维普资讯 http://www.cqvip.com 现代食品科技 Ｍｏｄｅｒｎ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２００８，Ｖｏｉ．２４，Ｎｏ．１ 比色法测定巴西虫草菌丝体中虫草酸的含量 蔡友华 ，范文霞 ，刘学铭 ，徐玉娟 ，吴娱明 （１．广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所，广东省农产品加工公共实验室，广东广州ｌ５１Ｏ６１Ｏ） （２．江西农业大学生物科学与工程学院，江西南昌３３００４５） 摘要：利用比色法简便、准确和快速地测定了巴西虫草菌丝体中虫草酸的含量。结果表明，虫草酸即Ｄ＿甘露醇的最大特征吸收 峰在４１２ １１／１１处，质量浓度在１０－￣５０ ｍｇｍ范围内线性良好，它的线性回归方程为：Ｙ＝０．０１０２Ｘ．０．００２９，ＲＺ＝０．９９８９；仪器精密度良好， ＲＳＤ为０．３５％（ｎ＝６）；样品显色后在１８０ ｍｉｎｌ内基本没变化；平均回收率为１００．３０％，ＲＳＤ为１．４４Ｖ４ｎ＝５）；干扰试验表明在葡萄糖、 鼠李糖和果糖中，只有果糖对检测结果有较大影响。通过果糖的特征吸收峰和高效澎阳色谱法表明，巴西虫草菌丝体中没有果糖的存 在，验证了比色法测定巴西虫草茵丝体中虫草酸含量的准确性；用该方法测定的巴西虫草茵丝体中虫草酸的质量分数为８．４５％，ＲＳＤ 为 ３４％（ｎ＝６）。 关键词：比色法；巴西虫草；虫草酸；甘露醇 中图分类号：ＴＳ２０７．３；文献标识码：Ａ；文章篇号：１６７３－９０７８（２００８）０１．００７６－０４ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｏｒｄｙｃｅｐｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ Ｍｙｃｅｌｉａ ｏｆ Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ Ｏｒａｓｔｌ￣ｅｎｓｔ－ … ■ＴＴ ｓ Ｈｅｎｎ ＤＹ ｌ ＯＩＯｒｉｍｅｔｒｙ ｌ ■ ・ ＣＡＩ Ｙｏｕ－ｈｕａ Ｅ Ｎ Ｗｅｎ－ｘｉａ ＬＩｕ Ｘｕｅ－ｍｉｎｇ ，ＸＵ Ｙｕ￣ｕａｎ ，ｃｒｍＮ ｚｍ－ｙｉ （１．ｎｌｅ Ｓｅｒｉｃｕｌｔｕｒｅ＆Ｆａｒｍ Ｐｒｏｄｕｃｅ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆＧｕａｎｇｄｏｎｇ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｅｅｓ， Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ ＯｐｅｎＡｃｃｅｓｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ｒｏｄｕｃｔＰ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０６１０，Ｃｈｉｎａ）（２．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｊｉａｎｇｘｉ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｃｈａｎｇ ３３００４５，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａ ｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ ａｎｄ ｒａｐｉｄ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｙｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆｔｈｅ ｃｏｒｄｙｃｅｐｉｃ ａｃｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔｉｎｆｅｒｍｅｎｔｅｄｍｙｃｅｆｉａｏｆ ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓｈｅｎｎｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄｔｈａｔ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｐｅａｋｏｆｃｏｒｄｙｃｅｐｉｃ ａｃｉｄ，ｍａｎｎｉｔｏｌ，Ｗａｓｆｏｕｎｄ ａｔ ４１２ ｌｉａ．Ｗｉｒｔｈｉｎ ａ ｌｎｅａｒ ｉｒａｎｇｅ ｏｆ １ ５Ｏｍｇ／Ｌ，ｔｈｅ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｅｑｕａｔｉｏｎ Ｗａｓ：Ｙ＝０．０１０２Ｘ－０．００２９， ＝ｏ．９９８９．Ｔｈｅ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ｏｆｔｈｅ ｉｎｓｌｒｕｍｅｎｔ ｗａｓ ｓａｔｉｓｆａｃｔｏｒｙｗｉｔｈｔｈｅＲＳＤｏｆＯ．３５％（ｎ＝６）．Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙａｎｄＲＳＤ（ｎ＝５）ｗｅｒｅ１００．３０％ａｎｄ１．４４％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ａｍｏｎｇｔｈｅｔｅｓｔｅｄ ｓｕｇａｒ， Ｄ－ｆｒｕｃｔｏｓｅ ｓｈｏｗｅｄｈｉｇｈ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎｔｈｅｔｅｓｔ ｒｅｓｕｌｔｓ．ＮｏＤ—ｆｒｕｃｔｏｓｅＷａｓｆｏｕｎｄｉｎｆｅｒｍｅｎｔｅｄｍｙｃｅｌｉａ ｏｆｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ，ｗｈｉｃｈｐｒｏｖｅｄｔｈｅ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｓｕｉａｂｌｔｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆｃｏｒｄｖｃｅｐｉｃ ａｃｉｄ ｃｏｎｔｎｔｅ ｉｎ ｆｅｒｍｅｎｔｄ ｍｙｃｅｌｉｅａ ｏｆｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ ｈｅｎｎ．１１话 ｍａｎｎｉｔｏｌ ｃｏｎｔｎｔｉｅｎｆｅｒｍｅｎｔｅｄｍｙｃｅｌｉａｏｆｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓＷａｓｆｏｕｎｄｔｏｂｅ ８．４５％ｗｉｔｈｔｈｅＲＳＤｖａｌｕｅｏｆＯ．３４％． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｙ；Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ；ｃｏｒｄｙｃｅｐｉｃ ａｃｉｄ；ｍａｎｎｉｔｏｌ 虫草酸，即Ｄ．甘露醇，为虫草类真菌中的主要有 效成分之一，具有利尿脱水、提高血浆渗透压、镇喘 祛痰【ｌ】、抗自由基等药理作用，并且对多种疾病有一 定的疗效【２ｌ。甘露醇现已被认为是发酵虫草菌丝体 采集到虫草野生菌株，经广东微生物所鉴定为巴西虫 草（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓＨｅｎｎ）。之后，方定坚等【ｊｊ对 家蚕蛹人工培养巴西虫草所产的子实体中的有效成分 进行了检测，认为人工培养巴西虫草的麦角多醇、甘 中活性成分的重要测试指标之一。１９８８年广东省农科 院蚕业与农产品加工研究所科技人员于某自然保护区 收璃日期：２００７－０９－２５ 露醇、腺苷、虫草多糖、氨基酸、微量元素等的含量 与冬虫夏草（ｃｏｒｄｙｃｅｐｓｓｉｎｅｎｓｉｓ）相近，有提高实验动 物免疫功能、降低血清胆固醇等药理作用。而液体培 养巴西虫草所产菌丝体中虫草酸含量测定方面的研究 尚未见文献报导，本文通过研究比色法测定巴西虫草 基金项目： 项目（．２００５Ｂ２０４０１０２０） 究专项（０６－０８－０３Ｂ）和广东省科技攻关 作者简介：蔡友华（１９８３－），男，硕士研究生．研究方向：发酵工程。 菌丝体中虫草酸的含量，为冬虫夏草在甘露醇方面的 应用找到新的替代品具有一定意义。 通讯作者：刘学铭（１９６７－），博士，研究员，主要研究农产品加工及其活性 成分研究。 ７６ 维普资讯 http://www.cqvip.com 现代食品科技 Ｍｏｄｅｒｎ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２００８，Ｖｏ１．２４，Ｎｏ．１ １材料和方法 １．１材料 １．１．１样品 巴西虫草菌丝体干燥、磨粉放于样品袋中保存备 用。 １．１．２仪器 ＵＶ－ｖｉｓｉｂｌｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ－１ ７００，ＨＨ．４数显恒 温水浴锅，Ａｇｉｌｅｎｔ ＬＣ１２００系列（包括：Ｇ１３７９Ｂ． Ｄｅｇａｓｓｅｒ、Ｇ１３ １ １Ａ Ｑｕａｔ－ｐｕｍｐ、Ｇ１３２９ＡＡＬＳ、ＧＩ３ １６Ａ ＴＣＣ、Ｇ１３６２Ａ ＲＩＢ）。 １．１．３试剂 Ｄ．甘露醇（分析纯），Ｌ．鼠李糖（生化试剂），高碘酸 钾（分析纯），盐酸（质量分数为３６％－３８％，分析纯）， 醋酸铵（分析纯），冰乙酸（化工试剂），乙酰丙酮（分析 纯），乙睛（色谱纯），果糖（分析纯），单蒸水。 １．２方法 １．２．１溶剂的配置方法 １．２．１．１高碘酸钾溶液 １５ ｍｍｏｌ（￣［Ｊ ３．４５ ｇ）高碘酸钾溶于１ Ｌ ０．１２ ｍｏｌ／Ｌ 盐酸溶液中。 １．２．１．２ Ｎａｓｈ试剂 １５０ ｇ醋酸铵＋２ ｍＬ冰醋酸＋２ ｍＬ乙酰丙酮，用蒸 馏水稀释至１ Ｌ（现用现配）。 １．２．１．３ Ｌ．鼠李糖溶液 Ｌ．鼠李糖１００ ｍｇ，用蒸馏水定容至１００ ｍＬ。 １．２．１．４供试品溶液的制备 精密称取虫草菌丝体粉末４．０ ｇ，加蒸馏水８０ ｍＬ， 沸水浴提取２ ｈ后，过滤，用蒸馏水洗残渣３次，将 滤液、洗液合并于１００ ｍＬ容量瓶中，加蒸馏水定容 至刻度，再从中精密取１ ｍＬ，置１００ ｍＬ容量瓶中， 加蒸馏水定容至刻度作为待测样品溶液，即浓度为０．４ ｍｇ／ｍＬ或者４００ ｍｇ／Ｌ（按原料计）。 １．２．１．５标准品溶液的制各 精密称取干燥至恒重的甘露醇标准品０．１ ｇ于烧 杯中，加蒸馏水５０ ｍＬ溶解完全，转移置１００ ｍＬ容 量瓶中定容，配置成质量浓度为１ ｇｍ的甘露醇溶液， 然后分别精密量取１．０ ｍＬ、２．０ ｍＬ、３．０ ｍＬ、４．０ ｍＬ、 ５．０ ｍＬ各置１００ ｍＬ容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度， 得到质量浓度分别为１０ ｍｇ／Ｌ、２０ ｍｇｍ、３０ ｍｇｍ、４０ ｍｇ，Ｌ、５０ ｍｇ／Ｌ的甘露醇标准溶液。 １．２．２测定方法 精密量取待测样品溶液１ ｍＬ，加入１０ ｍＬ刻度 试管中，加１ ｍＬ高碘酸钾溶液，混匀，室温反应１０ ｍｉｎ，加２ ｍＬ ０．１％的Ｌ．鼠李糖溶液以除去过多的高碘 酸钾，振荡混匀后，加４ ｍＬ新鲜配置的Ｎａｓｈ试剂５３ ℃水浴１５ ｍｉｎ使其呈色，之后快速冷却至室温，用分 光光度计在４１２ １Ｚｒｌｑ波长处，以蒸馏水代替待测样品 溶液，用同样的方法操作作为对照，测定其吸光度值。 １．２－３色谱条件 色谱柱： Ｚｏｒｂａｘ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ（１ ５０ ｍｍｘ４．６ ｌｌｑｎ＇ｌ ｉ．ｄ．，５ ｒｔｍ）；流动相：乙腈／水（体积比为 ７５／２５）；流速：１ ｍＬ／ｍｉｎ；柱温：３０℃；进样量：１０ Ｌ。 ２结果与分析 ２．１ 样品和标准品的吸收曲线比较 分别取１ ｍＬ待测样品和１ ｍＬ ５０ ｍｇ／Ｌ的甘露醇 标准品，按“１．２．２”操作分别使其呈色，用ＵＶ－ｖｉｓｉｂｌｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ－１７００紫外分光光度计使呈色的样 品溶液和标准溶液分别在２００－－８００ ｎ／ｉ１范围内扫描， 得到两者在该范围内的特征吸收波长图（如图１所示）， 两者的最大特征吸收峰基本完全重叠，波长为４１２ ｎｍ，这与文献【４ 艮道一致，初步定性确定样品溶液中 有甘露醇。 ｎｍ 图１甘露醇和样品的特征吸收峰 Ｆｉｇ．１ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｗａｖｅ ｏｆ ｍａｎｎｉｔｏｌ ａｎｄ ｓａｍｐｌｅ ２．２甘露醇标准曲线的制各 分别精密量取１ ｍＬ质量浓度分别为０ ｍｇ／Ｌ、１０ ｍｇ／Ｌ、２０ｍｇ／Ｌ、３０ｍｇ／Ｌ、４０ｍｇ／Ｌ、５０ｍｇ／Ｌ的甘露 醇标准品，按“１．２．２”操作，结果表明，在１０～５０ ｍｇ／Ｌ 范围内，其吸光度值与质量浓度有较好的线性关系（如 图２所示），其线性回归方程为：Ｙ＝Ｏ．０１０２Ｘ．０．００２９， Ｒ＝０．９９８９。根据虫草菌粉的提取和稀释路线，虫草菌 粉中甘露醇的含量（％）＝（Ｘ／４００）×１００，（其中，Ｙ为 吸光度值，ｘ为质量浓度）。 ７７ 维普资讯 http://www.cqvip.com 现代食品科技 Ｍｏｄｅｒｎ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２００８，Ｖｏｉ．２４，Ｎｏ．１ Ｑ ｏ 质量浓度／（ｍ Ｌ） 图２甘露醇标准曲线 孽 ．２ Ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｕｒｖｅ ｏｆ ｍａｎｎｉｔｏｌ ２．３精密度试验 精密量取ｌｍｌ浓度为０．４ ｍｇ／ｒｒ￣（按原料计）的巴 西虫草菌丝体提取液６份，按“１．２．２”使其呈色，在４１２ ｎ／／１处测定其吸光度值，结果分别为：０．３４１，０．３４６， ０．３４５，０．３４２，０．３３９，０．３３７，平均为０．３４２，相对标准 偏差ＲＳＩ）ｃ＝ｏ．３４６％（１１＝６）。任健敏等【５Ｊ认为，对于某些 微量组分（仪器分析），一般要求相对标准误差小于 ８％。表明该分光光度计能够较精密地测定其吸光度 值。 ２．４样品显色后稳定性试验 精密量取１ ｍＬ浓度为０．４ｍｅｄｍＬ（按原料计）的巴 西虫草菌丝体提取液，按“１．２．２”使其呈色，每间隔５ ｍｉｎ测定其吸光度值，连续测定了３ ｈ，结果如表１所 不。 表１呈色物质的稳定性 Ｔａｂ．１ ａｔａｂｍｔ－ｙ ｏｆｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃ ｒｅａｇｅｎｔ 结果表明：随着时间的推移，样品在４１２ ｎ／／１处 的吸光度值变小，稳定性降低。由相对标准偏差ＲＳＤ 值，也可以明显看出，待测样品在前２０ｍｉｎ表现出比 较稳定，４０ ｍｉｎ之后比较有规律地等差降低，但是降 低幅度很小，由此，可以认为样品显色后在１８０ ｍｉｎ 之内表现稳定。 ２．５干扰试验 ７８ 考虑到提取液中含有葡萄糖、果糖以及剩余的鼠 李糖，将进行以下试验。精密量取１０ ｍＬ浓度为ｏ．４ ｍｅｄｍＬ（按原料计）的巴西虫草菌丝体提取液３份，分 别加入这三种单糖０．５ ｍｇ，使其浓度达到５０ ｍｇ／Ｌ， 按“１．２．２”操作，４１２ ｎ／／１处测定其吸光度值，结果如下 表。 表２三种单糖对甘露醇测定结果的影响 ａＴｂ．２ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆｔｈＩ１ｅｅ ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｏｎ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｍａｎｎｉｔｏｉ 注：“抖’＇表示在９９％区间内显著 Ｎｏｔｅ：” ”ｍｅａｎｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｉｎ ９９％ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ＣＫ 通过统计分析表明，葡萄糖和鼠李糖对样品中甘 露醇的测定基本没有影响（Ｐ＞０．０５），而加有果糖的样 品与对照品相比，则有显著影响（Ｐ＜０．０１），为进一步 验证比色法测定巴西虫草菌丝体粉中甘露醇含量的准 确性，分别通过果糖标准品与样品的波谱比较和高效 液相色谱法，来验证样品中是否含有果糖，结果如下 图所示。 ＩｌＩＩ１ 图３果糖标准品和样品的特征吸收峰 Ｆｉｇ．３ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｗａｖｅ ｏｆＤ－ｆｒｕｃｔｏｓｅ ａｎｄ ｓａｍｐｌｅ 通过果糖标准品特征吸收峰和样品特征吸收峰比 较，果糖标准品虽然在４１２ ｎ／ｌｌ处也有吸收峰，但是 如图３所示，其峰形宽明显比样品的要宽，与文献【６Ｊ 报道一致，而样品与甘露醇的峰宽是重叠的，如图ｌ 所示，初步确定样品中没有果糖，为进一步确定，通 过ＨＰＬＣ法来鉴定样品中是否含有果糖，如图４所示 结果表明：在相同的条件下，果糖标准品在５．１５８ ｍｉｎ时出峰，而此时样品溶液则没有特征吸收峰，表 明样品中的确没有果糖的存在，进一步证明虫草样品 维普资讯 http://www.cqvip.com
现代食品科技 Ｍｏｄｅｒｎ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２００８，Ｖｏ１．２４，Ｎｏ．１ 通过比色法可以较准确地检测巴西虫草菌丝体中甘露 醇的含量。 Ｏ Ｏ ２ ４ ６ Ｏ Ｏ ２ ４ ６ ８ ｔ／ｍｌｎ Ｂ 图４果糖标准品（Ａ）和样品（Ｂ）色谱图 Ｆ ．４ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ ｏｆ ｓｔａｎｄａｒｄ Ｄ—ｆｒｕｃｔｏｓｅ（Ａ）ａｎｄ ｓａｍｐｌｅ （Ｂ） ２．６回收率试验 取已知浓度为３３．７０ ｍｇ／Ｌ的样品溶液５份，每份 ２ｍＬ，分别加入３０ｍｅｄＬ的标准品甘露醇各１、２、３、 ４、５ ｍＬ，加水定容至１０ ｍＬ，按“１．２．２”操作，结果见 表３。 表３回收率试验结果 Ｔａｂ３ Ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ｒｅｃｏｖｅｒｙ 由表３可见：平均回收率为１００．３０％，相对标准 偏差ＲＳＤ为１．４４％（ｎ＝５）。 ２．７ 巴西虫草菌丝体中甘露醇的测定结果 根据以上甘露醇的测定条件，最终测得巴西虫草 菌丝体提取液中甘露醇的含量为８．４５％，相对标准偏 差ＲＳＤ＝０．３４％（ｎ＝６）。 ３结论 （１）干扰试验发现果糖的存在对巴西虫草菌粉中 甘露醇的测定有较大影响，因此在测定前要减去样品 中果糖的含量。这是因为ＫＩＯ 可以把具有羟基的单 糖生成醛，由于在酸性条件下游离单糖以稳定的环状 结构存在，故不会对测定结果产生干扰，试验结果表 明也吻合这个理论。但作为酮糖的果糖在相同的条件 下，不能形成稳定的环状结构，可以被ＫＩＯ 氧化【６Ｊ。 （２）样品在４１２ ｎｌＴｌ处的特征吸收峰跟甘露醇标准 品是重叠的，而果糖的峰则更宽。且通过高效液相色 谱表明样品中没有果糖，表明色谱法能够较准确测定 巴西虫草菌丝体粉中的甘露醇含量。 （３）７ＦＩ］用该方法测得的人工巴西虫草菌丝体粉中 甘露醇的含量为８．４５％。该方法也为其它虫草中甘露 醇的测定提供了一定的参考依据。 参考文献 ［１］ 侯遇成．女贞子化学成分的研究［Ｊ１＿中草药通讯，１９７６，（１）：ｌ４ ［２］ 孙成秀，廖记录，龙小慧，等．甘露醇的临床新用途［Ｊ１＿新医 学，１９９６，２７（１）：４１ ［３］ 方定坚，郑祥明，廖森泰，等．家蚕蛹人工培养巴西虫草研究 ［Ｊ１＿华南农业大学学报，１９９５，１６（１）：１０３．１０８ ［４］ 董钰明，刘晖，张军，等．比色法测定复方虫草颗粒巾甘露醇 的含量［Ｊ］．中草药，２００１，３２（８）：６９７—６９９ ［５］ 任健敏，白玲．定量分析化学［Ｍ］．南昌：江西高校出版社， ２００１，１２：１１—１４ ［６］ 雷帮星，高海波，税小波，等．人工发酵古尼虫草甘露醇的测 定［Ｊ］．菌物研究，２００４，２（１）：４０．－４４ ７ｑ
