葛根素的提取及纯化新工艺研究

葛根素的提取及纯化新工艺研究

姓名：徐华东申请学位级别：硕士专业：林产化工指导教师：韦藤幼

20070501

葛根素的提取及纯化新工艺研究摘要葛裱是一种既有丰富营养，又有独特药理作用的药食两用资源，用途广泛。作为葛根的主要活性成分，葛根素以其具有改善心脑血管循环、降低心飘耗氧量，降低壶糖，防止高盘压及动脉硬化，抗肝脏毒，抗炎，祛痰，解热，提高肌体免疫力，抗菌，抗病毒等多种药理作用，还具有提高视力等功能，日益受到广泛关注，其高纯度产品在国际市场上信受青睐。本文对葛根素的提取纯化工艺进行了系统的研究，采用了冷浸一热提法和结晶一重结晶法分别进行葛根素的提取和纯化，着重研究了葛根素提取条件及结晶的条件。筛选出了较优的工艺参数，从而为葛根素的工业化生产奠定了良好的基础。研究结果表明：无论是提取工艺还是纯化工艺，与其它一些提取方法和纯化方法相比均有自己的独特之处，而且保证了相对较高的提取得率和产品纯度。本方法的创新点在于：提取过程中，采用了热的正丁醇溶液作为提取剂，可以在保证较高的提取得率的同时降低提取液中杂质的含量：纯化过程中，首先弓ｌ入了蒸发结晶，郧在传统的结晶前将提取液旋蒸浓缩到一定体积后冷却结晶，过滤可以除去大部分的大豆苷元和大豆苷及部分杂质，提高了粗浸膏的纯度，有摹ｌＪ于葛根素结晶的进行：其次是在两次结晶过程之间引入酸水解过程，此过程可以将初结晶晶体中的部分葛根素衍生物水解成葛根素，既提高了葛根素的得率，又提高了产品的纯度。关键词：葛根素提取纯化ⅡＴＨＥＮＥＷＥＸＴＲＡＣＴＩＯＮＡＮＤＳＥＰＡＲＡＴＩｏＮＴＥＣＨＮＩＣＳｏＦＰＵＥＲＡＲＩＡＡＢＳＴＲＡＣＴＰｕｅｒａｒｉａｉｓｐｅｏｐｌｅｗｉｔｈｕｓｅｓ．Ａｓａａｋｉｎｄｏｆｒｅｓｏｕｒｃｅｆｏｒｄｒｕｇａｎｄｆｏｏｄｓｉｎｃｅｉｔｃａｌｌｐｒｏｖｉｄｅｌｏｔｏｆｎｕｔｒｉｍｅｎｔｓａｎｄｐａｒｔｉｃｕｌａｒｍｅｄｉｃａｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｓ。Ｉｔｈａｓｍａｎｙｔｈｅｍａｉｎａｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｏｆｐｕｅｒａｒｉａ，ｐｕｅｒａｒｉｎｉｓｐａｉｄｃａｎｍｏｒｅａｔｔｅｎｔｉｏｎｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｌｙｆｏｒｉｔｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｂｌｏｏｄｖｅｓｓｅｌｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎｏｆｈｅａｒｔａｎｄｂｒａｉｎ，ｒｅｄｕｃｅｔｈｅｏｘｙｇｅｎｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎｃａｐａｃｉｔｙｏｆｃａｒｄｉａｃｍｕｓｃｌｅ，ｒｅｄｕｃｅｔｈｅｂｌｏｏｄｓｕｇａｒ，ｐｒｅｖｅｎｔｔｈｅｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎａｎｄａｒｔｅｒｙｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，ｔｈｅｌｉｖｅｒｐｏｉｓｏｎ，ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，ｒｅｍｏｖｉｎｇｔｈｅｐｈｌｅｇｍ，ａｌｌａｙｏｒｇａｎｉｓｍａｆｅｖｅｒ，ｅｎｈａｎｃｅｓｔｈｅｏｎｉｍｍｕｎｉｔｙ，ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ，ａｎｔｉｖｉｒｕｓａｎｄＳＯｍａｎｙｋｉｎｄｓｏｆｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｏｎ，ａｎｄｉｔａｌｓｏｈａｓｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｅｎｈａｎｃｉｎｇｖｉｓｉｏｎ．Ｔｈｅｐｕｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｓｖｅｒｙｐｏｐｕｌａｒｉｎｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌｍａｒｋｅｔ．Ｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒ，ｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｓｅｐａｒａｔｉｏｎｔｅｃｈｎｉｃｓｏｆｐｕｅｒａｒｉｎｗａｓｓｔｕｄｉｅｄｂｙｔｈｅｎｕｍｂｅｒｓ．Ａｄｏｐｔｉｎｇｑｕｅｎｃｈ－ｈｏｔｐｒｏｇｒｅｓｓｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｅｘｔｒａｃｔｏｎａｎｄｒｉｍｅ—ａｆｒｅｓｈｒｉｍｅａｎｄｓｅｐａｒａｔｉｏｎｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｐｕｅｒａｒｉｎ．Ｅｍｐｈａｔｉｃａｌｌｙｓｔｕｄｉｅｄｔｈｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｏｆｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｓｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｐｕｅｒａｒｉｎ．Ｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｒｅｓｕｌｍｏｐｅｒａｔｉｏｎｐａｒａｍｅｔｅｒｓｗｅｒｅｃｈｏｏｓｅｄａｎｄｃｏｎｓｅｑｕｅｎｔｌｙｅｓｔａｂｌｉｓｈｔｈｅｆａｖｏｒａｂｌｅｂａｓｅｆｏｒｔｈｅｉｎｄｕｓｔｒｉａｌｉｚｅｄｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｐｕｅｒａｒｉｎ．Ｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｉｎｄｉｃａｔｅｔｈａｔｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｓｏｍｅｏｔｈｅｒｍｅｔｈｏｄｓｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｓｅｐａｒａｔｉｏｎ，ｂｏｔｈｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｅｃｈｎｉｃｓｔｒａｉｔｓ，ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅｉｔｓｔｉｌｌｐｒｏｄｕｃｔ．ａｎｄｔｈｅｓｅｐａｒａｔｉｏｎｔｅｃｈｎｉｃｓｈａｖｅｉｔｓｉｎｉｍｉｔａｂｌｅｒｅｌａｔｉｖｅｕｐｐｅｒｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｒａｔｉｏａｎｄｐｕｒｉｔｙｏｆｅｎｓｕｒｅｓＩｌｌＴｈｅｉｎｎｏｖａｔｉｎｇｐｏｉｎｔｏｆｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄｌｉｅｓ：Ｉｎｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｐｒｏｃｅｓｓ，ｕｓｅｄｔｈｅｈｅａｔｅｄｎ—ｂｕｔｙｌａｌｃｏｈｏｌａｓｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｓｏｌｖｅｎｔ，ｉｔｃａｎｅｎｓｕｒｅｔｈｅｕｐｐｅｒｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｒａｔｉｏａｎｄｒｅｄｕｃｅｔｈｅｉｍｐｕｒｉｔｙｃｏｎｔｅｎｔｉｎｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｓｏｌｕｔｉｏｎ．Ｉｎｔｈｅｓｅｐａｒａｔｉｎｇｐｒｏｃｅｓｓ，ｆｉｒｓｔｌｙｉｍｐｏｒｔｉｎｇｅｖａｐｏｒａｔｉｏｎｒｉｍｅ，ｎａｍｅｌｙｒｏｔａｔｉｏｎｅｖａｐｏｒａｔｉｏｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｓｏｌｕｔｉｏｎｔｏｓｏｍｅｖｏｌｕｍｅａｎｄｃｏｏｌｉｎｇｒｉｍｅｂｅｆｏｒｅｔｈｅｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｒｉｍｅ，ｉｔｓｏｍｅｉｍｐｕｒｉｔｙｂｙｆｉｌｔｒａｔｉｏｎａｎｄｃａｎｒｅｍｏｖｅｔｈｅｍｏｓｔｄａｉｄｚｅｉｎ，ｄａｉｄｚｉｎａｎｄｔｈｅｐｕｒｉｔｙｏｆｔｈｅｗｉｄｅｅｘｔｒａｃｔｉｖｅ，ａｎｄｉｍｐｒｏｖｅｂｅｕｓｅｆｕｌｆｏｒｔｈｅｐｕｅｒａｒｉａｒｉｍｅ．Ｓｅｃｏｎｄｌｙ，ｉｍｐｏｒｔｉｎｇｈｙｄｒｏｌｙｚｉｎｇｐｒｏｃｅｓｓｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｒｉｍｅａｎｄｒｉｍｅ—ａｆｒｅｓｈ，ｉｔＣａｎｈｙｄｒｏｌｙｚｅｔｈｅｎｏｔｒａｍｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｐｕｅｒａｒｉａｉｎｔｏｐｕｅｒａｒｉａ，ｉｔＣａｎｏｎｌｙｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｒａｔｉｏｏｆｐｕｅｒａｒｉａ，ｂｕｔｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｐｕｒｉｔｙｏｆｐｒｏｄｕｃｔ．ＫＥＹＷＯＲＤＳ：ｐｕｅｒａｒｉａ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ｓｅｐａｒａｔｉｏｎＩＶ广西大学学位论文原创性声明和使用授权说明原刨性声明本人声明：所里交的学位论文是在导师指导下完成的，研究工作所取得的成果和相关知识产权属广西大学所有，本人保证不以其它单位为第一署名单位发表或使用本论文的研究内容。除已注明部分外，论文中不包含其他人已经发表过的研究成果，也不包含本人为获得其它学位而使用过的内容。对本文的研究工作提供过重要帮助的个人和集体，均已在论文中明确说明并致谢。论文作者签名：撩华东枷０７年夕月绣日学位论文使用授权说明本人完全了解广西大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本：学校有权保存学位论文的印刷本和电子版，并提供目录检索与阅览服务；学校可以采用影印、缩印、数字化或其它复制手段保存论文；在不以赢利为目的的前提下，学校可以公布论文的部分或全部内容．请选择发布时间：日即时发布口解密后发布（保密论文需注明，并在解密后遵守此规定）黼～罐华东一名：嘲册ｆ肋日ｊ纠霞素的扭耳皈纯化新工’艺研究第一章前言１．１葛根及其制品葛根始载于《神农本草经》，列为中品，原名葛，历代本草均有记载。今为常用生药，亦被国家卫生部列入“既是食品又是药品”名录。葛根味甘辛、性平，具有降低血管阻力，改善心、脑血液循环，减慢心率，降低心肌耗氧量等药理作用。葛根为豆科植物（Ｐ鹏馅ｒｉａｌｏｂａｔａ（Ｗｉｌｄ．）Ｏｈｗｉ）的块根，又叫甘葛、粉葛、黄葛根、葛麻茹【ｌＪ。野葛根中国大部分地区有产，主产于湖南、河南、广东、浙江、四川【２ｌ。葛根素为中药葛根主要有效成分，此外还有其它异黄酮类化合物：大豆甙元、芒柄花素、大豆甙、４，７－二葡萄糖大豆甙、３’．甲氧基葛根素、７．木糖．葛根素、４’，６’．二乙酰基．葛根素等【３’４１，但以葛根素的含量最高。近代药理研究证明，葛根中所含有效成分葛根总黄酮（以葛根素为代表），具有改善心脑血管循环、降低心肌耗氧量，降低血糖，防止高血压及动脉硬化，抗肝脏毒，抗炎，祛痰，解热，提高肌体免疫力，抗菌，抗病毒等多种药理作用，还具有提高视力等功甜”。故可制成治疗心脑血管系统疾病的药品【６】，目前市场上常见的此类药品主要有愈风宁心片、脑得生片、葛根素葡萄糖注射液等【７’８】。１．２本课题研究的背景、目的和意义近年来，中医药在国际上越来越受到重视，应用也越来越广泛。世界上也有越来越多的人愿意接受传统中医药，特别是中医药的治疗和保健。但是，中药成分复杂，各成分理化性质千差万别。而西方评价中药有效性时，完全按照西药的方法和方式进行评价，对药品中成分和数量进行严格的控制。这给中药进入国际市场设置了很大的障碍，成为中药进一步发展的“瓶颈”，而分离中药的有效成ｊ『书噱的提取反￥讹新工’艺研究分制成单体药有助于生产试剂化、现代化，为中药打开国际市场，提高中医药产品在国际市场上的竞争力和影响力创造有利条件。葛根素为近年来国际市场上的畅销产品，其药理作用显著，是生产用于治疗心脑血管疾病的药品及保健品的重要原料药，市场应用前景广阔。我国葛根资源非常丰富，因此，研究开发从葛根中分离纯化得到高纯度葛根素的优化工艺路线，不仅有利于充分合理的利用葛根资源，通过中药材深加工增加产品的附加值，使药材加工企业和药农增收，而且对实现中药现代化，使中医药产品走向世界具有非常重要的意义。目前，对于葛根中异黄酮的提取方法以及其中各有效成分的进一步分离研究有文献报道，但尚不完善。对于总黄酮中葛根素的分离提纯亦有报道：国内西北大学【９】、陕西镇坪制药厂【ｌｏｌ、山东省医学科学院药物研究所ｔｉｔｌｚｌ、安徽农业大学生物研究中心【１３１、陕西中医学院、陕西师范大学化学系等单位在葛根素提取方面分别做了不同的研究，并分别提出一些专利生产技术或适合工业化大生产的工艺路线。日本在此方面也有一定的研究。葛根素与大豆甙元、大豆甙等成分的工业化有效分离已有报道，主要是采用大孔树脂吸附等方法，利用中极性吸附树脂独特的特性，带有具有孤电子对的羰基官能团，羰基是良好的氢键受体，虽然吸附容量较低，但能与具有酚羟基的黄酮（葛根素）形成氢键，从而大大提高了吸附选择性。使产品的纯度可以达到９５％以上，但是由于其回收率较低，所用设备及材料比较昂贵，不利于实行大规模的工业化生产。本课题着重要解决的问题就是从低污染、综合利用葛根资源的角度，研究一种新的提取纯化葛根素的方法，低成本高效分离纯化葛根素，为工业化生产高纯度的葛根素提供具有指导和参考意义的工艺条件。１．３本课题研究的内容为了获得更好的提取效果，同时又更容易实现工业生产，本文在课题小组前面所做的研究的方法基础上进行了改进，做了以下工作：（１）采用解吸一丁醇热提半连续提取工艺：由于葛根是淀粉高含量中药，２广西大掣阀墨ｊ＾皂ｉ丈ｉ纠鼻紊的萤Ｕ峨蚓他新工艺研岛传统的乙醇回流提取后，需回收乙醇，然后采用丁醇萃取，除去大部分热水溶物，直接采用丁酵提取收率较低。本文采用解吸．丁酵热提两步法１１４，”ｌ提取。首先用一定浓度的乙醇在室温下解吸一段时间，然后迅速加入一定温度的正丁醇进行提取。该方法不但具有一般两步内部沸腾提取法的快速、收率高等特点，而且省去了乙酵回收工序，简化了生产工艺流程。（２）提取液分步浓缩结晶分离大豆苷及其衍生物：在丁醇提取液中，除了含有葛根异黄酮外，还含有大豆苷及其衍生物等杂质，不分离这些杂质直接进行结晶，会大大降低结晶的收率。本文利用这类杂质与葛根异黄酮在丁醇中溶解度的不同，在浓缩丁醇提取液的过程中，采用分步蒸发浓缩结晶，首先分离出大豆苷及其衍生物等杂质，最后得到纯度较高的葛根异黄酮粗品。经液相色谱分析，先结晶得到的大豆苷及其衍生物不含葛根素，可以作为另一种有价值的产品。（３）底物．双柱法结晶提纯葛根素：先用甲酵溶解葛根素粗品，然后与醋酸同时慢慢加入具有一定量的醋酸底物中进行双柱入法结晶，该法不但可以得到较高的产品纯度和得率，而且克服了传统结晶方法产品得率低、结晶时间长的问题及超声波结晶法的产品纯度低的问题。本研究的创新点是：一、提取过程中采用弱极性的正丁醇作为提取剂。采用正丁醇作为提取剂，既解决了高温水提时淀粉易糊化的问题，又克服了乙醇提取后提取液中杂质的含量高ｉ且需用正丁醇对乙醇提取粗浸膏的水溶解物进行反复萃取，从而造成了有机溶剂的浪费，增加了实验步骤等问题，且由于采用的是半连续提取，减少了正丁醇的用量。二、纯化过程中，先进行蒸发结晶。即在浓缩时，不是将提取液直接蒸干，而是浓缩到一定体积后冷却过滤，除去了大部分的大豆苷元、大豆瞢及部分杂质，提高了粗浸膏的纯度，有利于后面的结晶工艺。三、采用双柱法结晶。采用此法结晶，既可以得到较高的产品纯度，又可以保证较高的产品得率。而传统的结晶方法，虽然所得产品纯度较高，但产品的得率却相对较低；超声波结晶等现代结晶方法．虽然有较高的产品得率，但产品纯度却相对较低。四、在初结晶和重结晶之间多了一步酸水解的过程，且是在初结晶后进行的酸水解，不仅得到了较高纯度的产品，而且得率也有相当程度的提高。文献中也有关于酸水解的报道【１６】，但是是在初结晶之前进行的，由于粗浸膏纯度较低，酸水解效果不是很理想，且盐酸用量也要比本法多，成本有所浪费。由于，’西夫掣钡ｊ哟文，研基案的提耳吸蚓ｍ新工艺研究本法具备以上的优点，从而为实现以后的工业化生产奠定了良好的基础。４广西大掣嘎ｔ啼｝文葛根紊的撮耳“宅鲥批新工艺研究第二章文献综述２．１葛根素的提取方法随着葛根素的药理作用的研究深入。葛根素的提取也越来越受到人们的重视。．目前葛根素主要是从葛根中提取，但是葛根中含有大量的淀粉，在提取过程中应尽量避免使淀粉糊化，其提取方法主要有以下几种：２．１．１葛根素的传统提取方法溶剂提取法：溶剂提取法的原理是根据各种成分在溶剂中的溶解性质，选用对活性成分溶解度大，对不需要溶出成分溶解度小的溶剂，而将有效成分从药材组织内溶解出来的方法。当溶剂加到原料（需适当粉碎）中时，溶剂由于扩散、渗透作用逐渐通过细胞壁透入到细胞内，溶解了可溶性物质，而造成细胞内外的浓度差，于是细胞内的浓溶液不断向外扩散，溶剂又不断进入药材组织细胞中，如此多次往返，直至细胞内外溶液浓度达到动态平衡时，将此饱和溶液滤出，继续多次加入新溶剂，就可以把所需要的成分近于完全溶出或大部分溶出。用于葛根素的提取和纯化的溶剂主要有乙醇、甲醇、丁醇等。２．１．１．１浸渍法浸溃法属于静态提取方法，是常温或在加热的条件下浸泡药材，使其所含的有效成分被浸出的方法，是一种简便最常用的浸出方法。除特别规定外，浸渍法在常温下进行，如此制得的产品，在不低于浸渍温度条件下能较好的保持其澄明度；操作简单易行，但所需时间较长，溶剂用量大，出液系数较高，有效成分浸出率低。另外浸溃状态下固液间通常呈静止状态，溶剂的利用率较低，有效成分浸出不完全。即使采用重浸渍法，加强搅拌，或促使溶剂循环，也只能提高浸出效果，并不能直接制得高浓度的制剂。由于所需时间较长，不宜用水做溶剂，通常用不同浓度的乙醇或白酒，故浸渍过程应密闭，防止溶剂的挥发损失。浸溃ｉＦ根素的提取及—０化新工艺研究法广泛应用于酊剂，酒剂的生产，适于黏性药物、尤其适用于热敏性中药物料。在应用浸溃法提取葛根中的葛根黄酮时，７０％，９０％醇冷浸法提取葛根中的异黄酮去取得了较好的结剿埘。用适当浓度的溶剂（乙醇、甲酵、水）在特定的温度下浸泡一定时间，残渣重复浸泡几次，过滤，滤液回收醇，浓缩后就得到含葛根异黄酎的浸膏。浸渍法又分冷浸与温浸。该法生产周期较长、溶剂用量较大，干浸膏得率、异黄酮含量介于回流法与渗漉法之间。浸渍法一般是同时提取葛根淀粉和异黄酮时才用【１８’１牡ｏ】。２．１．１．２渗漉法渗漉法是往药材粗粉中不断添加漫出溶剂使其渗过药粉，从下端出口流出浸出液的一种浸出方法。渗漉时，溶剂渗入药材的细胞中溶解大量的可溶性物质之后，浓度增高，比重增大而向下移动，上层的漫出溶剂或稀浸液置换其位置，造成良好的浓度差，使扩教较好的自然进行，故浸出效果优于浸渍法，提取也较完全，而且省去了分离浸出液的时间和操作。用一定浓度、一定量的醇溶液对葛根药材进行渗漉，渗漉液回收醇，浓缩后就得到含葛根异黄酮的浸膏。醇渗漉法的生产周期长、溶剂用量大、干浸膏的得率不高，但浸膏中的异黄酮含量高、操作简便【１例。２．１．１．３回流法回流法是以乙醇等易挥发的有机溶剂为提取溶媒，对浸出液加热蒸馏，其中挥发性溶剂馏出后又被冷凝，重新回到浸出器中继续参与浸提过程，循环进行，直至有效成分浸提完全，此即回流提取法，回流提取法分为两种，一种是回流热浸法：是在应用乙醇等易挥发的有机溶剂进行加热提取有效成分时，为了减少溶剂的消耗，提高提取效率而采用的提取方法：另一种是循环回流冷浸法：采用少量的溶媒，通过连续循环回流进行提取，使药物的有效成分充分提取的提取方法（即索式提取法）。采用乙醇作为提取剂主要是由于葛根中含有丰富的淀粉，高温蒸煮过程中容易糊化，故而选择极性相对较弱的乙醇作为提取剂。工艺为称取一定量的葛根粉末，加入适量一定浓度的乙醇溶液，加热回流提取２ｈ，过滤，滤渣再用等量的乙醇溶液回流提取２ｈ口”，过滤，合并两次的滤液得到葛根素提取液。该法的优点就是工艺简单，操作容易；而缺点是提取过程耗时太长，有机溶剂乙醇用量过多，且葛根素的提取得率不是很高。６广曩ｒ大掌硕ｔ螗文ｉｆ根紊的提取覆爿批新工艺研，Ｂ李佑稷【纠等采用乙醇浸提法提取水溶性葛根素。选择浸提时间、温度、浸提料液比以及提取次数作为单因素，采用梯度实验、对比实验、数量统计及通过进一步正交实验，得到葛根水溶性葛根素浸提工艺的优选因素组合：浸提时间４ｈ，温度９０＂Ｃ，料液比１９：４５ｍＬ及浸提３次。徐新剐等［２３１探讨了乙醇浓度、用量、提取时阖及提取次数对葛根素提取的影响，其提取工艺为体积分数７０％７，酵提取。每次７倍量。加热提取３次，ｌｈ／次，本工艺提出葛根素质量分数为２．６５％，浸出转移率达９８％。张彤洲等以多指标综合评分法迸行数据分析，优选工艺条件，得出葛根乙醇提取的最佳条件为：体积分数８０％７．醇提取２次，第１次１２倍量乙醇，提取１ｈ，第２次１０倍量乙醇提取３０ｍｉｎ。２．１．２葛根素的现代提取方法随着现代化工业工程技术的迅猛发展，一些现代高新技术不断被应用到植物有效成分提取生产中来，大大促进了植物提取产业的发展，使天然产物提取业技术水平上升了一个新的高度。下面就对几种研究与应用较多、有发展前景的提取新技术作一下介绍。２．１．２．１微波辅助萃取法微波辅助萃取是颇具发展潜力的一种新的萃取技术【２５胡。世界上微波技术应用于有机化合物萃取的第一篇文章发表于１９８６年。微波萃取是高频电磁波穿透萃取媒质，到达被萃取物料的内部，微波能迅速转化为热能使细胞内部温度快速上升，当细胞内部压力超过细胞壁承受能力，细胞破裂，细胞内有效成分自由流出，在较低的温度下溶解于萃取媒质再通过进一步过滤和分离，便获得萃取物料。在微波辐射作用下被萃取物料成分加速向萃取溶剂界面扩散，从而使萃取速率提高数倍，同时还降低了萃取温度，最大限度保证萃取的质量。微波萃取效率高、纯度高、能耗小、操作费用低，符合环境保护要求［２７，２８，２９１。可广泛用于中草药、香料、保健食品、食品、化妆品、茶饮料、调味料、果胶、高粘度壳聚耱等行业。微波萃取已列为我国二十一世纪食品加工和中药制药现代化推广技术之一。（１）王娟等ｐｏ］采用均匀设计法对微波辅助萃取葛根中有效成分的提取工艺进行考察，结果表明在采用体积分数９５％乙醇作为溶剂时，优选出的最佳工艺条件为：微波功率２５５Ｗ、原料粉碎度４０目、微波辐射时间１５ｒａｉｎ、固液比为１９，浸泡时ｉ『根素的瑚Ｕ拜覆纯化新工艺研究间１ｈ。同时结果表明增加溶剂用量、提高原料粉碎度、延长原料浸泡时间将有利于葛根中有效成分的提取。ＨａｓｗｅＵ和Ｈｏｗａｒｔｈ对固相分离过程中非热微波效应的研究，证明了微波在提取分离中存在着这种特殊作用。（２）沈岚等【３ｌＪ探索了微波萃取对不同形态结构植物及含不同极性的有效成分的提取规律，结果，微波提取法对大黄中不同极性蒽醌类成分的提取选择性并不明显，而同一温度下，根茎类中药大黄中大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的提取率明显高于种子类中药决明子中相同成分的提取率。提示本法对植物的提取率仅与提取溶剂的极性有关，而与被提取成分的极性关系不大；对不同质地的植物其提取率的差异较大。另有报道，采用本法辅助提取金银花中的绿原酸和桂皮中的肉桂醛【３２－３５１等，均取得较好提取率。微波对某些化合物有一定的降解作用，所以提取时应严格控制提取时间，不可长时间提取。对于富含淀粉的药材，采用本法提取易产生糊化现象。在应用时还需考察微波加热的均匀度，选择合理的提取工艺条件。另外，微波提取法设备投资费用较高，产品的成本费用也较高，同时对人体，尤其对眼睛有影响，应用时需注意微波的泄漏和防护【３２】。２．１．２．２超声萃取固－液萃取在食品化工中通常被称为提取，即用合适的溶剂从物料中提取有用成分，一般采用热处理或机械搅拌来加强该过程，已发现应用功率超声能显著强化和改善提取过程【３６】。超声的微扰效应增大了溶剂进入提取物细胞的渗透性，加强了传质过程，超声的另一作用是超声空化产生的强大剪切力能使植物细胞壁破裂，使细胞容易释放出内含物。有效的质量传递和细胞破裂被证明是强化提取的主要原因。如在索氏提取中加入超声波提取葵花籽中的总脂肪，提取时间减少了一半，提取得率提高了近５０％［３ｚｔ。同时也可以直接利用超声波，从玉米中提取木聚糖，同传统碱水提法相比，提取得率提高了４０％［３ｓ１。张尊听等１３９］采用超声萃取提取葛根异黄酮的实验结果表明：以甲醇为溶剂超声萃取３０ｒａｉｎ提取野葛根异黄酮成分效果最佳，提取率为２０．６％，总黄酮质量分数为５０．０３％；其结果也表明超声萃取不会影响活性成分的化学结构，而且采用超声萃取法从野葛根中提取异黄酮活性成分具有省时、节约能源、总黄酮提取率和产品纯度高的优点。同样赵丽娟等Ｍ对超声波和回流法两种不同提取葛根中总黄酮方法进行了广西大掌硕ｊ嘞文｜ｉ相‘紊的茸Ｕ峨纯化新工艺研究比较，试验结果表明，超声波提取方法较回流法提取率高，超声提取总黄酮的最佳操作条件是体积分数为９５％乙醇，时间２ｓｍｉｎ，温度５℃，提取３次。但是由于超声波的作用，致使在提取过程中提取大量的淀粉，从而阻止了葛根中有效成分的析出，故提取得率较低，而且导致产品纯度的降低。２．１．２．３酶法提取酶法是通过加入某些特定的酶，使包裹于植物细胞内的有效成分转移到溶剂中。例如大部分植物的细胞壁是由纤维素构成，纤维素则是１３．Ｄ．葡萄糖和１，４－Ｂ．葡萄耱苷键连结，用纤维素酶酶解可破坏量．葡萄糖键，进恧有利于有效成分的提取，如采用半纤维素酶和果胶酶提取桔子、甜西红柿和胡萝卜中的类胡萝ｈ素，同传统法比较能显著提高提取时间和得率【４”。施英英等［４２１用该法提取过葛根渣中的异黄酮。某些植物用酶法提取时收率明显提高，具有较大的应用潜力，但该技术同时也存在着一定的局限性。酶法提取对实验条件要求较高，为使酶发挥最大作用，需先通过实验确定最佳温度、ＰＨ值及最佳提取时问等。还需要考虑酶的浓度、底物的浓度、抑制剂、激动剂等对提取物的影响，以及酶对植物中其它成分、药效和毒性的影响。２．１．３减压内部沸鹱法提取葛摄素减压内部沸腾法ｆ４３】具体过程为植物组织被少量低沸点解吸剂润湿后，在减压操作条件下，加入温度高于解吸剂沸点的提取溶剂，使渗透到植物组织内部的解吸剂来不及扩散就被加热沸腾汽化，与现有的提取技术相比，该方法的优点是：提取时间缩短５倍以上，通过减压可实现６０＂Ｃ以下快速提取，使提取液中淀粉、多糖、蛋白质、树脂等杂质含量降低１５％以上，对热敏性有效成分提取率可提高ｌＯ％以上。前一届的郝瑞然曾用该方法提取过葛根素。由于葛根中含有大量的淀粉，高温提取时，淀粉容易糊化，从而导致葛根素提取得率的降低和产品纯度的降低。经过反复的实验得出结论：在最佳的提取工艺条件下，减压内部沸腾法比传统方法提取温度低了３５℃；提取时间比传统方法减少１４倍；提取得率高于传统方法；所得的粗浸囊中葛根素含量也比传统方法离；杂质提取率比传统乙醇提取减少１１．１％；乙醇用量也明显少于传统方法。用该法提取葛根素由于是在减压低温条９ｉｆ掇素的扭霹Ｌ覆纯化新工艺研究件下进行，且提取时间较短，葛根中的淀粉不易糊化，故而提取得率较高，产品中杂质含量也较低，并且提高了生产效率。但由于该方法是在减压条件下进行的，操作压力较难控制。２．２葛根素的纯化方法用各种方法提取葛根所得的提取液是包含诸多成分的混合物，要想得到相对较纯的葛根素，尚需经过反复的分离精制和纯化处理。但是提取液一般体积较大，所含成分浓度较低，因此需对提取液进行浓缩，提高浓度，以利于分离精制。浓缩可通过蒸发或蒸馏来完成，具体的方法有常压蒸发、减压蒸馏、薄膜蒸发、反渗透法、超滤法等。浓缩过程中应注意尽量避免不必要的损失，防止热敏佳成分被破坏。浓缩后的提取液进一步进行去除杂质、分离和精制。在分离过程中，可综合运用多种方法，使相互融合，以达到分离目的。常用方法有以下几种。２．２．１系统溶剂分离法系统溶剂分离法是早年研究天然产物有效成分的一种最主要的方法。按极性由小到大的顺序选用不同极性的溶剂组成溶剂系统，依次提取分离提取液中各种不同成分，使各溶解度有差异的成分得到分离。如选用石油醚、己烷适合于提取分离强亲脂性成分如挥发油、脂肪油、蜡、脂溶性色素、甾醇类和某些苷元等；选用乙醚、氯仿适合于提取分离亲脂性成分如树脂、生物碱、苷元、醛、酮、醇、醌、有机酸和某些苷类等；选用氯仿．乙醇（２：１）适合于提取分离中等极性成分中较小极性的某些苷类如强心苷等；选用醋酸乙酯适合于提取分离中等极性成分中极性居中的某些苷类如黄酮苷等；选用正丁酵适合于提取分离中等极性成分中极性较大的某些苷类如皂苷、葸醌苷等；选用丙酮、乙醇、甲醇适合于提取分离亲水性成分如极性很大的苷、糖类、氨基酸、某些生物碱盐等；选用水适合于提取分离强亲水性成分如蛋白质、粘液质、果胶、糖类、氨基酸和无机盐类等。通过分离不同极性部分，有利于进一步结合临床或药理试验，确定有效部位，再进行逐步划分追踪，最后分离得到单体。目前在研究不明成分时仍最为常用。但这种方法操作手续繁琐，相同成分可能会分散在不同的提取部位，不易于浓集，影１０，’西大掣哪ｔ啼鲁丈葛根素的提率．覆蚓他新工艺研究响药理试验的灵敏性，且较大地了微量成分、结构性质相似成分的分离纯化。张尊听等㈣采用有机溶剂萃取结合酸水解的方法。直接从野葛根中分离葛根素，其产率为１．１５％，葛根素含量为９７．６％。２．２．２萃取法萃取法是分离天然药物化学成分的常用方法。其基本原理是利用混合物中各种成分在两相互不相溶的溶剂中分配系数的差异而达到分离的目的。根据葛根素结构的特点，选择正丁酵作为萃取剂，利用葛根素在水和正丁酵中溶解度的差异，经过反复萃取，最终达到纯化目的。左春耀等以干葛根片为原料，采用乙醇提取并浓缩成浸膏状，用正丁醇溶解并经萃取，萃取液经三氧化二铝柱脱色、减压浓缩、过滤、干燥、溶解结晶得精品，其产品纯度达９７％以上。２．２．３沉淀法沉淀法是指在天然药物的提取液中加入某些试剂，使产生沉淀或降低溶解性而从溶液中析出，从而获得有效成分或去除杂质的方法。采用沉淀法分离化合物。若生成沉淀的是有效成分，则要求反应必须可逆；若沉淀物为杂质，则可为不可逆反应。常用的沉淀法有下列几种：（一）酸碱沉淀法酸碱沉淀法是利用某些成分能在酸（或碱）中溶解，继而又在碱（或酸）中生成沉淀的性质达到分离的方法。这种沉淀反应是可逆的，可使有效成分与其他杂质分离。如难溶于水的游离生物碱遇酸生成生物碱盐而溶于水，再加碱碱化，又能重新游离使水溶性降低而形成沉淀析出；一些不溶于水的具有内酯结构的化合物遇碱可开环生成羧酸盐而溶于水，再加酸酸化，内酯环重新环合后从溶液中沉淀析出，与其他成分分离：一些具有酚羟基而又难溶于水的黄酮类化合物，加碱水液可成盐溶解，经酸化后又可游离析出沉淀，借以提纯，去除杂质。（二）试剂产生沉淀的性质，或利用某些成分在不同溶剂中溶解度的差异，通过加入特定试剂或溶剂，使生成沉淀，与其他成分分离。如生物碱沉淀试剂能使生物碱类生成沉淀自酸性溶液中析出；雷氏铵盐可与水溶性季铵碱生成难溶于广西大掌司Ｅｊ隆文ｊｆ根素的提取ａ＃眦新工艺研究水的生物碱雷氏铵盐沉淀析出；胆甾醇能与甾体皂苷生成沉淀；明胶、蛋白质溶液能沉淀鞣质等。又如在含糖或蛋白质的水提液中分次加入乙醇，使含醇量逐步达到８０％以上，则难溶于乙醇的成分如蛋白质、淀粉、树胶、粘液质等被逐级沉淀析出；同样地，在乙醇提取液中加入一定量的水，也会使树脂、叶绿素等水溶性较低的混合物沉淀出来；在含有皂苷的乙醇溶液中逐滴加入数倍量的丙酮或乙醚或丙酮．乙醚的混合液，可逐段沉淀出溶解度不同的皂苷。（三）铅盐沉淀法铅盐沉淀法是最常用的沉淀法之一。利用中性醋酸铅和碱式醋酸铅在水或稀醇溶液中能与许多天然药物化学成分生成难溶性的铅盐或铅络合物沉淀，使有效成分与杂质分离。中性醋酸铅能与具有羧基、邻二酚羟基的酸性或酚性物质生成不溶性铅盐，因此可用于沉淀天然药物成分中的有机酸、蛋白质、氨基酸、粘液质、鞣质、树脂、酸性皂苷、部分黄酮苷、葸醌苷、香豆素苷和某些色素等等。碱式醋酸铅沉淀范围更广，除上述物质外，还能沉淀某些大分子中性成分如中性皂营、糖类，某些异黄酮及其苷，某些碱性较弱的生物碱等。铅盐沉淀法即可使杂质生成铅盐沉淀除去，也可以使有效成分生成铅盐沉淀，经过脱铅处理后，再进一步分离获得。２．２．４络合萃取技术基于可逆络合反应的萃取分离方法被称为络合萃取，在络合萃取工艺过程中，溶液中待分离溶质与含有络合剂的萃取剂相接触，络合剂与待分离溶质反应形成络合物，并使其转移至萃取相内，进行逆向反应时溶质得以回收，萃取剂循环使用。络合萃取对于极性有机物稀溶液分离具有高效性和高选择性，近年来国内外络合萃取的研究开发工作异常活跃，在有机磺酸、有机羧酸、有机胺、酚类及带有两性官能团等有机物废水的治理方面显示良好的发展前景，处理了以前传统方法无法解决的难题。贺云等【４５】利用Ｆｅ”能够和葛根素生成可溶性络合物的性质建立了一种从中药野葛根中萃取葛根素的新型分离方法。以甲醇冷浸从野葛根中提取葛根总黄酮，将其进行水解、中和，再给水解葛根总黄酮中加入ＦｅＣｌ３使葛根素与Ｆｅ３＋络合溶解，过滤除去其它不溶性物质，用盐酸解聚Ｆｅ３＋葛根素络合物，则得葛根素粗品，将其重结晶可得葛根素。同时，利用分光光度法确定了Ｆｅ３＋葛根素络合物解聚的最佳酸厂。西大掣Ｈ甄士论文ｊｆ书崃的提坪皈纯化新工艺研ｊ宅度。该方法从葛根中提取葛根素收率为１．２％，纯度为９６．５％。潘见等㈣通过对葛根素与Ｃｕ２＋、Ｚｎ２＋、ｃｉ卜、Ｆｃ３＋、Ａ１３＋及Ｍ矿等金属离子之间相互作用，表明在２０＂Ｃ、ｐＨ值６～７的条件下，Ｃａ２＋、Ｃｕ２＋及Ｚｎ２＋能和葛根素形成较稳定的络合物，其中，Ｃｕ２＋和葛根素形成配位化合物的稳定性最高。试验结果也表明在以正丁醇为萃取剂萃取葛根素时．加入金属盐类能提高葛根素的纯度和萃取率。２．２．５柱层析法（１）大孔树脂吸附法大孔吸附树脂是一种具有多孔立体结构人工合成的聚合物吸附剂，是在离子交换剂和其它吸附剂应用基础上发展起来的一类新型树脂，是依靠它和吸附的分子（吸附质）之间的范德华引力，通过它巨大的比表面进行物理吸附而工作的。在实际应用中对一些与其骨架结构相近的分子如芳香族环状化合物尤具很强的吸附能力。李剑君Ｍ等对中性氧化铝、硅胶及大孔吸附树脂进行筛选的基础上，认为大孔吸附树脂是分离葛根素较为理想的吸附剂。通过等温及动力学实验，得出大孔吸附树脂中ＡＢ．８型树脂是分离葛根素的较优吸附剂。通过正交实验，确定了以ＡＢ．８型树脂作为吸附剂的最佳工艺条件为高径比为１０：１的层析柱在３０＂Ｃ时以２．０ｍＬ／ｍｉｎ的流速洗脱，葛根素的收率９３．７５％。向纪明等ｆ４８】用正交实验探讨了从葛根中提取分离葛根素的工艺，得到吸附法精制葛根素的最佳工艺是用Ｄ１０１大孔吸附树脂作为富集剂，用粗提浸膏７倍量的大孔树脂吸附，用１２倍量的体积分数７０％７，醇水溶液作为洗脱剂，可以较完全地将葛根素洗脱下来。欧来良等嗍选用非极性ＡＤ．１、弱极性ＡＤ．２、中极性（氢键受体型）ＡＤ．３、强极性吸附树脂柱（经预处理）ＡＤ．４对葛根素进行分离，得出对于葛根素的分离，中极性吸附树脂效果较好。因为中极性吸附树脂具有较低的比表面积，但带有具有孤电子对的羰基官能团，羰基是良好的氢键受体，虽然吸附容量较低，但能与具有酚羟基的黄酮（葛根素）形成氢键，从而大大提高了吸附选择性。在我国，有许多专利侈ｏｊｌｔＳ２］也都采用了大孔吸附树脂的方法进行葛根素的分离纯化。ｊｆ根素的提取及￥Ｅ化新工艺研究（２）聚酰胺柱层析法聚酰胺桂层析是利用聚酰胺能和被分离极性物质之间形残氢键，这种氢键的强弱就决定了被分离物与聚酰胺薄膜之间吸附能力的大小。赵玉ｉｌｌ［５３１采用醇溶媒提取的方法，在醇溶媒提取过程中，实施超声波穿透处理，将醇溶媒提取后的过滤提取液蒸馏回收醇溶媒，再进行聚酰胺柱层析分离，将点样后收集的洗脱液进行浓缩，再经过净化处理得葛根素产品．此外，氧化铝柱和硅胶柱【４Ｌ５２】也经常用于葛根素的纯化中。２．２．６结晶与重结晶法通常情况下大多数天然药物化学成分在常温下是固体物质，具有结晶的通性。当物质能够形成结晶，贝ｌｊ代表其纯度达到了相当程度。结晶法是分离纯化固体成分的重要方法之一，可获得较纯的单体，有利于对天然药物化学成分进行鉴定和分子结构的研究。结晶法利用混合物中各种成分在溶剂中溶解度的差别，使所需成分以结晶状态析出，达到分离精制的目的。将物质由非结晶状通过处理得到结晶状物的过程称为结晶。此时形成的晶体一般还含有较多的杂质，为粗结晶，还需用适当的溶剂处理纯化为较纯的结晶状物质，此过程成为重结晶。选择合适的溶剂是结晶法的关键。理想的溶剂必须具备以下条件：（１）不与结晶物质发生化学反应。（２）对结晶物质的溶解度随温度不同有显著差异，热时溶解度大，冷时溶解度小。（３）对可能存在的杂质溶解度非常大或非常小＜即冷热均溶或均不溶），前一种情况可使杂质留在母液中，后一种情况可趁热滤过以除去，（４）沸点适中，不宜过高或过低，过低则易挥发损失，过高则不易去除。（５）能给出较好的结晶。结晶的条件以选择合适的溶剂最为重要，同时也应注意其他的条件，包括杂质的去除、有效成分的含量、溶液的浓度及合适的温度、时间等。杂质的存在会阻碍或延缓结晶的形成，可通过选择适当的溶剂，或用活性炭除去有色杂质，或采用氧化铝、硅胶、硅藻土等吸附色谱法使杂质尽可能除去。一般情况下，有效成分在混合物中的含量越高越容易结晶，若含量很低难以在单一溶剂中获得结广西大擘顷ｊ螗文葛根素的撮坪吸捌批审旺艺研究晶，可改用混合溶剂或制备成衍生物促使结晶析出。通常溶液的浓度高有利于结翕的形成，但若溶液浓度过高溶液的秸度和杂质的浓度也会相应增葛带来干扰，反而不易结晶；浓度较低的溶液可放置使溶剂自然挥发至适宜浓度而析出结晶。结晶的温度一般以低温较为有利，若室温条件下难以析晶的成分，可放冰箱或阴凉处促使结晶析出。此外，长时闻放置傻结晶缓慢析出，所得结晶往往较快速析出的结晶大而纯。目前，用于葛根素的结晶方法主要有：传统的结晶方法，超声波辅助结晶，电磁诱导结晶等。谢慧睨酬等采用电磁诱导对葛根素进行结晶，透过磁场强化诱导后葛根素结晶速度加快，生成均匀且排列规则的晶体。但是每种结晶方法都有其优缺点。传统的结晶方法结晶所得晶体纯度较高，但其结晶耗时较长，葛根素晶体得率较低；超声波辅助结晶虽然可以缩短结晶时间，保证较高的葛根素晶体得率，但是超声波辅助结晶所得晶体纯度较低；而电磁诱导结晶，虽然在较短的时间内结晶得到纯度较高的葛根素晶体，但是其葛根素晶体得率较低，不足４０％。葛根素药理活性强，药效明确，毒副作用少，ｌ临床应用广泛，是一种很有发展前途的药物。对于其提取纯化的方法还有许多，贺湘凌等【５５】利用９．环糊精键合固定相分离纯化葛根素，王丽杰【５６ｌ用金属纳米膜分离综合提取葛根淀粉、黄酮类药物的工艺方法都是新的提取纯化方法。随着葛根素的开发研究不断深入和科学技术的发展，将会有更多新的方法出现。但是目前的许多方法还存在缺陷，例如许多方法使用了大量的有机溶剂：有些方法放弃了葛根淀粉的利用，这些都造成了资源的浪费和环境的污染，同时经济效益也较低。今后提取纯化方法应当是向着无污染、综合利用葛根资源和降低成本的方向发展。广西大尊嘎ｊ螗文ｊｆ椰ｌ素的撮耳汲纯化新工艺研究第三章实验部分研究３．１药品及仪器３．１．１药材野生葛根产于陕西西安３．１．２试剂葛根素标准品纯度９５．６％（中国药品生物制品检定所）、９５％乙醇分析纯（广东汕头市西陇化工厂）、正丁醇分析纯（广东汕头市西陇化工厂）、盐酸分析纯（广东汕头市西陇化工厂），冰醋酸分析纯（广东汕头市西陇化工厂）、甲醇分析纯（广东汕头市西陇化工厂）、甲醇一级色谱纯（天津市四友生物医学技术有限公司）、无水碳酸钠分析纯（广东光华化学厂有限公司）３．１．３实验仪器集热式恒温加热磁力搅拌器（巩义市英峪予华仪器厂）、精密恒温浴槽（成都仪器厂）、不锈钢数显电热鼓风干燥箱（上海浦东荣丰科学仪器有限公司）、循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）、电子天平（美国双杰兄弟有限公司）、紫外分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）、旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）、Ａｇｉｌｅｎｔ１１００高效液相色谱仪（美捷仑公司）、ＺＫＦ０３５电热真空干燥箱（上海实验仪器厂有限公司）３．２实验步骤图３．１为葛根异黄酮的提取浓缩工艺。先用乙酵溶液对葛根粉末中的有效成分进行解吸，为了保证其中的有效成分能够得到充分解吸，可将乙醇慢慢滴加到葛根粉末中，解吸一段时间后，用一定温度的正丁醇溶液连续提取，提取液经过旋蒸浓缩，到一定体积后，经过缓慢搅拌冷却结晶，大豆苷元和大豆苷结晶析出．滤液经过蒸干后得到葛根素粗浸膏的纯度明显提高。１６广西大掌硬ｊ螗文ｊ『相Ｕ胁抽Ｕ＃乙＆爿胞新工艺研究粗浸膏图３－１提取浓缩工艺流程图大豆苷元和大豆苷Ｆｉｇ．３－１Ｔｈｅｆｌｏｗｄ∞ｎｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｔｅｃｈｎｉｃｓ冰醋酸滤液图３－２结晶酸解工艺流程图Ｆｉｇ．３－２Ｔｈｅｆｌｏｗｃｈａｒｔｏｆｒｉｍｅａｎｄｈｙｏａ－ｏｌｙｚｅｔｅｃｈｎｉｃｓ图３－２是葛根异黄酮的结晶提纯工艺。将葛根素租浸膏用一定量的甲醇在一定的温度下进行溶解，溶解充分后再配合一定量的冰醋酸在一定温度下，经过搅广西大掌硕士潞文葛相Ｌ紊的提取及纯化新工艺研究拌进行双柱法结晶得到初结晶晶体。初结晶晶体再用盐酸溶液在一定温度下经过搅拌进行酸水解，水解一定的时间后再用碳酸钠溶液进行中和，将ＰＨ值调至中性，过滤得到滤饼经过干燥得到酸水解产物，酸水解产物再经过双柱法结晶得到最终的葛根素晶体。３．２．１解吸．热提法提取得率：望墼壅主蔓堡耋塑鱼墨葛根粉末的质量。１００％解吸一热提法就是在室温下先用一定量的解吸剂对要提取物料中的有效成分进行解吸，解吸一段时间后，再用一定量的高温提取剂进行提取。具体实验操作为：称取５０．００９葛根粉末置于烧杯中，用一定量一定浓度的乙醇溶液解吸一段时间，然后将解吸后的葛根粉末放入布氏漏斗，连续加入一定量某个温度的正丁醇溶液，让其以一定速度流过物料，流出液为提取液，取样分析。针对乙醇用量，乙醇浓度，解吸时间，正丁醇用量，正丁醇浓度，提取温度等因素迸行探索实验，以找到最佳提取条件。３．２．２传统酵提法（１）第一次提取：称去葛根粉末５０．００９置于圆底烧瓶中，加入７０％乙醇７５０ｍＬ，沸腾回流条件下提取１．５ｈ。然后减压抽滤，滤渣进行第二次提取。（２）第二次提取：将第一次的滤渣置于圆底烧瓶中，加入７０％乙醇７５０ｍＬ，在沸腾回流条件下再提取１．５ｈ。（３）合并两次提取液，取样分析。（４）滤液在真空条件下旋转蒸干，然后放入真空干燥箱干燥得粗浸膏，取样分析。３．２．３提取液的分步浓缩浓缩比＝婴嚆蒜笋取相同体积的提取液１０００ｍＬ五份，在减压条件下旋转蒸发浓缩，分别浓缩ａｅ＇－西，洋硕士论文｜ｆ穰素的扼耳皈捌许匕新工。艺研究到４００ｍＬ、３００ｒａＬ、２００ｒａＬ、ｌＯＯｍＬ，浓缩液冷却到室温后过滤，再将滤液蒸干；另外一份直接蒸干，将蒸干后所得物料放入真空干燥箱干燥，得到葛根素粗浸膏。取样分析。３．２．４结晶方法的筛选（１）目前已有的方法：称取葛根素粗品５．００９，用５０ｍＬ冰醋酸作为溶剂，分别采用加热、超声波及两者结合等方式进行结晶，得到葛根素初结晶体，取样分析。具体实验操作为：加热溶解冷却结晶直接在９０＂Ｃ下加热溶解２。５ｈ，然后在室温条件下冷却１ｈ结晶：超声波辅助结晶在超声波条件下振荡４０ｍｉｎ，然后在室温条件下冷却１ｈ结晶：加热后超声波是先在９０℃加热１ｈ后，再超声波振荡４０ｍｉｎ，然后在室温条件下冷却ｌｈ结晶；超声波后加热是先超声波振荡４０ｍｅｎ，再在９０℃加热ｌｈ后，然后在室温条件下冷却ｌｈ结晶；最后过滤得到滤饼，在真空条件下干燥后得到晶体，取样分析。（２）双柱法：根据文献【５７】介绍的双注一水热法制备高分散纳米氢氧化镁的工艺研究，提出了底物一双柱法结晶。称取葛根素粗品５．００９置于三角烧瓶中，加入一定量的甲醇使粗品在５０。Ｃ下刚好溶解得到租品的甲醇溶液，测的所用甲醇体积为５ｍＬ，将溶液移入滴液漏斗中，量取等体积的冰醋酸放入另一滴液漏斗中，将盛有一定体积冰醋酸的三口烧瓶固定在５０℃的水浴中，将甲酵溶液和冰醋酸慢慢滴加入三口烧瓶中，同时用恒速搅拌器慢慢进行搅拌，２ｈ后水浴停止加热，慢慢冷却至室温，过滤得滤饼，将滤饼用一定体积的冰醋酸加以洗涤，过滤得到滤饼，将滤饼放入真空干燥箱内干燥２４ｈ，得到葛根素初结晶品，取样分析。３．２．５酸水解称取葛根素初结晶品５．００９，加入盐酸溶液进行搅拌水解，冷却后用Ｉｍｏｌ／Ｌ的碳酸钠溶液中和，调节ｐＨ值至６．０左右。减压过滤，滤饼放如真空干燥箱内干燥得水解产物，取样分析。分别对盐酸浓度、盐酸用量、酸水解温度及酸水解时间因素进行探讨。广西大掣嘎＿±啼鲁文３．２．６重结晶ｊ『根素的：１１１ｔ．耳皈—眦新工艺研究称取酸水解产物５．００９置于三角烧瓶中，加入一定量的甲醇使酸水解产物在５０＂０下刚好溶解得到水解产物的甲醇溶液，测的所用甲醇体积为５ｍＬ，将溶液移入滴液漏斗中，量取等体积的冰醋酸放入另一滴液漏斗中，将盛有一定体积冰醋酸的三口烧瓶固定在５０＂０的水浴中，将甲醇溶液和冰醋酸慢慢滴加入－－－ｔ２烧瓶中，同时用恒速搅拌器慢慢进行搅拌，２ｈ后水浴停止加热，慢慢冷却至室温，过滤得滤饼，将滤饼用一定体积的乙酸乙酯加以洗涤。过滤得到滤饼。将滤饼放入真空干燥箱内干燥２４ｈ，得到葛根素产品。３．３分析方法中药中有效成分含量的分析测定方法有很多种，一般分析方法有紫外分光光度法（ｔｌＶ）、高效液相色谱（ＨＰＬＣ），薄层层析法（ＴＬＣ）、高效毛细管电泳（ＨＰＣＥ）等。在下面的实验中，主要采用紫外分光光度法和高效液相色谱法。３．３．１最大吸收峰的检测精确称取真空干燥后的葛根素标准品Ｏ．００４０９，用７０％的乙醇溶液溶解，待完全溶解后转移至２５ｍＬ容量瓶中，用７０％的乙醇溶液定容至刻度，制得浓度为Ｏ．１６０９／Ｌ的标准溶液。精密吸取Ｏ．３ｍＬ溶液放入１０ｍＬ比色管中，用７０％的乙醇溶液定容至１０ｍＬ摇匀，用７０％的乙醇溶液作为参比，用紫外分光光度计在１９０ｎｍ－．．４００ｎｍ之间扫峰。波长与对应的吸光度之间的关系如图３．３：扫峰后发现，在２５１ｒｉｍ处有最大吸收峰，因而采用２５Ｉｎｔｏ为检测波长。厂。西夫掣嘎ｔ略文，ｆ根素的提耳皈纯化新工艺研究图３－３葛根素最走吸收峰扫描图ｒｉｇ．３－３Ｔｈｅｐｕｒｅｒａｒｉａｏｆｂｉｇｇｅｓｔａｂｓｏｒｐｔｉｏｎａｐｉｃｅｓｓｃ越ｔｈｅｄｉａｇｒａｍ３．３．２标准曲线的剃备３．３．２．１紫外分光先度计上的标准曲线制备用３．３．１中所配制的标准溶液，摇匀后分别吸取０．１ｍＬ、０．２ｍＬ、０．３ｍＬ、０，４ｍＬ、Ｏ．５ｍＬ、Ｏ．６ｍＬ放入ｌＯｍＬ比色管中，各用７０％乙醇溶液定容至刻度，以７０％乙醇溶液作为参比溶液，在２５１ｒｉｍ用紫外分光光度计测其吸光光度。根据数据制作标准曲线如图３－４。、广西大掣嘎ｊ—《？文ｊｒ枫素的提取反蚓嗽新工艺研究０．７０．６０．５∞０．４．口‘０．３０．２０．１Ｏ０１２３４５６７８９１０Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｐｕｅｒａｒｉａ（１１ｇ／ｍＬ）图３．４葛根素标准曲线的测定Ｆｉｇ．３－４Ｔｈｅｓｔａｎｄａｒｄｃｕｒｖｅｏｆｐｕｒｅｒａｒｉａ以吸光度Ａ与浓度Ｃ做标准曲线回归运算，得回归方程：Ａ＝Ｏ．０６６５Ｃ＋０．０１１８，Ｒ２＝０．９９９，线型范围：１．６＂．－９．６１．ｔｇ／ｍＬ。３．３．２．２高效液相色谱仪上的标准曲线制备精确称取真空干燥后的葛根素标准品Ｏ．０１０５９放入２０．００ｍＬ的容量瓶，用甲醇（色谱纯）溶解并定容至刻度。在色谱条件；色谱柱：ＺｏｒｂａｘＳＢ．Ｃ１８柱（１５０＇４．６ｍｍ，５韭ｍ）；流速：０．７ｍＬ／ｍｉｎ；流动相：甲醇：水＝３０：７０（Ｖ～）；检测波长：２５０ｒｉｍ；分别迸样量２ｕＬ、４斗Ｌ、６ｕＬ、８ｕＬ、１０ｕＬ。根据数据制作标准曲线如图３．５。葛橇囊的提耳ＬＡ纯化新工’毒研究∞∞∞∞∞∞∞∞的∞００２４６ｓａｍｐｌｅ８ｌＯ１２Ｔｈｅｖｏｌｕｍｅｏｆｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（ｐＬ）图３－５葛根素标准曲线的测定Ｆｉｇ．３・５衄ｓｔａｒｔｅｄ３．３．３提取液有效成分含量的测定一ｃｕｒｖｅｏｆｐｕｒｅｆａｒｉａ将两次提取的葛根索提取液混合均匀，取ｌｍＬ放入１００ｍＬ容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度后摇匀。取ｌｍＬ稀释后的溶液于２５ｍＬ比色管中，用浓度为７０％的乙醇定容至刻度。用７０％的乙醇溶液作为参比，在２５１ｒａｎ处测定其吸光度。３．３．４葛根素晶体纯度的测定称取０．０１∞ｇ左右的葛根素晶体放入２５ｍＬ的容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度。进样２ｐＬ，在３．３．２．２中的色谱条件下进行高效液相色谱分析。３．３．５分析误差较验（一）操作稳定性试验取５０．００９葛根粉末，加入８０ｍＬ６０％的乙醇溶液于２５℃下解吸２０ｍｉｎ，再加入９０℃６００ｍＬ含有１２０Ｌ蒸馏水的正丁醇溶液提取，减压抽滤。滤渣再加入９Ｄ℃６００ｍＬ含有１２０ｍＬ蒸馏水的正丁酵溶液提取，减压抽滤。合并两次提取液，精密吸取ｌｍＬ用蒸馏水定容至１００ｍＬ，吸取ｌｍＬ用７０％的乙醇溶液定容至刻度。重复以上所有操作４次，其ＲｓＤ％为Ｄ．４６％（ｎ＝４）。相对标准偏差（ＲｓＤ％）≤１％，说明实验操作稳定，实验方案可行。ｊ纠置案的提取覆翻玳新工ｔ．研究（二）仪器精密度试验以３ｔ３．３中的提取分析方法制得四份试样，于２５１ｎｍ处每份连续铡定五次，其ＲＳＤ％为０．２１％、０．３４％、０．２７％、０．３２％（舻５）。相对标准偏差（ＲＳＤ％）≤ｌ％，说明仪器的精密度良好。（－－－）检测液稳定性试验以３．３．３的提取分析方法制得三份试样，于ｌｈ内测定液在密封避光、封闭见光、不封闭见光三种条件下的稳定性，其ＲＳＤ％为：０．５２％、０．５２％、Ｏ．３４％（ｎ＝４）。其相对标准偏差（ＲｓＤ％）≤１‰说明葛根素检测液，在１ｈ内吸光度的变化≤ｌ％，即说明葛根素在水溶液中短时间内是稳定的。（四）加样回收率的测定取３．３．３制得的检测液２４ｍＬ，分别装入１２支比色管中，每４支加入不同用量的葛根素标准溶液（葛根素１７５ｍｇ／Ｌ）（Ｏ．５ｍＬ、ｌｍＬ、１．５ｍＬ），进行吸光度测定，其结果如下：为１０１．２％（ＲＳＤ％＝１．１％、ｎ＝５、加Ｏ．５ｍＬ标准溶液）、１００．７％（ＲＳＤ％＝０．９４％、ｎ＝５、加ｌｍＬ标准溶液）和１０１．４％（ＲＳＤ％＝１．６％、ｎ＝５、加１．５ｍＬ标准溶液）。结果表明：葛根使用解吸一热提法提取葛根素，稀释后直接比色测定，葛根素能定量回收。，时置素的提霹嘎—珂匕新工艺研究第四章实验结果与讨论４．１提取过程４．１．１解吸剂浓度对得率的影响图４．１是以８０ｍＬ不同浓度的乙醇溶液作为解吸剂，在２５℃解吸２０ｍｍ，用９０＂Ｃ含水量为２０％的正丁醇溶液６００ｍＬ分两等份提取，取样分析得解吸剂浓度对葛根素提取得率的影响图。１１．４１１．２ｌｌｌＯ．８１０．６ｌＯ．４４０５０６０７０８０Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｒｅｌｅａｓｉｎｇｓｏｌｖｅｎｔ（％）图４－１解吸剩浓度对葛根素提取得率的影响Ｆｉｇ．４・１Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ０１１ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｙｉｅｌｄｏｆｐｕｅｒａｒｉｎ从图４．１可以看出，随着解吸剂乙醇浓度的增加，葛根索的提取得率在乙醇浓度为６０％时出现了一个最大值，随后又逐渐下降。解吸剂（乙醇）浓度为６０％时葛根素的提取得率达到最大。其主要原因是乙醇溶液润湿原料的过程可以看成是有效成分被解吸的过程，不同浓度的乙醇溶液透过细胞壁和解吸有效物质的能力是不同的，解吸剂极性与解吸剂的浓度有一个对应关系，所以解吸剂浓度可以ｊｒ撮素的提取及纯化新工艺研究影响有效成分的提取得率。由该图可以得到最佳的解吸剂浓度为６０％。４．１．２解吸剂用量对得率的影响图４－２是解吸剂用量对葛根素提取得率的影响。实验条件为葛根素粉末５０．ＯＯｇ用浓度为６０％的乙醇溶液在２５＂Ｃ下解吸２０ｍｉｎ，用９０＂Ｃ含水量为２００／，的正丁醇溶液６００ｍＬ分两等份提取，取样分析得到解吸剂用量对葛根素提取得率的影响图。１１．４１．２１１Ｏ．８Ｏ．６Ｏ．４０．２１０７０８０９０ｉ００Ｔｈｅｖｏｌｕｍｅｏｆｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ（ｍＬ）图４－２解吸剂用量对葛根素提取得率的影响Ｆｉｇ．４－２Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｖｏｌｕｍｅｏｆｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｏｎｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｙｉｅｌｄｏｆｐｕｅｒａｒｉｎ由图４－２可以看到；随着解吸剂乙醇用量的增加，葛根素的提取得率逐渐达到最大值，当解吸剂乙醇用量达到８０ｍＬ后，葛根素的提取得率基本上不再增加。经过分析原因是：当乙醇用量少时，对物料的润湿不完全，有效成分不能被充分解吸，所以提取得率较低；当乙醇用量达到最佳值后（料液比为ｌ／１．６），解吸剂对物料中的有效成分已经完全被解吸，再增加乙醇的用量，只会增加有机溶剂的消耗量，葛根素的提取得率也不会再增加。由该图可以得到最佳的解吸剂用量为８０ｍＬ。４．１．３解吸时间对得率的影响图４．３是用８０ｍＬ浓度为６０％的乙醇溶液在２５℃下解吸不同的时间，然后用葛根素的提年吸纠眦新工艺研究９０＂Ｃ含水量２０％的正丁醇溶液６００ｒａＬ分两等份提取。取样分析得到解吸时间对葛根素提取得率的影响凰。１１．４ｌＬ２水口．【ｏ州１１１０．８１０．６１０．４Ｓａｔｕｒａｔｉｎｇｔｉｍｅ（ｒａｉｎ）图４・３解吸时间对葛根紊提取得率的影响Ｆｉｇ．４－３Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｓａｔｕｒａｔｉｎｇｔｉｍｅｏｎｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｙｉｅｌｄｏｆｐｕｅｒａｒｉｎ由图４．３可以看出，随着解吸时间的增加，葛根素的提取得率也逐渐增大直至达到最大值。当解吸时间达到２０ｒａｉｎ后，随着解吸时间的增加，葛根素的提取率不再有变化。主要原因是当解吸时间较短时，进入物料细胞内部的解吸剂乙醇量较少，以至物料中的有效成分未被充分解吸，因而提取得率较低，当解吸时间达到２０ｍｉｎ后，物料中的有效成分已经解吸完全，提取得率达到最大，再增加解吸时间，葛根素的提取得率也不会再增加。由该图可以得到最佳的解吸时间为２０ｍｉｎ。４．１．４提取剂缀或对得率的彰喃图４４提取剂组成对葛根素提取得率的影响。实验条件为葛根粉末５０．ｏｏｇ，用８０ｍＬ浓度为６０％的乙醇在２５℃下解吸２０ｒａｉｎ，周６００ｎｌＬ９０℃的正丁醇溶液分两次提取，从图４－４中我们可以看到，随着提取剂中水量的增加，葛根素的提取得率也逐渐增大，直到达到最大提取得率。纯的正丁醇由于粘度较大，不容易渗透到物料内部，有效成分不能很好的被萃取出来，在纯的正丁醇中加入蒸馏水后，不仅减小了提取液的粘度，提高了提取得率，而且由于加入了一定量的蒸馏广西犬掌司ｔｊ叶蚨葛相Ｌ素的提耳Ｌ．扎纯化新工艺研究水，即可以减少正丁醇的用量，又降低了提取液的沸点，使浓缩过程在相对较低的温度条件下进行，从而节省一定的经济成本。由该图可以得到提取荆中的最佳含水量为２０％。１１．４ＸＶｌｌ“１０．８Ｏ§１０．２９．８０５１０１５２０Ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｗａｔｅｒ（％）图４－４提取剂组成对葛根素提取得率的影响Ｆｉｇ．４－４Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｃｏｍｐｏｓｅｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｓｏｌｖｅｎｔｏｎｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｙｉｅｌｄｏｆｐｕｅｒａｆｉｎ４．１．５提取剂用壁对得率的影响图４－５葛根在解吸剂乙醇浓度为６０％、用量为８０ｍＬ、解吸时间为２０ｒａｉｎ（２５℃）、用不同用量的９０＂Ｃ提取剂（正丁醇的水溶液）提取。取样分析得到提取剂用量对葛根素提取得率的影响图。广叠ｒ大擘啊曩ｔ螗文童ｆ枫素的提昂吸蚓弭匕新工艺研究ｔ１．６１１．２１０．８１０．４４００５００６００７００８００Ｔｈｅｖｏｌｕｌｉｌｅｏｆｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｓｏｌｖｅｎｔ（功Ｌ）图４－５提取剂用量对葛根素提取得年的影响Ｆｉｇ．４・５Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｖｏｌｕｍｅｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｓｏｌｖｅｎｔｏｌｌｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｙｉｅｌｄｏｆｐｕｅｒａｒｉｎ由图４．５可以看出，随着提取剂用量的不断增加。葛根素的提取得率也随之．不断增加，直至达到最大值。分析原因是当提取剂用量较少时，提取剂对物料中的有效成分提取不充分；当提取剂用量达到６００ｍＬ时，物料中的有效成分被充分提取出来，之后随着提取剂用量的增加，葛根素的提取得率不再有明显的提高。而提取剂用量过多，不利于以后的分离提纯。因而可以得到最佳的提取剂用量为６００ｍＬ。４．１．６提取温度对得率酶彰噙图４－６是葛根在解吸剂乙醇浓度为６０％、用量为８０ｍＬ、解吸时间为２０ｍｉｎ（２５℃），用６００ｍＬ不同温度的提取剂（正丁醇的水溶液）提取。取样分析得到提取剂温度对葛根素提取得率的影响图。由图４－６可以看出，葛根素的提取得率在提取剂温度的不断升高过程中也随之不断增加，达到９０℃时，葛根素的提取得率达到最大值，之后提取赉』温度再升高。葛根素的提取缛率反而降低。分析原因是由于当温度较低时，物料内部不产生沸腾，解吸剂从物料细胞内逸出不完全：温度过高时，葛根中的淀粉容易糊化，将有效成分包裹在内部，从而导致了葛根素的提取得率下降。由该图可以碍到最佳的提取剂温度为９０℃，广西大掣坷ｊ瓒文ｊｉ根紊的提取ａ纯化新工艺研究１１．４１１．２葶口．【ｏ州１１１０．８１０．６１０．４７５８０８５９０Ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ（℃）图４－６提取温度对葛根素提取得率的影响Ｆ远．４・６Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｎｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｙｉｅｌｄｏｆｐｕｅｒａｒｉｎ４．２与传统方法的比较不同提取方法结果的比较表４－１不同提取方法结果比较Ｔａｂｌｅ．４－１Ｔｈｅｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｒｅｓｕｌｔｓｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｅｘ仃ａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓ表４－ｌ给出了本方法在最佳提取条件下的提取结果与传统方法和减压内部沸腾法的比较。从表中可以得到：（１）本方法提取时间比传统法和减压内部沸腾法３０广西丈掌司Ｅｊ螗文ｉＦ根素的璺Ｕ艮反爿抖匕新工翩Ｆ究要短，尤其是跟传统法比较，具有明显优势。（２）得率与减压内部沸腾法相当，但要比传统法的提取得率高。（３）本方法的有机溶剂乙酵用量要比其它两种方法少。（４）本方法所得的粗浸膏中葛根素的含量明显高于传统法和减压内部沸腾法，原因是在浓缩蒸干过程中多了一步冷却过滤过程，通过冷却过滤，可以过滤出相当量的杂质和大豆苷、大豆苷元。４．３纯化过程４．３．１提取液的浓缩６５６０２４２０—５５嘏Ｕ≮５０邑１６＝＝１２ｏ善４５Ｌ４０３５３００．６０．７０．８０．９８囹４．７浓缩比对粗浸膏的影响Ｆｉｇ．４—７ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｒａｔｉｏＯｎｔｈｅｗｉｄｅｅｘｔｒａｃｔｉｖｅ图４－７是提取液浓缩比对葛根素租浸膏纯度及得率的影响。由图可以看出，随着浓缩比的不断增加，葛根素粗浸膏的纯度也随之增加，当浓缩比达到０．９时，葛根素粗浸膏的纯度也达到了最大值，之后浓缩比再增加，粗浸膏纯度反而降低。分析原因是由于对提取液迸行了一定程度的浓缩，而且冷却过滤会过滤出一定量的大豆苷和大豆苷元，因而粗浸膏的纯度不断增加：但是当浓缩比达到０．９时，广西大掌硬士论文ｊｒ徂素的±ｔ取ａ纯化新工艺研究粗浸膏的纯度大到了最大，之后由于浓缩比过大使葛根素也随之被沉淀析出，从而导致粗浸膏的纯度降低。用不同浓缩比得到的葛根异黄酮进行初结晶碍到纯度较高的葛根素，其纯度与浓缩比的关系见图４．８，可见，其影响情况与图４．７相似。从图中还可以看出，粗浸膏的得率是随着浓缩比的增加而不断降低，当浓缩比达到０．９时，葛根素粗浸膏的得率达到最小值，之后浓缩比再增加，粗浸膏碍率也随之增加。分析原因是对提取液浓缩冷却，提取液中的大豆苷元和大豆苷会结晶析出，故而葛根素粗浸膏的得率会不断降低，当浓缩比达到０．９时，大豆苷元和大豆苷基本结晶完全，租浸膏得率不再降低。８５８ｔ一７７鼍７３一百６９ｌ６５６１５７０．６０．７０．８Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｒａｔｉｏ０，９图４－８浓缩比对葛根素晶体纯度的影响Ｆｉｇ．４－８Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｒａｔｉｏｏｎｔｈｅｐｕｒｉｔｙｏｆｐｕｅｒａｒｉａｃｒｙｓｔａｌ４．３．２结晶方法的筛选广西夫掌硕ｔ呻｝文葛根素的扼取覆蚪弭匕新工艺研究加热法超声波法加热后超声波法超声波后加热法双柱法法２ｌＯ１００１６０１６０１２０８１．７８７７．２ｌ７４．０２７５．１３８８．４４１０．Ｏ３７．６３４．０３６．６４０．４表４．２是用不同的结晶方式对葛根素粗浸膏进行结晶，过滤后将滤饼放入真空干燥箱中干燥得到葛根素晶体。由表可以看出传统加热溶解后冷却结晶所得的晶体虽然纯度较高，但是晶体得率很低，而且结晶时间长；而超声波辅助结晶所得晶体虽然晶体得率较高，结晶时间也很短，但是晶体纯度较低。原因是加热与超声波相比，加热条件下的分子运动强度相对于超声波条件下的分子运动强度较弱，有利于晶体的成长，因而加热条件下所得的葛根素晶体纯度最高。超声波结晶属于刺激结晶，浸膏的醋酸溶液处于超声波条件下，促使葛根素分子骤然加速聚集，导致新相的晶核能够迅速生成，因此超声波结晶要比加热结晶速度快，但是超声波结晶是骤变的过程，影响因素颇多，在加速葛根素结晶的形成过程中，也相应加速了部分杂质在醋酸中析出，导致的是纯度的下降。而双柱法则兼顾了两者的优点，即保证了较高的晶体锝率，又保证了较高的晶体纯度，面且结晶时间也不是太长。故而，本实验采用双柱法进行结晶。４．３．３酸水解称取５．ＯＯｇ葛根素初结晶晶体，分别进行盐酸浓度、盐酸用量、酸水解温度和酸水解时间的单因素实验研究。（１）盐酸浓度的影响图４－９是盐酸浓度对水解晶体纯度的影响。实验条件是用７５ｍＬ不同浓度的盐酸在５０。Ｃ下，在电子恒速搅拌器搅拌下酸水解４ｈ，冷却至室温后，用ＩｍｏＩ／Ｌ的Ｎａ２Ｃ０３溶液中和滴定至ｐＨ值６．７。减压过滤得滤饼，滤饼经真空干燥得到盐酸水解晶体。取样分析得到数据制成图。３３葛根素的摄取覆蚓弭Ｃ新３箔研究５１５０，、４９芑４８ｈ董４７已４６４５４４４５６７８Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃａｃｉｄ（％）图４—９盐酸浓度对水解晶体纯度的影响Ｆｉｇ．４—９ＴｈｅｅｔｔｅｅｔｏｆｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃａｃｉｄＯｎｔｈｅｐｕｒｉｔｙｏｆｃｒｙｓｔａｌ由图４－９－口－Ｉ以看出水解晶体纯度出现一个最大值。分析原因是当盐酸浓度较低时，溶液酸性较弱，对葛根素的衍生物的酸解较少，因而水解晶体纯度相对较低；而当盐酸浓度较大时，由于溶液酸性太强，致使葛根素部分被酸解，从而导致了水解晶体纯度的下降。从图中我们可以得到酸解时最佳的盐酸浓度为５％。（２）盐酸用量的影晌图４．１０是盐酸用量对水解晶体纯度的影响。分别用不同体积浓度为５％的盐酸溶液在５０。Ｃ下恒速搅拌水解４ｈ，冷却至室温后用１ｍｏｌ／Ｌ的Ｎａ２Ｃ０３调节ｐＨ值在６．７范围内。减压过滤得滤饼，滤饼经真空干燥得到盐酸水解晶体。取样分析得到盐酸用量对晶体纯度的影响图。广西大肖¨甄ｊ叶敞，『根素的提耳吸—眦新＂１－艺研究矾印的锚卯∞拍“４５５５６５７５８５９５１０５Ｔｈｅｖｏｌｕｍｅｏｆｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃａｃｉｄ（ｍＥ）图４．１Ｄ盐酸用量对术解晶体纯度的影响Ｆ噜．４・１０ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｖｏｌｍｎｅｏｆｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃａｃｉｄＯｎｔｈｅｐｕｒｉｔｙｏｆｃｒｙｓｔａｌ由图４—１０可以看出，随着盐酸溶液用量的增加．水解晶体的纯度也不断增加，当用量达到７５ｍＬ时．晶体纯度达到最大，之后，盐酸用量增加，晶体的纯度没有明显变化。主要原因是：当盐酸用量较少时，晶体中的葛根素衍生物没有得到充分水解，因而得到的水解晶体纯度较低；当盐酸溶液用量达到７５ｍＬ时．葛根素衍生物完全水解，水解晶体的纯度达到最大，之后用量再增加也没有葛根素衍生物可以水解，故而水解晶体纯度不会再增加。从该图得到酸解时最佳的盐酸用量为７５ｍＬ。（３）酸解时阃的影响图４－１１是酸水解时问对水解晶体纯度的影响。在固定其它实验条件不变的情况下，对葛根素初结晶晶体进行不同时间的酸水解．冷却后用ｌｍｏｌ／Ｌ的Ｎａ２ＣＯ】中和使溶液ｐＨ值在６．７范围内。过滤滤饼经真空干燥得到酸水解晶体，取样分析得到数据如图４．１２。由图中可以看出，当酸水解时间较短时，水解晶体纯度较低，而当酸水解时间足够长（４ｈ）时，水解晶体纯度达到最大，之后酸水解时闻增加，水解晶体纯度也不再有明显变化。原因是，水解时间较短时，晶体中的葛根素衍生物没有被酸水解完全，因而得到的水解晶体纯度较低；而酸水解４ｈ后，葛根素衍生物已经完全被酸水解，水解晶体的纯度达到最大，之后再增加酸水解时间，水解晶体的纯度不再有明显提高，从该图可以得到酸水解的最佳酸解时同广西大掌硬士论文是４ｈ。葛根素的提取度纯化新工艺研究５ｌ５０４９Ｖ４８誉毫４７屯４６４５“２３４５６Ｈｙｄｒｏｌｙｚｉｎｇｔｉｍｅｏｆｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃａｃｉｄ（ｈ）图４－１１酸水解时间对水解晶体纯度的影响Ｆｉｇ，４・１ＩＴｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｈｙｄｒｏｌｙｚｉｎｇｔｉｍｅｏｆｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃａｃｉｄｏｎｔｈｅｐｕｒｉｔｙｏｆｃｒｙｓｔａｌ（４）酸解温度的影响５０．５５０４７４６．５４０４５５０（℃）５５６０Ｈｙｄｒｏｌｙｚｉｎｇｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｆｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃａｃｉｄ图４－１２酸水解温度对水解晶体纯度的影响Ｆｉｇ．４・１２Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｈｙｄｒｏｌｙｚｉｎｇｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｆｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃａｃｉｄｏｎｔｈｅｐｕｒｉｔｙｏｆｃｒｙｓｔａｌ图４－１２是酸水解温度对水解晶体纯度的影响。在其它实验条件不变的情况下，考虑酸水解温度对水解晶体纯度的影响。由图可以看出，酸水解温度与水解广西大掌硬ｔ眙二≮葛根紊的扭取反剜嫩新工艺研究晶体纯度的关系曲线有＿个最大值。分析原因是当温度较低时，分子运动较慢，对晶体中的葛根素衍生物酸解不充分，５０℃时，葛根素衍生物被充分酸解，故而水解晶体纯度达到最大，而后，由于温度过高，使葛根素在酸存在的条件下发生了一定的改性，从而导致水解晶体纯度有所下降。由该图可以得到酸水解的最佳操作温度为５０℃。４．３．４重结晶称取水解晶体５．００９，采用双柱法进行重结晶，过滤滤饼用一定量的乙酸乙酯冲洗，过滤滤饼经真空干燥得到葛根素晶体。用同样的方法制备３份样品，取样进行｝玎，ＬＣ分析，经过计算得到下表４．３。表４．３葛根素晶体纯度Ｔａｂｌｅ．４－３Ｔｈｅｐｕｒｉｔｙｏｆｐｕｅｒａｒｉａｃｒｙｓｔａｌ由表４－３可以看出，本实验最终所得到的葛根素晶体纯度在９０％左右，纯度不是很高，分析原因是：酸水解后所得的水解产物中夹带了部分的盐，并且吸附了部分的水分，致使水解产物很难干燥，且无论是盐还是水，在紫外条件下都不产生吸收蜂。从图４．１３的液相色谱分析谱图知，除了葛根素～个峰，其它杂质并没有出峰，这说明葛根素的杂质主要是水份、盐类等杂质。广西大掌硕士论文ｊＦ根骨ｍ摄取覆纯化新工鼍＿研究■＾Ｕ＇∞・１柏・ｔ２０・’∞・∞・６０．４０－２０・／图４．１３葛根素产品的液相色谱图ｆＯ－一Ｆｉｇ．４・１３Ｔｈｅｌｉｑｕｉｄｃｂ．ｒｏｍａｔｏｇｒａｍｏｆｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｏｆｐｕｅｒａｒｉａ广西大掌司Ｅｔ哟丈ｊｒ根素的提霉皈纯化新工ｔ：研兜第五章结语本文针对在葛根素的提取中传统工艺存在的提取时间长、提取率低以及减压内部沸腾法真空条件操作难，不易工业化等问题提出了冷浸熟提法。并针对葛根素的纯化工业化生产成本较高等问题提出了蒸发结晶一初结晶一酸水解一重结晶的方法纯化葛根素，通过实验得到以下结论：（１）葛根素的最佳提取条件为：解吸莉浓度为６０％，解吸齐ｊ用量为８０ｒａｌ，解吸时间为２０ｍｉｎ，提取剂的含水量为２０％，提取剂用量为６００ｒａｌ，提取温度为９０℃。（２）通过对葛根中有效成分进行冷浸热提法提取实验结果可以看出：采用该法提取葛根中的葛根素，具有较好的效果和良好的工业化应用前景。（３）冷浸热提法与传统的提取方法相比较，大大缩短了提取过程消耗的时间。传统的提取方法要用几小时才能完成的提取过程，本方法只需要短短的几分钟就可以完成，与减压内部沸腾法的提取过程所用时间相当。（４）冷浸热提法与传统的醇提法比较。有机溶剂乙醇的用量明显降低，与减压内部沸腾法的乙醇用量相当。（５）冷浸热提法与传统的提取方法相比较，前者对葛根素的提取得率要高于传统的提取方法，而与减压内部沸腾法的提取得率相当。但是由于在旋蒸浓缩过程中加入冷却过滤的过程，使葛根素粗浸膏的纯度比传统方法和减压内部沸腾法要提高近４０％。（６）蒸发结晶一初结晶一酸水解一重结晶的方法提纯葛根素与～些现代方法及过柱等方法相比，减少了设备等的投资，更有利于实现工业化生产。（７）最佳的酸水解条件为：盐酸浓度为５％，盐酸用量为７５ｍＬ，酸水解时间为４ｈ，酸水解温度为５０℃。（８）本实验采用的双柱法结晶与传统的加热溶解冷却结晶及超声波辅助结晶相比，兼顾了两者的优点，郎有较高的晶体得率，又保证了较高的晶体纯度，且结晶时间也不是很长。（９）冷浸热提法具有以上优点的主要原因分析如下：一、经过解吸剂乙醇的预先３９广西夫掌硬ｊ瞪文ｉ『根紊的撮冲汲纯化新工艺研究浸泡，乙醇溶液渗透到葛根的组织细胞内部，使葛根内部的有效成分得到充分的解吸，并在浓度差的作用下转移的组织外部。二、在冷浸热提过程中加入的热提取剂，使进入葛根细胞内部的解吸剂被迅速汽化，加速了传质过程，从而提高了提取效率，缩短了提取时间。并且由于提取时间短，提取所得的提取液杂质含量也相对较低。三、在旋转蒸发浓缩过程中加入一步冷却过滤，过滤出大部分的大豆苷、大豆苷元及一定量的杂质，故而所得的葛根素粗浸膏的纯度有了相当程度的提高。４０葛根素的提取ａ纯化新工乏：研究参考文献【１】国家药典委员会编．中华人民共和国药典（一部）［Ｍ】．北京：化学工业出版社．２００５，２３３－２３４［２】冯瑞芝，陈碧珠，林文琰，等．葛根的资源调查田．中国药学杂志，１９９３，２８（１５）：２７３［３］ＪｕｕｅｉＫｉｎｊｏ，ＪｕｎｉｅｈＪＦｕｍｍｗａ，ＪｕｎｋｏＰｕｅｒａｒｉａＢａｂａ，ｅｔａｌ．Ｓｔｕｄｙ０１１ｔｈｅＣｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｏｆｌｏｂａｔａⅢＩｓｏｆｌａｖｏｎｅａｎｄＲｅｌａｔｅｄＣｏｍｐｏｕｎｄｓｉｎｔｈｅＲｏｏｔｓａｎｄｔｈｅＶｏｌｕｂｌｅＳｔｅｍｓ田。Ｃｈｅｍｉｃａｌ＆ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ，１９８７，３５（１２）：４８４６－４８５０［４］ＨａｏｊｉａｇＲｏｎｇ，ＩａｎＦ．Ｓｔｅｖｅｎｓ，ＭａｘＬ．ＤｅｉＪａｚｅｒ，ｅｔａｌ．ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｔｈｅＲｏｏｔｓｏｆＰｕｅｒａｒｉａｏｆＩｓｏｆｉａｖｏｎｅｓｉｎｌｏｂａｔａ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＭｅｄｉｃａ，１９９８，６４：６２０．６２７【５】宋洪杰，曾明．葛属植物中３种异黄酮成分分析阴．药物分析杂志，２０００，２０（４）：２２３－２２５［６】张雁，张孝祺．葛根资源的开发利用［Ｊ】．中国野生植物资源，２０００，１９（６）：２６．２９门刘新，林於．愈风宁心片体外溶出度比较［Ｊ】．中国中药杂志，２００１，２６（２）：１３２—１３３［８】赵晓莉，崔小兵．ＨＰＬＣ法测定葛根素葡萄糖注射液中葛根素及３’～甲氧基葛根素含量［Ｊ】。中国中药杂志，２０００，２５（７）：４１３－４１５【９】张来丸．一种高纯度药用葛根素的提取方法辟＇】．ＣＮｌ２７６３７８Ａ，１９９９－０６．０３［１ｏ】左春耀，刘家骐，吴成军，等．制取葛根紊的方法吲．ＣＮｌｌ５４８４９Ｃ，１９９６．．０１．２８ｆ１１］捌ｇ。葛根素及葛根素注射液的研究与开发【Ｎ】．中国中药报，１９９７．０１，１３［１２】仲英，左春旭．利用高效液相色谱Ｄｅｌｔａｐｒｅｐ３０００制备系统纯化药典用葛根素对照品【刀．时珍国药研究，１９９８，（２）：１２９【１３】杨晓春，宛晓春．葛根中异黄酮＿和淀粉的提取工艺研究（，林业科技通讯，１９９６，（１０）：１６—１７【１４】赵钟兴，王飞．解吸一热提两步法提取银杏叶中的黄酮研究明．广西科学，２００５，１２（２）：１２％１２９，１３２【１５】韦藤幼，赵钟兴．解吸一内部沸腾两步法提取黄连小檗碱的工艺及机理田．４１，ｒ－西夫掌硕士论文过程工程学报，２００６，６（３）：３８０－３８３ｉｆ根素的±ｔ取及纯化新工艺研ｊ；巴【１６］潘娓婕，刘谦光．酸水解法从葛摄中提取分离葛根素和大豆苷元田．天然产物研究与开发，２０００，１２（６）：６６－６９【１７】张梦军，吴世容，李志良．几种提取葛根异黄酮的方法比较与实验优化川．中成药，２００５，２７（１ｏ）．１ｔ３３・１１３５［１８】郭建平，孙其荣．葛根异黄酮不同提取工艺的探讨［Ｊ】．中草药，１９９５，２６（１０）：５２２—５２４，５３９【１９ｔ李琰，范璐．葛根提取工艺的考察田．北京中医药大学报，２００１，２４（４）：２６－２７［２０】赵洁如，郜凤香．葛根总黄酮的提取方法研究四．中成药，２０００，２２（１）：７５６－７５８［２１１李青坡，王永圣，游剑，等．葛根总异黄酮提取工艺的研究吼．中国药业，２００４，５（１３）：４６－４７［２２］李佑稷，宋智娟，田宏现，等．水溶性葛根素浸提工艺研究阴．食品与发酵工业，２００３，２９（６）：５１－５４［２３】徐新刚，路富玉．正交试验优选葛根提取工艺田．时珍国医国药，２０００，１ｌ（９）：７８０．７８１［２４］张彤，徐莲英，陶建生，等．多指标综合评分法优选葛根提取工艺唧．中草药，２００４，３５（１）：３８－４０【２５］Ｖｉｏｒｉａｌ，ＹａｎｇＲ．Ｍｉｃｒｏｗａｖｅ・ａｓｓｉｓｔｅｄｓｔａｎｄａｒｄｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓｏｉｌｓａｎｄｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆｏｒｇａｎｉｃｃｏｍｐｏｕｎｄｓｆｒｏｍｓｅｄｉｍｅｎｔ［Ｊ］．ＡｎａｌｙｔｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９４，６６：１０９７－１１０６ｏｖｅｎ【２６］ＣｒａｖｅｉｒｏＡＡ，ＭａｔｏｓＦＪ．ＭｉｃｒｏｗａｖｅＦｒａｇｒａｎｃｅ，１９９８，４（１）：４３－４４［２７］ＲｏｎｇＴｓａｏ，Ｚｅｙｕａｕｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆｅｓｓｅｎｔｉａｌｏｉｌ田．ＦｌａｖｏｒＤｅｎｇ．Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓｆｏｒｎａｔｕｒａｌｌｙｏｃｃｕｒｒｉｎｇａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ［Ｊ］ＡｏｕｍａＩｏｆＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ［２８】ＣｅｃｉｌｉａＳｐａｒｒＥｓｋｉｌｓｓｏｎ，ＥｒｌａｎｄＢ，２００４，８１２：９５－９９Ｂｊｏｒｋｌｕｎｄ．Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ—ｓｃａｌｅＭｉｃｒｏｗａｖｅ・ａｓｓｉｓｔｅｄＥｘｔｒａｃｔｉｏｎ啊．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙＡ，２０００，９０２：２２７－２５０【２９】ＰａｒｅａＪＲＪ，Ｂｅｌａａｇｅｒｎｌ＆ＳｔａｆｆｏｒｄＳＳ．ＭｉｃｒｏｗａｖｅＡｓｓｉｓｔｅｄＰｒｏｃｅｓｓ（ＭＡＰ豇田ａ：ｎｅｗｔｏｏｌｆＤｒｔｈｅａｎａｌｙｔｉｃａｌｌａｂｏｒａｔｏｒｙ［Ｊ］，ＴｒｅｎｄｓｉｎＡｎａｌｙｔｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９４，１３（４）：１７６［３０１：Ｆ娟，沈平娘，沈永嘉．葛根中有效成分的微波辅助萃取研究川．中国医药工业杂志，２００２，３３（８）：３８２—３８４【３１］沈岚，冯年平，韩朝阳，等．微波萃取对不同形态结构中药及含不同极性成葛根素的提坤吸９眦新工艺司ｆｊ宅分中药的选择性研究阴．中草药，２００２，３２（７）：６０４【３２】韦蘑幼，赵群莉，阮莉姣，等．微波预处理法提取金银花中绿原酸明．中成药，２００３，２５（７）：５３４—５３７【３３１赵群莉，韦藤幼．微波预处理提取肉桂油工艺的研究闭．广西科学，２００３，１０（３）：２２３－２２５【３４］ＭａｒｉａＯｎＴｈｅｒＬ，ＫｌａｒａＳｚｅｎｔｍｉｈａｌｙｉ，ＡｇｎｅｓＳａｒｋｏｚｉ，ｅｔａｌ．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｓａｍｐｌｅｈａｎｄｌｉｎｇａｌｋａｌｏｉｄａｎｄｍｉｎｅｒａｌｃｏｎｔｅｎｔｏｆａｑｕｅｏｕｓｅｘｔｒａｃｔｓｏｆｇｒｅａｔｅｒｃｅｌａｎｄｉｎｅ（ＣｈｅｌｉｄｏｎｉｕｍｍａｊｕｓＬ．）叨．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ凡２０００，８８９：６９－７４Ｓａｔｄｉｖｅ．ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｆｏｒｔｈｅｆｒｏｍＮｏｔｈａｐｏｄｙｔｅｓ［３５］ＤｅｖａｎａｎｄＰ’Ｆｕｌｚｅｌｅ，ＲａｍｃｓｈＫｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅａｎｔｉ－ｃａｎｃｅｒｄｒｕｇｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ２００５，１０６３：９—１３ｏｖｅｒｖｉｅｗｆｏｅｔｉｄａ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙＡ［３６］ＭｉｒｅｅａＶ＇ｍａｔｏｒｕ．Ａｎｂｉｏａｃｔｉｖｅｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓｆｏｒｍｏｆｔｈｅｕｌｔｒａｓｏｎｉｃａｌｌｙａｓｓｉｓｔｅｄｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆ１３Ｓｏｘｈｌｅｔｈｅｒｂ５；阴．ＵｌｔｒａｓｏｎｉｃＳｏｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００１（８）：３０３－３ｄｅＣａｓｔｒｏ．Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ・ａｓｓｉｓｔｅｄ【３７】Ｊ．Ｌ．Ｌｕｑｕｅ・Ｇａｒｃ’夕ａ’Ｍ．Ｄ．Ｌｕｑｕｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ：ａｎｅｘｐｅｄｉｔｉｖｅａｐｐｒｏａｃｈｆｏｒｓｏｌｉｄｓａｍｐｌｅｔｒｅａｔｍｅｎｔＡｐｐｎｃａｔｉｏｎｔｏｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆｔｏｔａｌｆａｔｆｒｏｍｏｌｅａｇｉｎｏｕｓ１０３４：２３７－２４２ｓｅｅｄｓ们．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙＡ２００４，【３８］ＺｄｅｎａＨｒｏｍａ‘ｄｋｏｖａ’，Ｊｕ’ｌｉａＫｏｖａ’ｃ’ｉｋｏｖａ７，ＡｕＲａＥｂｒｉｎｇｅｒｏｖａ７．Ｓｔｕｄｙｏｆｔｈｅｃｌａｓｓｉｃａｌａｎｄｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ－ａｓｓｉｓｔｅｄｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｔＯｍｃｏｂｘｙｌａｎ［Ｊ］．ＩｎｄｕｓｔｒｉａｌＣｒｏｐｓａｎｄＰｒｏｄｕｃｔｓ，１９９９（９）：１０１－１０９［３９］张尊听，杨伯伦，刘谦光，等．野葛根异黄酮成分的超声萃取及抗氧化作用硼．食品科学２００３，２３（５）：３ｌ一３３Ｄｏ］赵丽娟，王翠艳，陈崇军．葛根总黄酮的两种不同提取方法比较啊．鞍山钢铁学院学报，２００２，２５（２）：１０５—１０７【４ｔ］ＩｎｃｉＣｉｎａｒ．ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＣｅｌｌｕｌｏｓｅａｎｄＰｅｅｔｉｎａｓｅＣｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｎｔｈｅＣｃｌｏｕｒＹｉｅｌｄｏｆＥｎｚｙｍｅＥｘｔｒａｃｔｅｄＰｌａｎｔＣａｒｏｔｅｎｏｉｄｓ［Ｊ］．ＰｒｏｃｅｓｓＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００５，４０：９４５—９４９［４２】施英英，薛培俭，夏黎明．酶法提取葛根渣中异黄酮的研究阴．林产化学与工业，２００６。１０６）：６２—６４［４３】郝瑞然，韦藤幼．减压内部沸腾法提取金银花中的绿原酸叽．广西科学，２００６，１３（１）：４３．４５【“】张尊昕，杨伯伦，刘谦光等。野葛根中葛根素豹提取及ＦＩＰＬＣ测定［习．中国医药工业杂志，２００１，３２（７）：２９１—２９３葛７捆Ｈ女的提坤皈纯化新工艺研究【４５】贺云，张尊听，刘谦光，等．Ｆｅ３＋络合萃取法从野葛根中分离葛根素［刃．天然产物研究与开发，２００２，１４（５）：２１．２３［４６】潘见，戴郁青，袁传勋．葛根素配位萃取探讨【刀．合肥工业大学学报（自然科学版），２００２，２５（５）：６５０．６５３【４７１李剑君，李稳宏，李多伟，等．葛根总黄酮中葛根素的分离研究叨．西北大学学报（自然科学版），２００１，３１（４）：３１１．３１４［４８】向纪明，李金灿，柳林，等．吸附法提取分离葛根素的研究【Ｊ】．天然产物研究与开发，２００３，１５（３）：２４２－２４４［４９１欧来良，史作清，施荣富，等．吸附树脂对葛根中葛根素的分离研究田．中草药，２００３，３４（２）：１３４－１３６［５０］：ｖｌ亘亮，骆雪兰，谢维权．从生产葛粉的废水中提取葛根黄酮的方法［Ｐ】．ＣＮｌ３２６９３２Ａ．２００１・６－１４ｆ５１１陈斌．葛根药用成份提取工艺【Ｐ】．ＣＮｌ３５９７６Ａ，２００１－１．１５［５２１杨崇仁，王开金．一种葛根素的制备方法口】．ＣＮｌ３９８８７２Ａ，２００２．８．２９【５３］赵玉山，苗得足，崔维初，等．葛根素的高效快速提取方法网．ＣＮｌ４１５６０９Ａ，２００３－０５－０７【５４］谢慧明，张文成，王华锋，等．电磁诱导对葛根素结晶速率、晶体形貌及纯度影响研究明．农业工程学报，２００６，７（２２）：２２０－２２２ｆ５５ｊ贺湘凌，谭天伟，ＪＡＮＳＯＮＪａｎ－Ｃｈｒｉｓｔｅｎ利用ｐ一环糊精键合固定相分离纯化葛根素［Ｊ】．色谱，２００３，６（２１）：６１０－６１３【５６】王丽杰．用金属纳米膜分离综合提取葛根淀粉、黄酮类药物的工艺方法［Ｐ】．ＣＮｌ４１７２１９，２００３－０５・１４［５７］陈志航．双注一水热法制备高分散纳米氢氧化镁的工艺研究ｐ】．广西大学，２００６广西大掌硕士论文ｊｆ徂‘紊的提取反纯化新工艺研究附录附录１：提取工艺实验数据表１提取工艺实验数据４５￡！查竺！主竺查！竺茎竺苎璺苎竺竺苎兰！查续附表１提取工艺实验数据解吸时间提取剂含提取剂用董（ｎｌＬ）４００５００６００７００８００６００６００解吸剂浓解吸剂用提取温度（℃）９０９０９０９０９０７５８０８５９０９５提取率（％）度（哟６０６０量（ｎ曲８０８０（ｍ叫２０２０水量（呦２０２０２０２０２０２０２０２０２０２０ｌＯ．４８ｌＯ．８５１１．３２１１．３１１１．３２ｌＯ．４５１０．７５１１．０６１１．３０１１．２５６０６０６０８０８０８０２０２０２０２０２０２０２０２０６０６０６０６０６０８０８０８０８０８０６００６００６００￡！查兰！主墼附录２纯化工艺实验数据！坚三竺兰竺苎竺兰竺苎兰！兰附表２浓缩比对粗浸膏纯度和初结晶晶体纯度的影响浓缩比０．６Ｑ１ｏ．８０．９粗浸膏纯度（％）５０．０２５４．７８５５．４２６０．８８３６．４８初结晶晶体纯度（％）７３．２４７８．４３７９．８７８１．８ｌ５７．６８ｌ４７￡！查竺墅壁查兰竺堡竺苎坠竺坚兰苎苎附表３酸水解过程的实验数据葛徂紊的提取ａ＃毗新工艺研竞致谢首先我要感谢我的导师韦藤幼教授，由衷的感谢韦老师三年来给予我的无微不至的关怀和帮助。他渊博的学识，认真的科研工作态度，严谨治学的作风和宽以待人的行为，为我树立了很好的榜样。在这三年的学习和科研期间，韦老师不仅传授了我学科知识，更重要是教会了我学习的方法，分析问题和解决问题的方法。经过三年的学习，我掌握了一定的科学知识，同时也具备了一定的分析问题、解决问题的能力，而且具有了一定的逻辑思维能力。这些都要感谢韦老师的精心培养。其次，三年来童张法教授和廖丹葵教授也给了我很多的帮助和指导，在实验及毕业论文期间为我提供了良好的条件，使我的学业得以顺利完成，特此表示由衷的感谢。再次我还要感谢所有帮助和支持我的同学、朋友和师弟、师妹们，在此向他们表示感谢。最后，我要感谢多年来一直给予我莫大支持和关怀的父母和亲人。葛根素的摄取及，眦新工’艺研究攻读硕士学位期间发表的文章［１】赵钟兴，徐华东，刘晓辉，等．半连续解吸一内部沸腾提取植物有效成分新工艺ｍ．化工进展，２００６，２５：１５１．１５４【２】徐华东，郝瑞然，韦藤幼，等．减压内部沸腾法提取野葛根中的葛根异黄酮叨．天然产物研究与开发（已收录．待刊）［３】刘晓辉，韦藤幼，徐华东，等．半连续内部沸腾法提取及分离金银花中的绿原酸【ｑ．化Ｉ／生化技术与生物质能源，第三届全国化学工程与生物化工年会论文选编．北京：化学工业出版社．２００６，１１：５７６－５８０葛根素的提取及纯化新工艺研究

作者：

学位授予单位：

徐华东广西大学

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