２０１２年２月 第２４卷下半月第４期 中国民康医学 Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｐｅｏｐｌｅ ｓ Ｈｅａｔｈ Ｆｅｂ．２０１２ Ｖｏ１．２４ ＳＨＭ Ｎｏ．４ 【临床研究】 加替沙星分散片相对生物利用度试验研究 杨 或 （１．苏州大学，江苏苏州２１５００６；２．常州市第一人民医院） 【摘要】 目的：研究加替沙星分散片在人体血浆中的相对生物利用度。方法：选择健康男性志愿者２０例，采用ＨＰＬＣ法测定加替沙星 片在人体血浆内的浓度，以确定其在人体内吸收的速度与程度。本实验采用Ｈｙｐｅ￣ｉｌ—ＢＤＳ（１５０ｒａｍ×４．６ｒａｍ）色谱柱，以乙腈：０．Ｏｌｍｏ￣Ｌ磷酸 二氢钾（用磷酸调ｐＨ至３．０）（２５：７５）为流动相，检测波长２９３ｎｍ，流速１．Ｏｍ￣ｍｉｎ。结果：加替沙星分散片的体内动态过程呈一级吸收的一级 房室开放模型，参比制剂和受试制剂的Ｃ…分别为（３．８２±１．１４） ｇ／ｍｌ和（３．８２±０．９１） ｇ／ｍｌ，ｔｍａｘ分别为（１．６±０．３）ｈ和（１．４±０．５）ｈ， ｔｌ／２ｋｅ分别为（９．０７±１．０９）ｈ和（８．４３±１．０７）ｈ，Ａｕｃ０ 分别为（４３．９６±７．８０） ｇ・ｈ・ｍｌ 和（４Ｏ．７８±７．９４） ｇ・ｈ・ｍｌ～。结论：加替沙星分 散片相对生物利用度为９３．４％±２３．Ｏ％，受试制剂加替沙星分散片和参比制剂加替沙星片具有生物等效性。 【关键词】 加替沙星分散片；相对生物利用度；高效液相色谱法 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２—０３６９．２０１２．０４．０１９ 中图分类号：Ｒ９６９．１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７２—０３６９（２０１２）０４—０４１３—０２ 加替沙星为８一甲氧基氟喹诺酮类外消旋体化合物，体 １．４．１ 血浆内标准曲线的制备 取具塞离心管，分别精密 添加加替沙星对照品系列溶液２０ ｌ，加入健康人空白血浆 ０．５ｍｌ，按血浆样品预处理方法项下操作，配制成浓度分别为 ８．０、６．０、２．０、０．８、０．４、０．１、０．０５、０．０２５ ｇ／ｍｌ的一系列样品 外具有广谱的抗革兰阴性和阳性微生物的活性，其Ｒ一和Ｓ 一对映体抗菌活性相同。本品的抗菌作用是通过抑制细菌 的ＤＮＡ旋转酶和拓扑异构酶Ⅳ，从而抑制细菌ＤＮＡ的复 制、转录及修复过程。本品主要用于治疗敏感病原体所致的 溶液（依次编号为８，７，６……１号液），每种浓度配２份样品， 进样１００￣１测定，记录色谱图，以血浆中加替沙星的浓度为 各种感染性疾病，包括慢性支气管炎急性发作、急性鼻窦炎、 社区获得性肺炎、单纯性尿路感染（膀胱炎）和复杂性尿路感 染、急性。肾盂肾炎、男性淋球菌性尿路炎症或直肠感染、女性 淋球菌性宫颈感染。 横坐标，以待测物与内标的峰面积比为纵坐标，进行线性回 归。得血浆中加替沙星回归方程：（取３天线性每浓度平均 值做的平均线性）Ｙ＝１．１３８９ｘ＋０．０２１２，相关系数ｒ＝ ０．９９９８。 本实验采用ＨＰＬＣ法对其进行相对生物利用度的研究， 参考相关文献的方法，通过反复摸索斟定以内标法对其进行 血药浓度的测定。本实验ＨＰＬＣ测定方法，血浆中杂质不干 １．４．２质量控制 为了检查本实验方法的可靠性，在进行 受试者血浆样品测试的过程中进行已知浓度样品的测定。 配制０．０４６８￣ｇ／ｍｌ、０．３７４２￣ｇ／ｍｌ、３．７４２１ ｇ／ｍｌ的低、中、高 （２，４，７号液）三个浓度样品，进行方法学的质量控制，以测 得的浓度表示，测定质控样品数不得少于未知样品数的５％， 列出其中一个分析批质控样本。测定结果见表１： 扰样品的测定，线性关系良好（Ｙ：１．１３８９ｘ＋０．０２１２，相关系 数ｒ＝０．９９９８），加替沙星分散片的平均绝对回收率大于 ８０％，最低检测浓度为２５ｎｇ／ｍｌ；低、中、高三个浓度下的日内 和日间变异系数均小于１５％，质控点符合指导原则的要求。 １ 实验材料和方法 １．１仪器和试药仪器：ＳＰＤ一１０Ａ（岛津）、ＬＣ一１０ＡＴ（岛 表１质控样本测定结果 津）、ＨＷ一２０００色谱工作站。试药：加替沙星片（浙江尖峰 有限公司）、加替沙星分散片（江苏亚邦爱普森药业有限公 司）。甲醇（色谱醇，ＭＥＲＣＫ）、乙腈（色谱醇，ＴＥＤＩＡ）、高氯 酸、磷酸均为分析纯。 １．２色谱条件色谱柱：依利特Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＢＤＳ Ｃ１８柱（４．６ ｅｍ ｘ １５０ｒａｍ，５ ｍ）。流动相：乙腈：０．０１ｔｏｏｌ／１磷酸二氢钾 （用磷酸调ｐＨ至３．０）（２５：７５）。流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ。检测波 长：２９３ｎｍ。 １．５ 研究对象与样本设计本实验选择２０例健康男性志 愿者（经血常规、尿常规、电解质、心电图、肝功能等检查和病 史询问证实为健康者），中位年龄２４岁，身高（１７４．２０ ４．３２） 取血浆０．５ｍｌ置１ｍｌ具塞离心管 ｅｍ，体重（６５．９５±５．８３）ｋｇ。志愿者自愿参加该试验并在受 试前签署知情同意书。随机分成两组，一组给予参比制剂， 一１．３血浆样品的预处理中，加入内标１５ １（４０￣ｇ／ｍｌ的盐酸环丙沙星）和１０％高氯 酸溶液０．２ｍｌ，涡旋３０ｓ，离心（１４ ０００ｒ／ｍｉｎ）１０ｍｉｎ，取上清液 １００￣１进样。 组给予受试制剂，进行自身对照交叉试验，给药间隔为一 周。禁食１２ｈ后，早晨７：００时空腹口服加替沙星胶囊 ４００ｍｇ，用温开水２５０ｍｌ送服，２小时后方可饮水，并于服药４ ４】３ １．４体内分析方法的评价 ２０１２年２月 第２４卷下半月第４期 中国民康医学 ＭｅｄｉｃＭ ＪｏｕｍＭ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｐｅｏｐｌｅ Ｓ ＨｅＭｔｈ Ｆｅｂ．２０１２ ＶｏＩ．２４ ＳＨＭ Ｎｏ．４ 小时后进统一标准餐。于服药前（０）和服药后０．２５、０．５、 ０．７５、１、１．５、２、３、５、８、１２、２４、３６小时自肘静脉取血３ｍｌ，于肝 素抗凝试管中离心分离血浆，置一２０％冷冻保存供血药浓度 测定。服药７天后，交叉给药，重复上述试验。受试者服药 后避免剧烈运动，血样采集在监护室中进行，由有经验的医 生进行监护，试验期间禁烟酒和含咖啡因的饮料，受试前两 周及试验期间禁服任何其它药物。 参数和进行方差分析，结果表明试验制剂间及交叉周期间 无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。进一步进行双单侧ｔ检验，结果 判定加替沙星分散片与参比药物加替沙星片具有生物等效 性。 表２单剂量口服４００ｍｇ加替沙星分散片与 参比加替沙星片的药代动力学参数 １．６数据处理与分析健康志愿者体内各时间点的血药浓 度采用药动学参数，用中国药科大学药代研究中心编制的药 动学程序处理进行自动模型判别，曲线下面积（ＡＵＣ）由梯形 法计算，并以参比制剂加替沙星片的ＡＵＣ为参照，求算加替 沙星分散片的相对生物利用度。选择该统计分析程序，对主 要药代动力学参数Ｃ…和Ａｕｃ 进行方差分析和双单侧ｔ检 验（显著性水平＝０．０５）。 ２结果 ２．１ 色谱行为和典型谱图建立了测定人血浆中加替沙星 分散片浓度的ＨＰＬＣ测定方法，血浆中杂质不干扰样品的测 定，线性关系良好（Ｙ＝１．１３８９ｘ＋０．０２１２，相关系数ｒ＝ ０．９９９８），加替沙星分散片的平均绝对回收率大于８０％，最低 检测浓度为０．０２５￣ｇ／ｍｌ；低、中、高三个浓度下的日内和日间 变异系数均小于１５％，结果显示本品在本实验条件下分离度 良好，ＨＰＬＣ法完全可用于本品的实验分析。 ２．２人体药代动力学２０例受试者单剂量含服４００ｍｇ加 替沙星分散片与参比加替沙星片的平均血药浓度一时间曲 线见图１，数据通过拟合程序计算得到结果，加替沙星分散片 体内动态过程呈一级吸收的一级房室开放模型，其主要药代 动力学参数见表２。 图１ ２０例健康志愿者单剂量含Ｍａ４００ｍｇ加替沙星片和 单剂量￣４００ｍｇ加替沙星分散片３６小时平均血药浓度一时间曲线 ２．３相对生物利用度 本品加替沙星分散片曲线下面积 （ＡＵＣ）由梯形法计算，以加替沙星片曲线下面积（ＡＵＣ）作为 对比。根据公式求得其相对利用度为９３．４％±２３．０％。 ２．４生物等效性评价应用中国药科大学药代研究中心编 制的药动学程序处理软件对加替沙星分散片的体内药动学 ４１４ ３讨论 目前，加替沙星分散片生物利用度研究的方法主要是高 效液相色谱法…，本实验对文献报道的多种流动相进行对 比，最终确定为乙腈０．０１ｍｏｌ／Ｌ，磷酸二氢钾（用磷酸调ｐＨ 至３．０）（２５：７５）检测波长为２９３ｎｍ，流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ，作为色 谱条件，在此条件下，样品与杂质有较好的分离度。文献报 道，在样品测定项目上用的是内标法，色谱条件流动相加三 乙胺，但在试验中发现加三乙胺很难平衡 Ｊ，故尝试不加三 乙胺，结果杂质无干扰，且峰无拖尾，线性关系良好，所以采 用内标法不加三乙胺进行测定。另外，试验中多次调节ｐＨ， 发现ｐＨ ３．０时，调节有机相与缓冲盐的比例，保留时间有明 显变化，说明在该ｐＨ条件下药物较敏感。 在血浆样品预处理方法上，参照文献采用加１０％高氯酸 做沉淀剂，沉淀法提取后上清液澄清可以直接进样，且内源 性物质无干扰。检测灵敏度能够满足体内药物浓度监测。 ２０例志愿者随机交叉服用加替沙星分散片与加替沙星 片４００ｍｇ，其体内的吸收、分布、代谢、排泄与国内外相关文 献报道基本一致。分散片提高口服吸收率，延长血浆消除半 衰期，结果显示加替沙星分散片的Ｋａ数值较大，ｔ 明显缩 短，且加替沙星分散片的治疗速度明显快于加替沙星片，在 临床上值得推广。 参考文献 ［１］ 丁学琨．加替沙星片剂人体药物动力学和生物等效性研究 ［Ｊ］．中国药学，２００５，３（６）：１２． ［２］孙礼琴．ＨＰＬＣ法测定血浆中加替沙星的浓度［Ｊ］．抗感染药 学，２００４，１（２）：６４—６５． ［３］ 史爱欣．加替沙星血药浓度ＨＰＬＣ测定方法研究［Ｊ］．药物分析 杂志，２００３，２３（２）：１２５—１２７． （收稿日期：２０１２—０１—０４）
