中国抗生素杂志２０１８年５月第４３卷第５期 ５０７ 文章编号：１００１．８６８９（２０１８）０５—０５０７—０６ 耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌种群结构和耐药机制研究 陈东科１周海健２， （１北京医院检验科，国家老年医学中心，北京１００７３０；２中国疾病预防控制中心传染病预防控制所， 传染病预防控制国家重点实验室，北京１０２２０６） 摘要：耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌（ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ．ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ，ＣＲＫＰ）是临床常见的耐药菌之一。 本研究对８８株全国４９家医院收集的ＣＲＫＰ菌株进行碳青霉烯类耐药基因检测，其中６５株（７３．９％）检出ｂｌａ…类基Ｎ（６４株检出 ６ ｃ １株检出６ ｃ－３）、９￣（１０．２％）检出６ Ｍ类基因（均为６ Ｍ－】）、７株（８．ｏ％）检出６ ＭＰ类基因（均为６ Ｐ＿４）。通过多位点 序列分型（ｍｕｌｔｉ—ｌｏｃｕｓ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｔｙｐｉｎｇ，ＭＬＳＴ）将８８株ＣＲＫＰ分为２５个ＭＬＳＴ型，其中ＳＴ１１型为优势型别，包含４８株菌。８８株ＣＲＫＰ 通过脉冲场凝胶电泳（ｐｕｌｓｅｄ ｉｆｅｌｄ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ＰＦＧＥ）分为７９个ＰＦＧＥ型，呈现高度多态性。本研究揭示了我［］ｂｌａ 。 ，阳性 ＣＲＫＰ菌株存在克隆化现象，存在ＳＴ１１型流行克隆；而６ …Ｔｉｂｉａ … 阳性ｃＲＫＰ菌株分子型别多态性大，还没形成流行克 隆。需要密切监测并采取措施控制携带ｂ／ａ 。 ，基因的ＳＴ１１型ＣＲＫＰ的传播扩散。 关键词：耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌；耐药基因；多位点序列分型；脉冲场凝胶电泳；种群结构 中图分类号：Ｒ９６９．３ 文献标志码：Ａ Ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ－ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ Ｃｈｅｎ Ｄｏｎｇ—ｋｅ ａｎｄ Ｚｈｏｕ Ｈａｉ－ｊｉｎ２ａ （１ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆＧｅｒｏｎｔｏｌｏｇｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １００７３０；２ Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｒ ｆＣｏｍｍｕｎｉｃａｂｌｅ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎ￣ｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｒ ｆＤｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎ￣ｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０２２０６） Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ。。ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（ＣＲＫＰ）ＩＳ ｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｃｏｍｍｏｎ ｄｒｕｇ。‘ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｎ ｃｌｉｎｉｃ．Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ，８８ ＣＲＫＰ ｓｔｒａｉｎｓ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｎａｔｉｏｎｗｉｄｅ ｗｅｒｅ ｔｅｓｔｅｄ ｆｏｒ ｃａｒｂａｐｅｎｅｍｓ ｇｅｎｅｓ．Ｏｆ ｗｈｉｃｈ ６５（７３．９％）ｄｅｔｅｃｔｅｄ ６ ＫＰｃ ｇｅｎｅｓ（６４ ｂ／ａｒ￣ｃ．２ ａｎｄ １ ６， ｃ．３），ｎｉｎｅ（１０．２％）ｄｅｔｅｃｔｅｄ ６ ＮＤＭ ｇｅｎｅ（ａｌｌ ｗｅｒｅ ｂｌａＮＤＭ．１） ａｎｄ ｓｅｖｅｎ（８．０％）ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｌａｉ￣ａ，ｇｅｎｅ（ａｌｌ ｗｅｒｅ ｂ／ａＩＭＰＳ．）．Ｂｙ ｍｅａｎｓ ｏｆ ｍｕｌｔｉ—ｌｏｃｕｓ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｔｙｐｉｎｇ（ＭＬＳＴ），８８ ＣＲＫＰ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ２５ ＭＬＳＴ ｔｙｐｅｓ；ｏｆ ｗｈｉｃｈ ＳＴ １ １ ｔｙｐｅ ｗａｓ ｔｈｅ ｄｏｍｉｎａｎｔ ｔｙｐｅ，ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ４８ ｓｔｒａｉｎｓ．Ｂｙ ｐｕｌｓｅｄ ｉｆｅｌｄ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ（ＰＦＧＥ），８８ ＣＲＫＰ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｃｌａｓｓｉｉｆｅｄ ｉｎｔｏ ７９ ＰＦＧＥ ｔｙｐｅｓ，ｓｈｏｗｉｎｇ ｈｉｇｈ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ． Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ６ ．２ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ＣＲＫＰ ｓｔｒａｉｎｓ ｉｎ Ｃｈｉｎａ，ＳＴ１ １ ｃｌｏｎｅ；ｗｈｉｌｅ ｎｏ ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ６ ＮＤＭｏｒ ６ Ｉ ４ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ＣＲＫＰ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ．Ｗｅ ｎｅｅｄ ｔｏ ｃｌｏｓｅｌｙ ｍｏｎｉｔｏｒ ａｎｄ ｔａｋｅ ｍｅａｓｕｒｅｓ ｔｏ ｃｏｎｔｒｏｌ ｔｈｅ ｓｐｒｅａｄ １ ．ｏｆ ６ ｃ２ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ＳＴｌ ｌ ＣＲＫＰ ｓｔｒａｉｎｓ． ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ－－ｒｅｓｉｓｔｎｔａ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ；Ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅ；Ｍｕｌｔｉ－·ｌｏｃｕｓ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｔｙｐｉｎｇ； Ｐｕｌｓｅｄ ｉｅｌｆｄ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ；Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｓｔｕｃｔｒｕｒｅ 收稿日期：２０１８—０４—２４ 基金项目：国家重点基础研究发展计划（９７３计划）（Ｎｏ．２０１５ＣＢ５５４２００）；国家“十三五”科技重大专项（Ｎｏ．２０１８ＺＸ１０７１４００２） 作者简介：陈东科，男，生于１９６１年，副主任检验师，研究方向为病原菌的分离与鉴定、细菌形态学、耐药机制研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｃ－ｄ－ｋ＠２６３．ｎｅｔ ’通讯作者，Ｅ—ｍａｉｌ：ｚｈｏｕｈａｉｊｉａｎ＠ｉｃｄｃ．ｃｎ 耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌种群结构和耐药机制研究 陈东科等 耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌（ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ— ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ，ＣＲＫＰ）是临床常见 的耐药菌之一，不仅会导致临床抗菌药物治疗失败 和病程迁延，而且还会引起院内感染暴发等严重的 公共卫生问题【 ＿２］。自从２００１年在美国发现第一例 亚胺培南、美罗培南）进行实验及结果判读，针对 ＣＲＫＰ菌株采用Ｃａｒｂａ ＮＰ实验检测菌株是否产碳青霉 烯酶。药敏实验质控菌株为大肠埃希菌ＡＴｃｃ２５９２２和 肺炎克雷伯菌ＡＴＣＣ７００６０３，Ｃａｒｂａ ＮＰ实验质控菌株为 ＡＴＣＣ ＢＡＡ．１７０５和ＡＴＣＣ ＢＡＡ．１７０６，购自美国模式菌 种收集中 ｔ￣，（Ａｍｅｒｉｃａｎ ｔｙｐｅ ｃｕｌｕｔｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，ＡＴＣＣ）。 携带ＫＰＣ．２型耐药基因的ＣＲＫＰ以来［ 】，世界各地均 有ＣＲＫＰ的报道【４】。在中国，２００７年在浙江发现并 报道了我国首例质粒介导的ＣＲＫＰｉｓ】，随后在全国 各地均有报道［６＿ｓ］。最近的一项报道显示，２０１ ５年 １．３耐药基因检测 使用ＰＣＲ扩增的方法开展常见碳青霉烯类抗生 素耐药基因（６ｆａＫＰｃ、６，ｄＮＤＭ、６ｆａＩＭＰ、６，日ｖＩＭ￣Ｉｂｌａ０ｘＡ－４８） ｌ４个省份２５家三级医院诊断的耐碳青霉烯类肠杆菌 （ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ—ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ。ＣＲＥ）感染患 者中，７３．９％由ＣＲｒＯ＇￣Ｉ起［ 】。在２０１７年世界卫生组织 （Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ。ＷＨＯ）发布的迫切需要新 型抗生素的细菌清单中，耐碳青霉烯类抗生素的肠 杆菌科细菌位于１类重点的“极为重要”列表中【ｍ】。 ＣＲＫＰ在耐碳青霉烯类抗生素的肠杆菌科细菌中占有 非常大的比例，而且我国临床分离肺炎克雷伯菌对 碳青霉烯类抗生素的耐药率在逐年增高［１１－１２］。 本研究在全国范围内收集没有直接流行病学关 联性的ＣＲＫＰ菌株，通过多位点序列分型（ｍｕｌｔｉ．１ｏｃｕｓ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｔｙｐｉｎｇ．ＭＬＳＴ）￣Ｉ脉冲场凝胶电泳（ｐｕｌｓｅｄ ｉｆｅｌｄ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ＰＦＧＥ）分型开展分子型别多样 性分析，同时检测碳青霉烯类耐药基因，以期揭示 我国ＣＲＫＰ种群结构特征。 １菌株与方法 １．１菌株来源 本研究实验菌株来源于２０１３年１１月一２Ｏ１４年９ 月间分离自全国不同地区的对碳青霉烯类抗生素呈 现耐药性的肺炎克雷伯菌。本研究纳入分析的８８株 ＣＲＫＰ分离自２３个省份的３１个城市的４９家医院。为 了避免由于院内传播导致种群结构的偏倚，每家医 院只随机挑选１－５株菌。如果同一家医院挑选２株以 上，则要求分离自不同月份和不同病区。同一个患 者只挑选一株菌，一共８８株被纳入本研究。标本来 源为痰（５１株）、血（１６株）、尿（１２株）、腹水（５株）、胸 水（２株）和导管（２株）。 １．２抗菌药物敏感性检测 根据美国临床和实验室标准协会（Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＣＬＳＩ）推荐的抗菌药物 敏感性试验执行标准［１３】，采用ＶＩＴＥＫ ２－Ｃｏｍｐａｃｔ全自 动细菌鉴定药敏分析仪（法国Ｂｉｏ．Ｍ６ｒｉｅｕｘ公司 或者 纸片法（ＫＢ法）对３种碳青霉烯类抗生素（厄他培南、 检测，引物参照文献［１４１。如果检出碳青霉烯类抗生 素耐药基因阳性，对扩增片段进行序列测定，将序 列提交美国国家生物技术信息中 ｔ￣，（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ＮＣＢＩ）数据库，通过 基本局部匹配查询工具（Ｂａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ Ｔｏｏｌ，ＢＬＡＳＴ）比对，确定耐药基因型别。 １．４ ＰＦＧＥ实验和分析 肺炎克雷伯菌ＰＦＧＥ分型方法使用本课题组 在前期研究中建立的方法【 ５。 ］，关键参数如下： 调整细菌悬液浓度，使浊度为３．８～４．０；使用４５ ｕ ＸｂａＩ（ＴＡＫＡＲＡ公司，中国大连）进行酶切；在ＣＨＥＦ— ＤＲＩＩＩ（Ｂｉｏ Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ公司，美国）电泳仪中进行 脉冲场电泳；电泳参数为６～３６ｓ，１８．５ｈ。ＰＦＧＥ图像 录入ＢｉｏＮｕｍｅｒｉｃｓ（Ｖｅｒｓｉｏｎ ５．１０，Ａｐｐｔｉｅｄ ｍａｔｈｓ公司， 比利时１软件包进行处理，识别图像条带，经统一的 分子质量标准进行校准，标定条带位置，必要时进 行手工校正，＜２．０５ｘ１０４ｂｐ￣Ｊ条带忽略不计。每两个 图像之间的相似性系数用Ｄｉｃｅ系数（Ｄｉｃｅ ｃｏｅｆｉｆｃｉｅｎｔｓ， ＳＤ）表示［１７】。ＳＤ值反映不同菌株ＰＦＧＥ图像之间的相 似性程度，范围在０～１之间，０代表完全不一样，１代 表完全相同。出现不同条带即判定为不同的型别， 对每一个型别都进行命名。根据每两个图像之间的 相似性系数，用非加权配对算术平均法（ｕｎｗｅｉｇｈｔｅｄ ｐａｉｒ ｇｒｏｕｐ ａｖｅｒａｇｅ ｍｅｔｈｏｄ，ＵＰＧＭＡ）进行聚类，构建 聚类树。ＰＦＧＥ数据录入中国疾病预防控制中心传染 病预防控制所建立的《肺炎克雷伯菌分子分型数据 库》进行比对并命名带型编号。 １．５ ＭＬＳＴ实验和分析 参考法国巴斯德研究所ＭＬＳＴ网站（ｈｔｔｐ：／／ｂｉｇｓｄｂ． ｐａｓｔｅｕｒ．ｆｒ／）公布的肺炎克雷伯菌ＭＬＳＴ方法。对７个管 家基因ｒｐｏＢ、ｇａｐＡ、ｍｄｈ、ｐｇｉ、ｐｈｏＥ、ｉｎｆＢ￣ＩｔｏｎＢ的 片段进行ＰＣＲ扩增和序列测定，测序结果与上述网 站的数据库进行比对获得各基因位点的编号和ＭＬＳＴ ｃ｝ ｌＪｌ删抗生素杂志２０ｌ ８年５』Ｊ第４３卷第５期 型别。 个型别包含１～４８株菌不等。有１６个型别（ＳＴｌ ３０６、 ＳＴ１ ３１８、ＳＴｌ３３３、ＳＴ１４、ＳＴｌ４９３、ＳＴ２５８、ＳＴ４０、 ＳＴ４３７、ＳＴ４４９、ＳＴ６８５、ＳＴ７０９、ＳＴ８４６、ＳＴ８６、 ２结果 ２．１ 耐药特征和耐药基因分布 ８８株ＣＲＫＰ 株经过Ｃａｒｂａ ＮＰ实验检测，其中 ８０株（９０．９％）产：碳青霉烯酶。通过ＰＣＲ检测，８０株 ＳＴ８７５、ＳＴｎｅｗｌ和ＳＴｎｅｗ２） 包含１株菌， 仃１６株 菌（１８．２％）具有独特的ＭＬＳＴ型别。其余９个型别包含 株数大于ｌ株，分别为ＳＴ１１（４８株）、ＳＴｌ ５（７株）、 ＳＴ１４７（３株）、ＳＴ３０７（３株）、ＳＴ３７（３株）、ＳＴ１（２株）、 ＳＴ１７（２株１、ＳＴ３９５（２株）、ＳＴ６５（２株）。ＳＴｌ１ 为优势 碳青霉烯酶ＣＲＫＰ菌均携带碳青霉烯类耐药基 冈，包括６４株榆…ｂｌａ ，１株检出ｂｌａＫ ３，９株 检出ｂｌａ 。 ，７株检出ｂｌａ Ｍ 。其中１株菌同时检 …ｂｌａ ，￣ｂｌａ㈨川基 。所有菌株未检出ｂｌａ Ｍ和 ｂｌａ。 基因。８￣Ｃａｒｂａ ＮＰＮ性菌株 ｔ 未检出上述５ 个种类的耐药 。 ２．２ ＭＬＳＴ分型结果 ８８株ＣＲＫＰ￣ｆ株通过ＭＬＳＴ分型分为２５个ＭＬＳＴ 型（图１）。通过 ｊ法国巴斯德研究所ＭＬＳＴ数据库 ｆｈｔｔｐ：／／ｂｉｇｓｄｂ．ｐａｓｔｅｕｒ．ｆｒ／）比对，其＠２３个为数据库中 已经收录的型别：２个为新型别，分为ＳＴｎｅｗｌ（等 他 因谱为ｇａｐＡ２、ｉｎ，Ｂ 、ｍｄｈｌ、ｐｇｉｌ、ｐｈｏＥｌ、 ｒｐｏＢ１和ｔｏｎＢ３，）、ＳＴｎｅｗ２（等位基冈谱为ｇａｐＡ２、 ，７ ３、ｍｄｈｌ、ｐｇｉｌ、ｐｈｏＥ１、ｒｐｏＢ４，￣Ｉ］ｔｏｎＢ１２）。每 ●ｂｌａ…ｂｌａＫ Ｊ （二 ｂ［ａｌＭ：ｐ ４ ３ －： ·８４６（￣、４⑩ · ３ ｓ，Ｔ Ｓ？Ｔ。 ｅ１４９ ＳＴ Ｉ ７ ｓＴｌ、，． ＳＴ７ ｎ。 。：。－ Ｓｌ＿！Ｔ６８５ ” Ｔ １４９２ 。 ＳＴｎｅｗ２ ｒ， 一 Ｔ３９５ Ｔ８６ ｓＪＴ３ｏ７ ●ｓＴ３１８ 注：罔中每个 代表一个ＭＬＳＴ ，圈的人小 ，Ｊ 该 包含的菌 株数埘的多少， －Ｉ 圳边的数宁代表ＭＬＳＴ！｛ 刖， 个 ｌ之间的 连线 度以及连接线 的数 －ｆ℃表两个型相差的似 数，不同的颜 色代 仃小同特 的 林 图１ 于ＭＬＳＴ的８８株耐碳青礴烯类抗 索肺炎兜雷伯菌最 小生成树 Ｆｉｇ．１ Ｍｉｎｉｍｕｍ ｓｐａｎｎｉｎｇ ｔｒｅｅ ｏｆ ８８ ＣＲＫＰ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ＭＬＳＴ 型别，包含４８株菌，占本次分析菌株的５４．５％。 ６４株ｂｌａ …基 阳性菌株分为１０个ＭＬＳＴＩ￣＇Ｊ．＂， 其中ＳＴｌｌ型包含４８株（７５．０％），为优势型别； 次为 ＳＴ１５，包含４株菌（６．３％）：其余８个型别只包岔ｌ～２株 ｂｌａ 基因阳性菌株。ｌ株｜１） ，基因阳性菌株具有 独特的ＭＬＳＴ型（ＳＴ１３３３）。ＳＴｌ１型包含的４８株菌分离 自１８个城市的３２家医院。 ９株ｂｌａ ．基因阳性菌株分为９个不同的型别， 均具有不同的ＭＬＳＴ型。ｌ株同时携带ｂｌａ …千ｕ ｂｌａ 。…基因的菌株具有独特的ＭＬＳＴ型（ＳＴ４４９）。 ７株ｂｌａ 基因阳性菌株分为５个不同的 别，其 中ＳＴ３０７包含３株菌，其余４个型别只包含１株菌。 ２．３ ＰＦＧＥ分型结果 ８８株ＣＲＫＰ通过ＰＦＧＥ分型分为７９个不 佝ＰＦＧＥ 带型（ ２）。４８株ＳＴ１１ 菌株分为３９个带型， 聚类 树【｝ｌ聚集成一簇。其中３种带型包含大于１株 ，分 别是ＫＰＸＯ１．ＣＮ００１４（包含３株菌，分离自北京市的３ 家医院１、ＫＰＸ０１．ＣＮ００５８（包含５株菌，分离自４个城 市的４家医院１、ＫＰＸ０１．ＣＮ０６６９（包含４株菌，分离『＿ｊ２ 个城市的４家医院）。 ３讨论 ＣＲＫＰ引起的院感暴发事件屡有报道，痫死率 高。我国临床分离的肺炎克借伯菌对碳青 烯类抗 生素耐药率全国平均为８．７％，但各省高低 ‘，为 ０．９％～２３．６％［１ ８３ 。２００９年以前，我困的ＣＲＫＰｔ－要集中 在长三一角地区；但在其后的数年问，全国各地均有 分离ＣＲＫＰ的报道［６，１ ９Ｊ。近年我国ＩＩ 床分离的肺炎兜 雷伯菌巾ＣＲＫＰｌｊ日性率火幅度增加… 】， 仪 医院 内火量存在和传播＿２Ｉ】ｒ ·】，而且由ＣＲＫＰ引起的院内感 染暴发事件时有发生 。ｓ１，提示由ＣＲＫＰ引起的感染 和暴发已经成为需要被关注的公共卫生问题。 产碳青霉烯酶是肺炎克甫伯菌对碳青霉烯类抗 生素产生耐药性的主要原因，其中以产ＫＰＣ 碳青 霉烯酶为主＿４＿ 】。我 是ＫＰＣ酶的主要流行地区之 ５ｌ０ ：。２ 赛 鲁 墨 耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌种群结构和耐药机制研究 陈东科等 两株编号 分离年份 分离地区 医院编号 ＰＦＧＥ型别Ｃａｒｂａ ＮＰ实验耐药基因 ＮＡＩ ８７６ ＮＡｌ ８０６ ２０ｌ４ ２Ｏｌ３ ２Ｏｌ３ ２０１３ ２Ｏｌ３ ２０ｆ４ ２０Ｉ４ ２Ｏｌ４ ２Ｏｌ４ ２０１４ ２Ｏｌ３ ２Ｏｌ４ ２Ｏｌ３ ２Ｏｌ３ ２０ｌ４ ２０ｌ３ ＭＬＳＴ型别 ＳＴ】３ｌ８ 海口市 一亚市 Ｈ１５ Ｆ１３４ ＫＰＸ０ｌ ＣＮ０３ｌ２ ＫＰＸＯ１ ＣＮ０４８８ ＋ ＋ ＮＤＭ—ｌ ＮＤＭ—ｌ ＳＴｌ４９３ ｒ－１ ］ －－－ ｒ＿［二 ＮＡｌ７ｌ８ ＮＡ１７４９ ＮＡｌ７１７ ＮＡ２２ｇ０ 南京市南通市 南京市唐山市银川市Ｈ３Ｉ Ｈ３２ Ｈ３Ｉ Ｈ４０ Ｈ４６ ＫＰＸＯｌ ＣＮ０３ｌ６ ＫＰＸＯＩ ＣＮ∞ｌ５ ＫＰＸ０Ｉ ＣＮ０３Ｉ４ ＫＰＸ０１ ＣＮｏ４９０ ＋－ ＋＋Ｋ Ｃ－２ ＮＤ ＫｐＣ－２ ＫＰＣ－２ Ｓｔ７Ｏ９ ＳＴｌ５ ＳＴＩ５ ＳＴ Ｊ ５ ＳＴ１ ５ ＳＴｌ５ ＳＴ３７ ＮＡＩ ８３５ ＮＡ２２９３ ＸＯｌ ＣＮ０３ｌ３ ＫＰＸ０ｌ ＣＮＯ５００ －＋ＮＤ ＫＰＣ－２ 太原市唐山市Ｈ３９ Ｈ４０ ＮＡ２２７２ ＮＡｌ８７１ ＫＰＸＯｌ ＣＮ０４８９ ＫＰＸＯＩ ＣＮ０３２２ ＫＰＸＯｌ ＣＮ∞３０ ＫＰＸ０ｌ ＣＮＯ４６５ ＋ － 一 ＋ ＮＤＭ·１ ＮＤ ＮＤ ＮＤＭ—ｌ 北京市潮州市 Ｈ０９ ＨＩＩ 一 ＮＡ１７１５ ＮＡ２２８ｌ ＳＴ３７ ＳＴ３７ ＳＴＩ１ ＳＴＩ１ ＳＴｌ】 济南市北京市Ｈ２２ Ｈ０９ ｎ 仁 ＮＡ１ ７２８ ＮＡ１６７９ ＮＡ２２６４ ＰＸ０Ｉ ＣＮ∞Ｏ０ ＫＰＸＯ１ ＣＮ１１３３４ ＫＰＸ０ｌ ＣＮＯ４６８ ， Ｘ０ｌ ＣＮ０２９９ ＋ ＋十 ＋ＫＰＣ·２ ＫＰＣ一２ ＫＰＣ－２ ＫＰＣ－２ 妊市 唐山市北京市Ｆ１３５ Ｈ４０ ＨＯＩ 一 ｒ ｌ— ＮＡｌ７６０ ＮＡ２３ｌ２ ＮＡｌ８３６ ＮＡＩ５０５ ＮＡｌ６７８ Ｎ＾ｌ７７２ ＮＡｌ７６３ ＮＡｌ５４８ ＮＡＩ７３２ ＮＡＩ６７３ ＮＡ１７４８ ＮＡｌ６７５ ＮＡｌ７０９ ＳＴＩｌ ＳＴＩ１ ＳＴＩ１ ＳＴ１ｌ ＳＴｌ１ ＳＴｌ１ ＳＴｌＩ ２０ｌ４ ２Ｏｌ４ ２Ｏｌ３ ２０ｌ３ 杭州市锻ＪＩｌ市Ｈ１６ Ｈ４６ ＫＰｘ０１ ＣＮＯ４６７ ＫＰＸ０ｌ ＣｌＮ０２７３ ＫＰＸ０ｌ ＣＮ００ｌ４ ＫＰＸ０１ ＣＮ０ｏｌ４ ’冲ＸＯｌ ＣＮｏ０１４ ＫＰＸＯｌ ＣＮＯ３Ｄ２ ＫＰＸ０１ ＣＮＯ２８９ ＋ 十＋＋ ＋十 ＋ ＫＰＣ－２ ＫＰＣ·２ ＫＰＣ－２ ＫＰＣ－２ ＫＰＣ－２ ＫＰＣ一２ ＫＰＣ一２ 北京市 北京市北京市北京市Ｆ１０９ Ｈ０２ Ｈ０３ ＨＯＢ ２０ｌ３ 北京市北京市北京市南通市 北京市台肥市Ｈ０９ Ｈ０４ Ｈ０６ Ｈ３２ Ｈ０７ ＨＩ９ Ｈ３０ Ｈ３０ Ｈ３９ Ｈ０８ Ｆ１ｌ ８ Ｈ２４ ＳＴＩｌ ＳＴＩＩ ＳＴｌ】 ２０１３ ＫＰＸ叭ＣＮ０３５０ ＫＰＸＯｌ ＣＮ０３４９ ＫＰＸ０１ ＣＮＯ３３２ ＋＋＋ ｋＰＣ一２ ＫＰＣ一２ ＫＰＣ－２ ＳＴＩ１ ＳＴＩｌ ＳＴｌＩ ＳＴｌ１ ＳＴｌ１ ＳＴｌｌ ＳＴＩ１ ＳＴＩ】 ＳＴｌ】 ＳＴｌ１ ＳＴｌ１ ＳＴｌ】 ＳＴｌ１ ＳＴｌ】 ＫＰＸ０１ ＣＮｏ０５８ ＫＰＸＯｌ ＣＮｏｏ５８ ＋＋ＫＰＣ ２ ＫＰＣ－２ ＮＡｌ７０４ ∞∞∞∞拍加ｉ ｉ ｉ∞如柏柏加南昌市 ；Ｈ２９ 加加∞如 加∞加加加∞如加∞∞ ＋ＫＰＣ一２ ； ＫＰＸ０ｌ ＣＮ００５８ 南京市南京市太原市北京市杭州市 晋中市ｋＰＸＯ１ ＣＮ００５８ ＫＰＸＯｌ ＣＮ０ｏ５８ ＫＰＸ０１ ＣＮ０３４４ ＮＡｌ７０ｌ ＮＡ２３７２ ＋＋＋ＫＰＣ·２ ＫＰＣ·２ ＫＰＣ·２ ＮＡＩ ７２３ ＮＡｌ７６４ ＮＡｌ７２７ ＮＡ２４８２ ＮＡ２２５２ ＮＡ２２５７ ＮＡ２ｏ６８ ＮＡ２２９４ ＮＡ２２５３ ＮＡｌ６９６ ＮＡｌ８２２ ＫＰＸ０ｌ ＣＮ０３４２ ＫｐＸ叭ＣＮ０３４０ ＫＰＸ０１ ＣＮ０６６８ ＋ ＋＋ ＫＰＣ·２ ＫＰＣ－２ ＫＰＣ·２ 唐山市腑山甫Ｈ４１ Ｈ４２ ＫＰＸ０ｌ ＣＮ０６６８ ＫＰＸ０ｌ ＣＮＯ６６８ ＋ ＫＰＣ一２ ＫＰＣ一２ 唐山市太原市庸Ｉｌ１市广州市打家庄市Ｈ４９ Ｈ３９ Ｈ４１ Ｈ１３ Ｈ３８ ＫＰＸ０ｌ ＣＮ０６６８ ＫＰＸ０１ ＣＮ０４７５ ＫＰＸ０１ ＣＮ０４７０ ＫＰＸ０ｌ ＣＮ０３３９ ＫＰｘ０ｌ ＣＮ０３３８ ＫＰＣ·２ ＋＋ ＋＋ ：ｓ盯＂ 牡 拍 Ｍ蚰ＫＰＣ一２ ＫＰＣ一２ ＫＰＣ一２ ＫＰＣ－２ 卜ｌＬ 二 ＮＡｌ８２３ ＮＡｌ７２９ ＮＡｊ６９７ ＮＡ２４０２ ＮＡＩ９８８ ＮＡ１７２６ ＮＡ１６９９ ＮＡ２３５２ Ｎ＾２３ｌ４ ＮＡＩ７７ｌ ＮＡＩ ７４３ ２０１４ ２０１３ ２０ｌ３ ２Ｏｌ３ ２０ｌ３ ２０ｌ４ ２Ｏｌ３ ２０ｌ４ ２０ｌ３ ２０ｌ３ ２０Ｉ４ ２０ Ｊ３ ２０ｌ４ 家庄市瑞安市昆明市 Ｈ３８ Ｈ３３ Ｆ／２５ ＫＰＸ０ｌ ＣＮ０３３７ ＫＰＸ０ｌ ＣＮ０３３７ 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Ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ 青霉烯酶ＣＲＫＰ以来，该类菌已经在全国２Ｏ多个省份 有报道［８－９］。本研究分析全国随机收集的ＣＲＫＰ菌株， 其中９０．９％产碳青霉烯酶；其余８株菌Ｃａｒｂａ ＮＰ检测 不产碳青霉烯酶。这８株Ｃａｒｂａ ＮＰ实验阴性菌株对碳 青霉烯类抗生素耐药的机制可能是：两种主要外膜 蛋￣（ＯＭＰＫ３５和ＯＭＰＫ３６）的丢失、耐药泵等【２６－２７］。 Ｓｙｓｔｅｍ，ＣＡＲＳＳ）、ＣＨＩＮＥＴ中国细菌耐药性监测网， 均是依靠临床机构日常工作开展临床分离菌的耐药性 监测，上述监测只能获得常见临床分离菌对各类抗 生素的耐药率，不能揭示耐药菌的耐药机制和传播规 律。在目前耐药性监测的基础上，开展适当的耐药基 因检测和分子分型，可以揭示耐药菌的耐药机制和传 通过耐药基因检测和ＭＬＳＴ分型揭示携带ｂｌａ ， 基因的ＳＴ１ １型菌株为ＣＲＫＰ的优势菌群。这些结果 与之前的报道一致［６Ｉ８ ］。之前的两项全国性调查表 明，我国分离的ＣＲＫＰ菌株中，携带ｂｌａ 基因占首 位，其次为６，（７ＮＤＭ和６ ＩＭＰ；ｂｌａＫＰＣ、ｂｌａＮＤＭ、ｂｌａＩＭＰ 在之前的两项研究中分别占７５．０％、１ ８．６％、２．７％ 和７７．０％、１５．０％，ＦＩ２．０ ０／０［ ９］。但在本项调查中， ｂｌａＫＰＣ、ｂｌａＮＤＭ［ｔ１］ｂｌａＩＭＰ ３类基因在ＣＲＫＰ中的检出率 为７３．９％、１０．２％和８．Ｏ％，其中６ｚ ＫＰｃ￣ｂｌａＮＤＭ的检出 率低于之前的研究，而ｂｌａ 的检出率高于之前的研 究。这可能与不同研究的菌株收集方法有关。之前 的两项研究均是收集多家医院一段时间内的所有菌 株，包括院内传播和潜在暴发的菌株；而本研究中 每家医院只收集不存在直接流行病学关联的１～５株 菌，不包括院内传播和潜在暴发的菌株。我国目前 的ＣＲＫＰ院内流行和暴发菌株大部分是携带ｂｌａ 基 因的ＳＴ１１型菌株，同时也有携带６ …基因的菌株引 起的暴发报道，所以在进行调查时，相对于挑选不 存在直接流行病学关联的菌株，流行和暴发菌株的纳 入会提高６， ￣ＮｂｌａＮＤＭ基因检出率。本研究采取横 断面采集的方式，从２３个省份的３１个城市的４９家医院 收集ＣＲＫＰ菌株，每家医院只采集１～５株菌，且同一 家的医院的菌株分离自不同时间不同病房，是为了尽 量避免菌株之间存在直接的流行病学关联。所有，可 以认为本研究的菌株之间不存在院内传播，每株菌均 可以被认为是各自所在传播链的代表菌株。 分子分型是研究菌株传播机制的有效手段，其 中ＰＦＧＥ适合用于暴发调查，ＭＬＳＴ多用于大范围长 时间的监测调查，但是随着全基因组测序技术的发 展，基因全基因组序列的分型技术可以替代上述方 法，同时适用于暴发调查和大范围持续监测。本研 究通过ＭＬＳＴ的方法研究我国临床分离的ＣＲＫＰ菌株 种群结构特征，揭示了６ ，基因阳性ＣＲＫＰ菌株存 在克隆化现象，存在ＳＴ１１型流行克隆；而ｂｌａＮｎＭ 和 ｂｌａ 。 基因阳性ＣＲＫＰ菌株基因多态性大，还没形成 播规律，为防控耐药菌传播提供数据支持。 致谢：感谢“ＢＪＹＹ之徒”微信群所有成员给予的支持和 帮助。 参考文献 ［１］ Ｓｈｏｎ Ａ Ｓ，Ｂａｊｗａ Ｒ Ｐ，Ｒｕｓｓｏ Ｔ Ａ．Ｈｙｐｅｒｖｉｒｕｌｅｎｔ （ｈｙｐｅｒｍｕｃｏｖｉｓｃｏｕｓ）Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ：Ａ ｎｅｗ ａｎｄ ｄａｎｇｅｒｏｕｓ ｂｒｅｅｄ［Ｊ］．Ｈｒｕｌｅｎｃｅ，２０１３，４（２）：１０７—１１８． 『２１ Ｇ￣ｒｎｔｋｅ Ｓ，Ｋｏｈｌｅｒ Ｃ，Ｓｔｅｉｎｍｅｔｚ Ｉ，ｅｆ ａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｅｘｔｅｎｄｅｄ·－ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｂｅｔａ－－ｌａｃｔａｍａｓｅ（ＥＳＢＬ）－－ ｐｏｓｉｔｉｖｅ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｆｒｏｍ ｂｌｏｏｄｓｔｒｅａｍ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒｓ ｆｏｒ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ［Ｊ］．Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，２０１４， ２０（１２）：８１７—８１９． ［３］ Ｙｉｇｉｔ Ｈ，Ｑｕｅｅｎａｎ Ａ Ｍ，Ａｎｄｅｒｓｏｎ Ｇ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｎｏｖｅｌ ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ—ｈｙｄｒｏｌｙｚｉｎｇ ｂｅｔａ—ｌａｃｔａｍａｓｅ，ＫＰＣ一１，ｆｒｏｍ ａ ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ—ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｓｔｒａｉｎ ｏｆ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ［Ｊ］． ＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂＡｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，２００１，４５（４）：１１５１－１１６１ 『４１ Ｌｅｅ Ｃ Ｒ，Ｌｅｅ Ｊ Ｈ，Ｐａｒｋ Ｋ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｇｌｏｂａｌ ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｒｂａｐｅｎｅｍａｓｅ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ： Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ，ｇｅｎｅｔｉｃ ｃｏｎｔｅｘｔ，ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｐｔｉｏｎｓ，ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ［Ｊ］．Ｆｒｏｎｔ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０１６，７（ＤＭ０１）：８９５． 『５］ＷｅｉＺＱ，ＤｕＸＸ，ＹｕＹＳ，ｅｔａ１．Ｐｌａｓｍｉｄ—ｍｅｄｉａｔｅｄＫＰＣ－２ｉｎ ａ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｉｓｏｌａｔｅ ｆｒｏｍ Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，２００７，５１（２）：７６３－７６５． ［６】 Ｑｉ Ｗｅｉ Ｚ，Ｊｉ Ｓ，ｅｔ ａ１．ＳＴ１１，ｔｈｅ ｄｏｍｉｎａｎｔ ｃｌｏｎｅ ｏｆＫＰＣ－ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｉｎ Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．ＪＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，２０１１，６６（２）：３０７－３１２． 『７１ 杨丽君，陈坚，杨燕，等．碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌 基因型检测和同源性分析［Ｊ］．中华检验医学杂志，２０１３， ３６（４）：３１８－３２３． ［８］ Ｚｈａｎｇ Ｒ，Ｌｉｕ Ｌ，Ｚｈｏｕ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｎａｔｉｏｎｗｉｄｅ ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ—ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ（ＣＲＥ） ｓｔｒａｉｎｓ ｉｎ Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．ＥＢｉｏ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１７，１９（Ｃ）：９８—１０６． ［９】Ｚｈａｎｇ ＷａｎｇＱ，Ｙｉｎ ｅｔａ１．Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙｏｆｃａｒｂａｐｅｎｅｍ－ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ：Ｒｅｐｏｒｔｒｆｏｍ ｔｈｅ Ｃｈｉｎａ ＣＲＥ ｎｅｔｗｏｒｋ［Ｊ］．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，２０１８，６２（２）． ｐｉｉ：ｅ０１８８２－１７． 『１０１ Ｗｂｄｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ．ＷＨＯ ｐｕｂｌｉｓｈｅｓ ｌｉｓｔ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａ ｏｆｒ ｗｈｉｃｈ ｎｅｗ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ａｒｅ ｕｒｇｅｎｔｌｙ ｎｅｅｄｅｄ［ＥＢ／ＯＬ］． ５１２ 耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌种群结构和耐药机制研究陈东科等 ［２０１７·２－２８］ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｍｅｄｉａｃｅｎｔｒｅ／ｎｅｗｓ／ ｒｅｌｅａｓｅｓ／２０１７／ｂａｃｔｅｒｉａ－ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ．ｎｅｅｄｅｄ／ｅｒｄ． ｆｌ１１徐安，卓超，苏丹虹，等．２００５－－２０１４年ＣＨＩＮＥＴ克雷伯菌 属细菌耐药性监测［Ｊ］．中国感染与化疗杂志，２０１６，１６（３）： ２６７．２７４． ｎ２１田磊，陈中举，孙自镛，等．２００５－－２０１４年ＣＨＩＮＥＴ肠杆菌 属细菌耐药性监测［Ｊ】＿中国感染与化疗杂志，２０１６，１６（３）： ２７５．２８３． 『１３１ ＣＬＳＩ，２０ １ ６．Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｓｔａｎｄａｒｄｓ ｆｏｒ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｔｅｓｔｉｎｇ；Ｔｗｅｎｔｙ－ｔｌｌ耐ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ． ＣＬＳＩ ｄｏｃｕｍｅｎｔ Ｍ １ ００一Ｓ２６【Ｓ】．Ｗａｙｎｅ，ＰＡ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ． 『１４１ Ｎｏｒｄｍａｎｎ Ｐ，Ｎａａｓ Ｔ，Ｐｏｉｒｅｌ Ｌ．Ｇｌｏｂａｌ ｓｐｒｅａｄ ｏｆ ｃａｒｂａｐｅｎｅｍａｓｅ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ［Ｊ】．Ｅｍｅｒｇ ＩｎｆｅｃｔＤｉｓ，２０１１，１７（１０）：１７９１－１７９８． ［１ ５】Ｈａｎ Ｈ，Ｚｈｏｕ Ｈ，Ｌｉ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｕｌｓｅ—ｉｆｅｌｄ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｆｏｒ ｓｕｂｔｙｐｉｎｇ ｏｆ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ［Ｊ］． ＩｎｔＪＥｎｖｉｒｏｎ Ｒｅｓ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ，２０１３，１０（７）：２７２０—２７３１． 『１６１杜小莉，周海健．肺炎克雷伯菌脉冲场凝胶电泳分型能力 评价［Ｊ］．疾病监测，２０１５，３０（１１）：９０１—９０７． 【１ ７］Ｄｉｃｅ Ｌ Ｒ．Ｍｅａｓｕｒｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ａｍｏｕｎｔ ｏｆ ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｓｐｅｃｉｅｓ［Ｊ］．Ｅｃｏｌｏｇｙ，１９４５，２６（３）：２９７—３０２． 『１８１全国细菌耐药监测网．２０１６年全国细菌耐药监测报告（简 要版）．［２０１７—１２—２０］ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｒｓｓ．ｃｎ／Ｒｅｐｏｒｔ／Ｄｅｔａｉｌｓ／４０３． ｆ１９】张冀霞，刘颖梅，陈宏斌，等．我国产碳青霉烯酶肠杆菌科 细菌的基因型及流行病学研究［Ｊ］．中华内科杂志，２０１４， ５３（２）：１１６—１２０． ［２０】Ｌｉａｎｇ Ｙｉｎ Ｘ，Ｚｅｎｇ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｃｌｏｎａｌ ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｅｐｉｄｅｍｉｃ ＫＰＣ—ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｉｎ ａ ｈｏｓｐｉｔａｌ ｉｎ Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．ＢＭＣＩｎｆｅｃｔＤｉｓ，２０１７，ｌ７（１）：３６３． ｆ２１１陈东科，周海健．北京某医院耐碳青霉烯类抗生素肺炎克 雷伯菌分子流行病学研究［Ｊ］．中华预防医学杂志，２０１７， ５ １（１０）：８９６·９０２． ［２２］Ｚｈｕ Ｊ，Ｓｕｎ Ｌ，Ｄｉｎｇ Ｂ，ｅｔ ａ１．Ｏｕｔｂｒｅａｋ ｏｆ ＮＤＭ－１－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ＳＴ７６ ａｎｄ ＳＴ３７ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｉｎ ｎｅｏｎａｔｅｓ［Ｊ］． ＥｕｒＪＣｌｉｎ ＭｉｃｒｏｂｉｏｌＩｎｆｅｃｔＤｉｓ，２０１６，３５（４）：６１１－６１８． ［２３】Ｇｕ Ｄ，Ｄｏｎｇ Ｎ，Ｚｈｅｎｇ Ｚ，ｅｔ ａ１．Ａ ｆａｔａｌ ｏｕｔｂｒｅａｋ ｏｆ ＳＴ１１ ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｈｙｐｅｒｖｉｒｕｌｅｎｔ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｉｎ ａ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｈｏｓｐｉｔａｌ：Ａ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｔｕｄｙ［Ｊ］． ＬａｎｃｅｔＩｎｆｅｃｔＤｉｓ，２０１８，１８（１）：３７－４６． ［２４］ＺｈａｎＬ，Ｗａｎｇ Ｓ，Ｏｕｏ ｅｔａ１．Ｏｕｔｂｒｅａｋｂｙｈｙｐｅｒｍｕｃｏｖｉｓｃｏｕｓ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ＳＴ １ １ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｉｔｈ ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎ ａ ｔｅｒｔｉａｒｙ ｈｏｓｐｉｔａｌ ｉｎ Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．Ｆｒｏｎｔ Ｃｅｌｌ Ｉｎｆｅｃｔ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０１７，７：１８２． ［２５］Ｙｕ Ｊ，Ｗａｎｇ Ｃｈｅｎ Ｚ，ｅｔ ａ１．Ｏｕｔｂｒｅａｋ ｏｆ ｎｏｓｏｃｏｍｉａｌ ＮＤＭ一 １－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ＳＴ１４１９ ｉｎ ａ ｎｅｏｎａｔａｌ ｕｎｉｔ［Ｊ］．Ｊ Ｇｌｏｂ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ｒｅｓｉｓｔ，２０１７，８：１３５－１３９． ［２６］Ｈａｍｚａｏｕｉ Ｚ，Ｏｃａｍｐｏ—Ｓｏｓａ Ａ，Ｍａｒｔｉｎｅｚ Ｍ ｅｔ ａ１．Ｒｏｌｅ ｏｆ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ＯｍｐＫ３５ ａｎｄ ＯｍｐＫ３６ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｂ／ａＥｓＢＬ ａｎｄＪｏｒ ｂｌａＡｍ。ｃ ｉｎ ｃｏｎｆｅｒｒｉｎｇ ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｍｏｎｇ ｎｏｎ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｃａｒｂａｐｅｎｅｍａｓｅ－Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ［Ｊ］．Ｉｎｔ ＪＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂＡｇｅｎｔｓ，２０１８，４．ｐｉｉ：Ｓ０９２４—８５７９（１８）３００９８—０． ［２７】Ｐａｇｅｓ Ｊ Ｍ，Ｌａｖｉｇｎｅ Ｊ Ｐ，Ｌｅｆｌｏｎ—Ｇｕｉｂｏｕｔ Ｖ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｉｆｕｘ ｐｕｍｐ，ｔｈｅ ｍａｓｋｅｄ ｓｉｄｅ ｏｆ ｂｅｔａ－ｌａｃｔａｍ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｉｓｏｌａｔｅｓ［Ｊ］．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，２００９， ４（３）：ｅ４８１７．
