・４１８・ 安徽医药Ａｎｈｕｉ Ｍｅｄｉｃａｌ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ２０１２ Ｍａｒ；１６（３） ◇医药工业◇ 洁净区消毒效果验证 陈俊 （武汉中原瑞德生物制品有限责任公司，湖北武汉４３００２３） 摘要：目的分析多种消毒剂不同使用量在洁净区消毒使用过程中的消毒效果情况。方法 通过验证的方法来判断消毒剂是 验证中选用的消毒剂适合该公司洁净区的消毒使用。 否适用于洁净区的消毒用途。判断不同剂量的消毒剂的消毒时效。结果所选消毒剂符合洁净区消毒要求。验证数据可作为 制定标准操作规程的依据。结论关键词：消毒剂；消毒；验证 Ｃｌｅａｎ ａｒｅａ ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ ＣＨＥＮ Ｊｕｎ （Ｗｕｈａｎ Ｚｈｏｎｇｙｕａｎ Ｒｅｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｃｏ．Ｌｔｄ，Ｗｕｈａｎ ４３００２３，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｖａｌｉｄａｔｅ ｔｈｅ ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｓｅｖｅｒａｌ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｄｉｓｉｎｆｅｃｔａｎｔｓ ｕｓｉｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｏｓｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ａｐｐｌｉｃａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｄｉｓｉｎｆｅｃｔａｎｔ ｔｏ ｄｉｓｉｎｆｅｅｔ ｃｌｅａｎ ａｒｅａ．Ｔｈｅ ｄｉｓｉｆｅｃｔｉｎｏｎ ｔｉｍｅ ｏｆ ｅｖｅｒｙ ｄｉｓｉｎｆｅｃｔａｎｔ ｗｉｔｈ ｄｉｆ－ ｆｅｒｅｎｔ ｄｏｓｅｓ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｄｉｓｉｎｆｅｃｔａｎｔｓ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｍｅｔ ｔｈｅ ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ ｏｆ ｃｌｅａｎ ａｒｅａ．Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ ｄａｔａ ＣＯｕｌｄ ｂｅ ｕｓｅｄ ａｓ ｔｈｅ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｓｔａｎｄａｒｄ ｏｐｅｒａｔｉｎｇ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｄｉｓｉｎｆｅｃｔａｎｔｓ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ ａｒｅ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｏｕｒ ｃｏｍｐａｎｙ・ Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｄｉｓｉｎｆｅｃｔａｎｔ；ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ；ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ 生物制品生产企业实施ＧＭＰ管理的重要内容之一就是 菌过滤后使用，Ｃ、Ｄ级区域需经过滤后使用。 防止在药品生产的整个过程中出现混淆、污染、交叉污染或差 错，｛吉净厂房的消毒是控制污染的重要措施。以前我国的 ＧＭＰ要求较低，与国际先进水平有较大差距 １１。新版 ＧＭＰ＿２ 颁布后，要求大幅度提高，药品生产企业必须大力提高 自身的管理水平才能适应新的要求。这种高要求也包括洁净 厂房的消毒管理。验证消毒剂在特定洁净厂房的消毒效果是 １．２．１ 洁净厂房各表面的清洁、消毒生产操作人员按照既 定的洁净厂房清洁标准操作程序、消毒程序、消毒周期和消毒 剂的使用说明进行清洁和消毒操作。消毒剂为０．１％新洁尔 灭、７５％的乙醇溶液。 １．２．２ 洁净厂房气体熏蒸消毒 甲醛分别按１０、５、３ ｍｌ・ ｍ～，乳酸分别按２、１ ｍｌ・ｍ 的量依熏蒸程序消毒洁净区空 所有洁净区域取样测试沉降菌、浮游菌和表面微 否符合要求十分重要 。本文旨在建立一套可靠、完整的消 毒剂消毒效果的验证方法，找出适合药品生产企业生产环境 的消毒剂种类和用量，确定洁净区的消毒周期，以适应新版 ＧＭＰ的要求。可用于洁净厂房和临床的消毒剂种类很多，效 果也不尽相同 ，在选用消毒剂时应考虑使用具有广谱杀 菌、对人体无害、对设备无腐蚀性等特性，并且稳定，作用迅速 的消毒剂。另外消毒剂的使用方式对消毒效果也有很大影 响。除了要验证消毒剂的种类外，确定消毒剂在不同的用量 下能保证ＧＭＰ所要求的各项微生物指标的时间也对血液制 品生产企业也至关重要，它是制定各种消毒方法的消毒周期 的重要依据。 １材料与方法 气，熏蒸消毒完毕后净化空调系统持续运行。 １．３检测生物指标，进行验证时，必须严格控制无菌操作过程以防止外 来原因造成结果的假阳性；验证中使用的培养基必须已进行 过培养基的灵敏性实验，必须严格灭菌。本文在每个洁净级 别区域中各选取一个最有代表性的区域举例说明验证方法， 所选取的洁净区域信息以及《药品生产质量管理规范》附录 规定的各洁净级别合格标准见表１。 表１代表性洁净区域信息和合格标准 １．１材料（１）灭菌脱脂棉纱棉签或棉球：包扎后经１２１℃ 湿热灭菌１５ ｍｉｎ；（２）灭菌生理盐水按《中国药典》配制经 １２１℃湿热灭菌１５ ｍｉｎ；（３）无菌具塞试验管（１５ ｍ１）；（４）营 养琼脂培养基；（５）浮游菌采样器；（６）恒温培养箱；（７）消毒 剂：甲醛、乳酸、乙醇、新洁尔灭；（８）超净工作台。 １．２洁净厂房清洁、消毒操作清洁、消毒的范围是厂房的 １．３．１沉降菌、浮游菌的测定准 确定，如表２所示。 浮游菌采样每个取样点采样一次。沉降菌测定时每个采 样点用两个沉降碟连续进行监测并累积计数，每个沉降碟暴 ４个有代表性的区域的采样 全部净化区域，分为Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ级四个级别。清洁、消毒结束 后洁净厂房处于模拟正常生产进行时的动态运行状态下。净 化空调系统在气体熏蒸消毒时按熏蒸消毒程序运行，其余时 间必须持续运行。消毒剂必须现配制，Ａ、Ｂ级区域需经过除 点数目、浮游菌采样量、沉降菌培养皿数分别依据国家标 安徽医药Ａｎｈｕｉ Ｍｅｄｉｃａｌ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ２０１２ Ｍａｒ；１６（３） ・４１９・ 表２ 洁净区域和取样信息 数取平均值。 各洁净区分别于熏蒸消毒后的第１天、第５天、第１５天、 第３０天，采样检测浮游菌、沉降菌指标。见表３—７。 １．３．２表面微生物的测定取灭菌脱脂棉（棉签），用灭菌 生理盐水润湿，在取样点上（如实验台、墙壁、容器等表面或 缝隙）充分擦拭１００ ａｍ 后投入灭菌带盖试管中，备用。在净 化台上，以无菌操作法向上述试管中加入５ ｍｌ的灭菌生理盐 水，充分振摇或在振荡器上振摇几分钟，取浸出液１ ｍｌ置直 露２ ｈ，即一个采样点共采样４ ｈ。每次全部采样结束后将培 径约９０ ｉｎＩｎ的平皿中，再注入约４５℃的营养琼脂培养基１５ ｒｎｌ， 养皿倒置于培养箱中培养，计数菌落数。将每个区域的菌落 表３甲醛用量为ｌ０ ｍｌ・ｍＩ３时气体熏蒸消毒测试结果 除菌灌装区 ０ １ ０ ３ ０ 灌装背景区 ２ ４ １ １６ ７ 超滤间 １５ ３ｌ １ｌ ４６ ２１ 洗涤间 ２６ ４４ １６ ８７ ２９ ・４２０。 安徽医药Ａｎｈｕｉ Ｍｅｄｉｃａｌ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ２０１２ Ｍａｒ；１６（３） 混匀，待凝固后，倒置于培养箱中培养４８ ｈ，计数菌落数。 由检测人员在清洁后的第２天开始对洁净区采样表面微 生物，每４８ ｈ测定一次，共测定３次。 ２结果 可依据生产工艺需要制定不同洁净区域的气体熏蒸消毒的标 准操作规程（ＳｔａｎｄａＭ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ）。０．１％新洁尔 灭、７５％的乙醇溶液适用于我公司厂房洁净区的常规的各种 表面的清洁消毒，并能用于洁净室的日常洁净维护，消毒效果 可保持５ ｄ以上。每班消毒一次完全可以符合要求。我们仍 建议生产部门继续延用每班进行一次各种表面的清洁消毒工 气体熏蒸消毒能达到可以有效地保证洁净区的沉降菌、 浮游菌指标在一定的时间内符合相应洁净级别的要求，使用 的消毒剂越多符合要求的时间就越长，见表３～７。表中浮游 菌的单位为ｃｆｕ－ｍ～，沉降菌的单位为ｃｆｕ／４ｈ。 作方法，以加强消毒的可靠性。 ３讨论 不同消毒剂在不同用量的情况下能有效地保证洁净区的 浮游菌、沉降菌微生物指标符合相应洁净级别的要求的保证 血液制品属于非最终灭菌产品，生产周期较长，无菌操作 环节多，因而ＧＭＰ对血液制品生产企业要求是最严格的，各 时间汇总，见表８。 表８不同剂量的消毒剂能保证沉降菌、浮游菌指标 合格的时间汇总／ｄ 按既定的洁净厂房清洁标准操作程序、消毒程序进行清 洁和消毒操作可以保证洁净区的各种表面微生物指标符合要 求，见表９，１０。 表９消毒剂为０．１％新洁尔灭时表面微生物检测结果 表１０消毒剂为７５％的乙醇溶液时表面微生物检测结果 消毒剂的验证结果表明，甲醛、乳酸适用于我公司厂房洁 净区的气体熏蒸消毒。增加消毒剂的用量可以延长消毒效果 的保证时间；在消毒剂用量相同的情况下，洁净级别越高消毒 效果的保证时间越短，经验证的最小消毒剂用量也能保证Ａ 级区域合格时间不少于５ ｄ，其他区域则更长。公司生产部门 企业又分别具有各自的特点，所以必须通过验证来提供企业 制定标准操作规程的标准。 本次验证所有实验均依据药品《生产质量管理规范》（第 二次征求意见稿）设计并于２０１０年完成，经与２０１１年新发 布、施行的《生产质量管理规范》（２０１０年修订）内容进行对 照，本次验证的实验设计、所做出的结论完全符合《生产质量 管理规范》（２０１０年修订）的要求。 为防止细菌的耐药性问题，在使用消毒剂时应交替使用。 净化空调系统的正常运行是本验证的重要基础。不同净 化空制的洁净室必须分别验证来确定消毒剂的使用量和 作用时间，即使是同一净化空制的相同净化级别的洁净 室如果有换气次数等指标的差异也应分开验证。 为确保消毒工作处于始终处于“验证的‘’’和“受控的”状 态，消毒剂的消毒效果验证需在以下几种情况下进行维护 （再验证）。（１）变更控制验证：净化空调系统进行了维修或 调整了风量和风平衡、更换过高效过滤器，房间内设备发生了 重大变化，或者是日常监测中发现了二次以上微生物指标超 标的现象都应进行变更控制验证；（２）再验证：正常生产使用 时，每年应针对标准操作规程（ＳＯＰ）中规定的消毒剂及其使 用量进行再验证。 参考文献： ［１］单国旗．我国ＧＭＰ与美国ｃＧＭＰ引发的思考［Ｊ］．安徽医药， ２００９，１３（６）：６９１—２． ［２］ 中华人民共和国卫生部．药品生产质量管理规范（２０１０年修 订）［Ｓ］．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｏｂ．ｇｏｖ．ｃｒｔ／ｐｕｂｌｉｃｆｉｌｅｓ／ｂｕｓｉｎｅｓｓ／ｈｔｍｌｉｆｌｅｓ／ ｍｏｈｚｃｆｇｓ／ｓ６７２９／２０１ １０２／５０６２０．ｈｔｍ ［３］ 白慧良，李武臣，叶瑛瑛主编．药品生产验证指南［Ｍ］．北京：化 学工业出版社，２００３：７２—８０． ［４］ 马晓霞．临床上常用消毒剂及其使用方法［Ｊ］．中国医药指南， ２００８，６（５）：１ ３０—２． ［５］ 中华人民共和国国家标准．医药工业洁净室（区）悬浮粒子的测 试方法［ｓ］．北京：中国标准出版社，２０１１：４． ［６］ 中华人民共和国国家标准．医药工业洁净室（区）浮游菌的测试 方法［ｓ］．北京：中国标准出版社，２０１１：４． ［７］ 中华人民共和国国家标准．医药工业洁净室（区）沉降菌的测试 方法［ｓ］．北京：中国标准出版社，２０１１：３． （收稿日期：２０１１一Ｏ６一ｌ０）
