植物单细胞培养

1、植物的单细胞培养

在适宜的条件下，一个来自已分化的根、茎、叶等组织的细胞，经过离体培养可以发育成同其亲本一样的完整植株。

植物组织培养技术的重要理论基础是植物细胞的全能性。

2、植物单细胞培养的意义

（1）有利于观察细胞个体的、分化、生长和繁殖情况；

（2） 有利于获得纯细胞系；

（3） 有利于进行细胞特性、细胞生长规律、细胞代谢过程及其调节控制规律等方面的研究；

（4）有利于生物转化和天然化合物的生产。

3、植物单细胞的分离技术

（1）从外植体直接分离单细胞

外植体经过切割、捣碎或酶解，然后经过一定孔径的不锈钢筛网过滤，得到细胞悬

浮液。

（2）从愈伤组织分离单细胞

将愈伤组织进行振荡培养，使其分散成小的细胞团或单细胞，然后用适当孔径的不锈钢筛网过滤，除去大的细胞团和残渣，离心除去小的残渣，得到单细胞悬浮液。

（3）通过原生质体再生法获得单细胞

外植体、愈伤组织或细胞团经过纤维素酶和果胶酶等的作用，除去细胞壁而获得原生质体。

4、植物单细胞的培养方法

（1）平板培养法

单细胞悬浮液的制备（外植体、愈伤组织、原生质体）→ 单细胞悬浮液的密度调整（调整后的密度为植板细胞密度的2倍） → 固体培养基的配制 → 单细胞悬浮液与固体培养基等量混合 → 暗培养（培养期间对细胞频繁的镜检会对细胞的生长产生有害作用，应尽量减少镜检次数） → 继代培养（选取生长良好的由单细胞形成的细胞团，可以获得由单细胞形成的细胞系）。

特点：

操作简便，分离单细胞系较容易，但培养细胞气体交换不畅。

（2）看护培养法

将生长活跃的愈伤组织接种在固体培养基上→在愈伤组织块上方放置一片面积为1cm2的无菌滤纸，滤纸下方紧贴愈伤组织→借助于微型移液管从细胞悬浮液中提取适量单细胞悬浮液 ，然后接种在无菌滤纸上面→将在滤纸上由单细胞形成的细胞团转移到新鲜的固体培养基中进行继代培养，获得由单细胞形成的细胞系。

（3）微室培养法

借助于微型移液管从细胞悬浮液中提取适量单细胞悬浮液 ，置于一张无菌载片上。在这滴培养液四周与之隔一定距离加上一圈石蜡油，构成微室的”围墙”，在围墙左右两侧再各加一滴石蜡油，每滴之上置一张盖片作为微室的“支柱”→将第三张盖片架在两个“支柱”之间，构成微室的“屋顶”→单细胞悬浮液在微室中→当细胞团长到一定大小时揭掉盖片，把细胞团转移到新鲜培养基上培养。

微室培养的优点：

①有利于对细胞特性的研究

②有利于对单个细胞的生长、、分化等情况进行全程跟踪研究。