定性实验方法学验证

Method validation of the qualitative test

李慧源

临床免疫学实验室

Kingmed clinical immunology Lab

Method validation of the qualitative test验证目的:

1.评价和验证各定性检测项目的准确度、精密度、灵敏度、特异性、等各项参数，满足临床检测和认可组织的要求. 2.验证厂家提供的试剂参数能在本实验室得到重现.

Method validation of the qualitative test验证的内容:

准确度(Accuracy)精密度(Precision)

诊断敏感性（sensitivity of diagnosis）特异性（specificity）:

同一项目不同检测方法或仪器的比对CUTOFF值验证

Method validation of the qualitative test实施验证的时机:

•引进新检测项目及方法。•已确立的检测方法的更新。

•原有的检测方法应用扩大到新的检测范畴。

•质控指标表明已确立的检测方法性能正随时间而改变。

Method validation of the qualitative test几个重要概念及计算公式的回顾:

1.诊断敏感性:将实际患病者正确诊断为阳性的百分率。

计算公式为：真阳性/（真阳性+假阴性）X 100%.

2.特异性: 指将实际无病者检测为阴性的百分率。

计算公式为：真阴性/( 真阴性+假阳性）X 100% .

Method validation of the qualitative test3.Kappa检验:

用与两组定性结果一致性比较.用公式计算得到一个kappa值. kappa值位于〔-1,1〕, Kappa≥075时两组结果一致性较好；0.75>Kappa≥0.4两者一致性一般；Kappa<0.4表示两者一致性很差.

•观察一致率P0=（A+D）/ N

•机遇一致率Pc=(R1C1/N + R2C2/N) / N

•实际观察一致率= P0 —Pc•非机遇一致率= 1-Pc

•Kappa= （P0 —Pc）/（1-Pc）

方法B阳性

方法A

阳性阴性合计

ACC1

阴性BDC2

合计R1R2N

Method validation of the qualitative test一.准确度验证:

1 .检测已知值的参考物质•室间质评材料(卫生部或者CAP)•厂商提供的已赋值的参考材料

•分析用参考方法或决定方法定值的材料。(如dsDNA检测)

2. 方法比较试验：样本数为10-20个，两种方法同时测定同样的样品，用KAPPA检验方法分析两种方法检测结果一致性.(比如HBV酶免法和发光法比对)

Method validation of the qualitative test二.精密度验证:

1.批内精密度:同一份样本在同一批次内平行重复检测10次.然后计算均值,SD和CV.

2.批间精密度:同一份样本连续检测10天,每天平行检测双孔.然后计算均值,SD和CV.Note:1.用S/CO比值进行统计计算.

2.最好选择临界值,或弱阳性样本.

判断标准:批内CV小于15%,批间CV小于25%.Method validation of the qualitative test三.诊断敏感性:

1.验证方法:取10-20份已知真阳性的样本（样本来源困难时可以酌情减少）。用常规检测方法检测，计算检测阳性的样本占样本总数的比例。2.样本来源:

临床上明确诊断的阳性病人血清；厂家提供的明确为阳性的样本；PT中的阳性样本；

决定性参考方法检测阳性的样本；

以上阳性样本来源紧张时，可以进行稀释（如2：3，3：4这样稀释）

Method validation of the qualitative test四.特异性:

1.验证方法：选取20份正常健康人血清（一般取自健康体检者），计算其检测阴性结果所占百分率。2.样本来源:体检样本,体检者本人填写<健康调查表>确认符合要求后即可.

NOTE:部分项目在健康体检人群中阳性率也很高,此类项目特异性验证很难执行,建议引用厂家说明书.

比如麻疹病毒IgG,CP-IgG,MP-IgG等一系列病毒抗体IgG.因为很难确认体检者既往是否有过感染史,而IgG抗体在体内存留时间长.因此很难收集到真正意义上的阴性样本.

Method validation of the qualitative test补充1:同一项目不同检测方法或仪器的比对

适用范围:一个项目有两种以上的方法或者两台以上

的仪器(包括同一型号的仪器)同时检测,需要进行一致性比对.

定量检测中,报告单位不同的不需要比对

首次比对选取40份(20)样本,最好阴阳性各半

↓

随机每8份分成一组

↓

两种方法(或两台仪器)每天平行检测一组样本

↓

将所有检测结果汇总

↓

Kappa检验,评价一致性

Method validation of the qualitative test补充说明:关于CUTOFF值验证

定量实验但是报告定性结果的才需要做CUTOFF值验证.(比如PCR室的乙肝DNA定性).

Method validation of the qualitative test验证方法1:

找临界浓度的标准品(可要求厂家提供),连续检测20次,95%的结果落在临界范围即可.验证方法2:

连续统计一段时间的检测结果,处于临界范围的结果比例小于5%即可.

Method validation of the qualitative test甲肝IgM定性项目方法学验证.doc2008年3月优生仪器比对.docMethod validation of the qualitative test参考资料:

1.《定性实验方法学验证管理程序》KM-MP0301.20

2. User Protocaln for Evaluation of Qualitative Test

Performance Performance;Approved Guideline，NCCLS-EP12-A