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｏｖｅｌ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｏｍａｉｎ ｆａｍｉｌｉｅｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｎｕｃｌｅａｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００２，１２（１）： ４７—５６． ［３２］ Ｈｅ Ｋ，Ｗａｎｇ Ｑ ｓ，Ｗａｎｇ Ｚ，ｅｔ ａ１．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｓｔｕｄｙ ｂｅ— ｔｗｅｅｎ ｇｅｎｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｉｎ ＰＰＡＲ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ａｎｄ ｐｏｒｃｉｎｅ ｍｅａｔ ｑｕａｌｉｔｙ ｔｒａｉｔｓ［Ｊ］．Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｇｅ— ｎｏｍｅ，２０１３，２４（７／８）：３２２—３３１． ［３３］ Ｉｓｓｅｍａｎｎ Ｉ，Ｇｒｅｅｎ Ｓ．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｍｅｍｂｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｅｒ一 ｏｉｄ ｈｏｒｍｏｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ ｂｙ ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒ— ａｔｏｒｓ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，１９９０，３４７（６２９４）：６４５—６５０． ［３４］ Ｙｕ Ｘ Ｈ，Ｚｈｅｎｇ Ｘ Ｌ．Ｔａｎｇ Ｃ Ｋ．Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ— ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｌｐｈａ ｉｎ ｌｉｐｉｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ａｎｄ ａｔｈｅｒｏ・ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ［Ｊ］．Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１５，７１： １７１—２０３． ［３５］ Ｌａｓｒｉｃｈ Ｄ，Ｂａｒｔｅｌｔ Ａ，Ｇｒｅｗａｌ Ｔ，ｅｔ ａ１．Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｅ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｌｉｐｉｄ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕ・ ｍａｎ ａｄｉｐｏｃｙｔｅｓ［Ｊ］．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１５， ３３７（１）：９４—１０２． ［３６］ Ｍａｒｉｏｎ—Ｌｅｔｅｌｌｉｅｒ Ｒ，Ｓａｖｏｙｅ Ｇ，Ｇｈｏｓｈ Ｓ．Ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ，ｅｉｃｏ— ｓａｎｏｉｄｓ ａｎｄ ＰＰＡＲ ｇａｍｍａ［Ｊ］．Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２０１５（１５）：３０３４２—３０３４３． ［３７］ Ｌｅｆｔｅｒｏｖａ Ｍ Ｉ，Ｌａｚａｒ Ｍ Ａ．Ｎｅｗ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ ｉｎ ａｄｉｐｏ— ｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ， ２００９，２０（３）：１０７—１１４． ［３８］ Ｇｒｅｅｎ Ｓ，Ｗａｈｌｉ Ｗ．Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ・ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅ— ｅｅｐｔｏｒｓ：ｆｉｎｄｉｎｇ ｔｈｅ ｏｒｐｈａｎ ａ ｈｏｍｅ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１９９４，１００（１／２）：１４９—１５３． ［３９］ Ｋｅｌｌｅｒ Ｈ，Ｄｒｅｙｅｒ Ｃ，Ｍｅｄｉｎ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ａｎｄ ｒｅｔｉｎ－ ｏｉｄｓ ｃｏｎｔｒｏｌ ｌｉｐｉｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｔｈｒｏｕｇｈ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｅｒｏｘ－ ｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ－－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－・ｒｅｔｉｎｏｉｄ Ｘ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｓ『Ｊ］．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ，１ ９９３，９０ （６）：２１６０—２１６４． ［４Ｏ］ Ｗａｎｇ Ｃ，Ｌｉｕ Ｆ，Ｙｕａｎ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ｌｉｐ— ｉｄ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｓｋｅｌｅｔａｌ ｍｕｓｃｌｅ ｂｙ ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｏｘｉｄａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，２０１４，６０（６）： ８８７—８９６． ［４１］ Ｃｈｅｎ Ｈ Ｌ，Ｔｕｎｇ Ｙ Ｔ，Ｔｓａｉ Ｃ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｋｅｆｉｒ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｂｙ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｔｈｅ ｌｉｐｏｇｅｎｅｓｉｓ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｌｅｐｔｉｎ—ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｏｂ／ｏｂ ｋｎｏｃｋｏｕｔ ｍｉｃｅ『Ｊ １．１ｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｂｅｓｉｔｙ，２０１４，３８（９）：１１７２—１１７９． ［４２］ Ｒｉｎｃｏｎ Ｇ，Ｉｓｌａｓ—Ｔｒｅｊｏ Ａ，Ｃａｓｔｉｌｌｏ Ａ Ｒ，ｅｔ ａ１．Ｐｏｌｙｍｏｒ— ｐｈｉｓｍｓ ｉｎ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ＳＲＥＢＰ１ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ａｎｄ ＳＣＤ ａｒｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｍｉｌｋ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｉｎ Ｈｏｌｓｔｅｉｎ ｃａｔｔｌｅ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄａｉｒｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１２，７９ （１）：６６—７５． ［４３］ Ｚｈａｎｇ Ｌ，Ｌｉ Ｃ，Ｗａｎｇ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ＰＰＡＲａｌｐｈａ ａｇｏｎｉｓｔ ｃｌｏｆｉｂｒａｔｅ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＳＲＥＢＰｓ ａｎｄ ｒｅｄｕｃｅｓ ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ ａｎｄ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｌｅｖ－ ｅｌｓ ｉｎ ｌｉｖｅｒ ｏｆ ｂｒｏｉｌｅｒ ｃｈｉｃｋｅｎｓ［Ｊ］．ＰＰＡＲ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ２０１５，２０１５：３４７２４５． ［４４］ Ｍａｄｉｓｏｎ Ｂ Ｂ．Ｓｒｅｂｐ２：ａ ｍａｓｔｅｒ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｏｆ ｓｔｅｒｏ１ ａｎｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ２０１６，５７（３）：３３３—３３５． ［４５］ Ｌｉｎ Ｆ Ｔ，Ｌａｎｅ Ｍ Ｄ．Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ＣＣＡＡＴ／ｅｎｈａｎｃｅｒ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ＲＮＡ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ０ｆ ３Ｔ３一 Ｌ１ ｐｒｅａｄｉｐｏｃｙｔｅｓ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｓ＆Ｄｅｖｅｌ０ｐｍｅｎｔ，１９９２，６ （４）：５３３—５４４． ［４６］ Ｇｒｅｇ０ｉｒｅ Ｆ Ｍ，Ｓｍａｓ Ｃ Ｍ，Ｓｕ１ Ｈ Ｓ．Ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ ａｄｉｐｏ－ ｃｙｔｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｐｈｙｓｉ０ｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ，１９９８，７８ （３）：７８３—８０９． ［４７］ Ｒ０ｓｅｎ Ｅ Ｄ，Ｈｓｕ Ｃ Ｈ，Ｗａｎｇ Ｘ Ｚ，ｅｔ ａ１．Ｃ／ＥＢＰ ａｌｐｈａ ｉｎ— ｄｕｃｅｓ ａｄｉｐｏｇｅｎｅｓｉｓ ｔｈｒ０ｕｇｈ ＰＰＡＲ ｇａｍｍａ：ａ ｕｎｉｆｉｅｄ ｐａｔｈ— ｗａｙ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｓ＆Ｄｅｖｅ１ｏｐｍｅｎｔ，２０ｏ２，ｌ６（１）：２２—２６． ［４８］ Ｒ０ｓｅｎ Ｅ Ｄ，Ｍａｃｄｏｕｇａ１ｄ ０ Ａ．Ａｄｉｐ０ｃｙｔｅ ｄｉｆｆｌｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｉｎｓｉｄｅ ０ｕｔ ｆ Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ ＣｅＩＩ Ｂｉｏｌ０ｇｙ，２ｏ０６，７（１２）：８８５—８９６．
