腺苷脱氨酶(ADA),试剂标准操作规程(SOP)--ADA

试剂标准操作规程

项 目 方 法 腺苷脱氨酶（ADA） 酶显色测定法

编写人 审核人 批准人 文件分发部门和/或个人

医务科保管者 院长办公室保管者 院档案室保管者 检验科主任 临床化学检验室

日期 日期 日期 本规程自2008年8月01日起实施，每1年复审一次

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目 录

1. 检测原理 2. 标本采集与处理 2.1 受检者的准备 2.2 静脉采血 2.3 抗凝剂 2.4 标本处理 3. 试剂 3.1 试剂 3.2 校准血清

3.3 试剂与校准血清的稳定性 4. 仪器 5. 操作 6. 计算 7. 操作性能 7.1 精密度 7.2 准确度 7.3 灵敏度 7.4 可报告范围 7.5 特异性 7.6 干扰 8. 参考值 9. 临床意义 附录A: 参数

1. 检测原理

腺苷在腺苷脱氨酶作用下脱氨基形成黄苷。黄苷在PNP作用下生成次黄嘌呤，次黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶（XOD）作用下转化为尿酸和过氧化氢（H2O2）。H2O2与EHSPT和氨基

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安替比林（4-AA）反应生成有色染料，产物的颜色与ADA活性成正比。

ADA

腺苷+ H2O -----------------------黄苷 + 氨

PNP

黄苷 + 磷酸------------------------次黄嘌呤 + 核糖-1-磷酸

XOD

次黄嘌呤2 H2O2+2 O2---------------------- 尿酸 + H2O2

POD 2 H2O2+4-AA+EHSPT -----------------------醌式染料 2． 标本采集与处理 2.1 受检者的准备：

病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。注意有无应用影响测试项目的药物。此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。 2.2 静脉采血：

除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。 2.3 抗凝剂：

血浆使用EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。 2.4 标本处理：

血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，置洁净试管加盖低温保存。 3．试剂 3.1 试剂：

威特曼生物科技（南京）有限公司ADA试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：

组 成 R1：缓冲液 4-氨基安替比林 4-AA PNP XOD 过氧化物酶 R2：缓冲液 腺苷 EHSPT

3.2：校准血清

使用威特曼生物科技（南京）有限公司提供的校准血清或使用试剂盒提供的水标准液。

初 始 浓 度 50mmol/L PH 8.0 4mmol/L 2mM 0.1U/mL 700U/L 2KU/L 50mmol/L PH 7.0 10mM 2mM 页数 3 共 5 页

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校准频次：

空白定标：每日需做试剂空白定标。

全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。 3.3 试剂与校准血清的稳定性：

原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。试剂开瓶后，在仪器中至少可保存30天。试剂储存在18-22℃稳定28天，试剂应避免污染。试剂颜色为无色，当试剂变色，按照试剂失效处理。

多项校准血清在2-8℃储存至标签所示失效日期，复溶后-20℃保存，可稳定一个月，只可冻融一次，避免反复冻融。参见校准血清说明书。

试剂盒配备的水标准液在2-8℃储存至标签所示失效日期，开瓶后2-8℃储存避免污染，可稳定2个月。 4．仪器

YY型号仪器。 5．操作

样品为血清或肝素/EDTA抗凝血浆。本法为速率法。参数见后附，附录A。 试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。 6．计算

ADA (U/L) = ΔA/min×F 7．操作性能 7.1 精密度：

批内CV< 1.82%，批间CV<2.73%。 7.2 准确度：

测量结果在质控血清靶值±2SD范围内。不同方法学试剂的质控结果之间会存在差异，使用时请确保质控选择与试剂的方法学保持一致。 7.3 灵敏度：

ADA浓度为：185U/L时，吸光度变化率ΔA6nm/min为0.104。 7.4 可报告范围：

血清与试剂用量之比为5:180:90时，测定上限为200 U/L。 7.5 特异性：

测量值在给定值的95%-105％范围内。 7.6 干扰：

内源性干扰物溶血为1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黄疸30mg/ml、抗坏血酸300mg/ml对测试结果无明显影响。 8．参考值 4-18 U/L。 9．临床意义

本试剂盒用于检验血清中ADA活性。ADA是催化腺苷脱氨基生成的鸟苷，该酶主要分布于人体淋巴组织，急性肝炎、酒精肝、慢性肝炎、肝硬化、肝细胞患者ADA活性明显偏高。因此，该项指标与ALT、GGT联用会在肝病诊断方面提供重要依据。本试剂也可用

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于诊断结核性胸膜炎。

附录A: 参数

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