Ｓｈｅｂｅｉ Ｙａｎｚｈｅｎｇ Ｙｕ ＧＭＰ◆设备验证与ＧＭＰＩ 洁净室日常沉降菌检测的探讨 崔菊霞赵志宏 （国药集团国瑞药业有限公司，安徽淮南２３２００１） 摘要：讨论洁净室沉降菌检测的影响因素，保证检查的结果能够真实地反映洁净室的微生物情况，掌握洁净室的 洁净状况。结论：在适当的设备保障下，对洁净室关键区域和最差区域进行检测，更能够掌握洁净室微生物状态，为药品 生产提供环境保障。 关键词：沉降菌；监测；关键区域；最差区域 Ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｓｅｔｔｌｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉａ Ｄａｉｌｙ Ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｉｎ Ｃｌｅａｎ Ｒｏｏｍ Ｃｕｉ ｊｕｘｉａ Ｚｈａｏ Ｚｈｉｈｏｎｇ （Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ Ｇｕｏｒｕｉ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．Ｌｔｄ．，Ｈｕａｉｎａｎ ２３２００１，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ ｄｉｓｃｕｓｓ ｔｈｅ ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｆａｃｔｏｒｓ ｏｆ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ Ｓｅｔｔｌｅｍｅｎｔ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｎ ｃｌｅａｎ ｒｏｏｍ．Ｉｔ ｉｓ ａｓｓｕｒａｎｃｅ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｃａｎ ｒｅｆｌｅｃｔ ｔｈｅ ｒｅａｌ ｓｉｔｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｃｒｏ—ｏｒｇａｎｉｓｍｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｌｅａｎ ｒｏｏｍ．Ｔｏ ｍａｓｔｅｒ ｃｌｅａｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｃｌｅａｎ ｒｏｏｍ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ：Ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ，Ｃｒｉｔｉｃａｌ ａｒｅａｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｗｏｒｓｔ ａｒｅａｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｌｅａｎ ｒｏｏｍ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ．Ｉｔ ｉｓ ｂｅｔｔｅｒ ｈｔａｔ Ｃａｎ ｂｅ ａｂｌｅ ｔｏ ｇｒａｓｐ ｔｈｅ ｓｔａｔｅ ｏｆｍｉｃｒｏ—ｏｒｇａｎｉｓｍｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｌｅａｎ ｒｏｏｍ，ｏｔ ｐｒｏｖｉｄｅ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｈｔｅ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｓｅｔｔｌｅｍｅｎｔ ｏｆｂａｃｔｅｒｉａ；ｍｏｎｉｔｏｒ；ｃｒｉｔｉｃａｌ ａｒｅａｓ；ｗｏｒｓｔ ａｒｅａｓ 随着我国药品ＧＭＰＳＵ度的发展，对药品生产中 第７９号）附录１中第十一条：应当对微生物数进行动 洁净室控制的要求越来越高，医药生产洁净室属于 态监测，评估无菌生产的微生物状况。监测方法有沉 一般生物洁净室，主要控制有生命的微粒兼尘埃微 降菌、定量空气浮游菌、表面取样法［２］。因为浮游菌 粒对产品的污染［１］。药厂应自觉按照ＧＭＰ的要求，对 监测需要浮游菌检测仪，并且每次检测前，还需将浮 洁净区域制定系统的环境监测方案，以有代表性的、 游菌检测仪的采样上盖做灭菌处理，较沉降菌检测 准确的数据评价环境的微生物分布情况，判定洁净 方法繁琐。因此，大多数药品生产厂家在日常监测洁 区环境是否处于良好的受控状态下运行。要做到这 净室空气中的微生物时，因实际操作比较方便的沉 些，正确的方法是关键性的。悬浮粒子的监测虽然可 降菌检测法使用的频率较高。 以评价空气的质量，但对无菌药品（无论是非最终灭 菌还是最终灭菌的产品）的生产来说，控制微生物的 ２沉降菌的检测 污染更加重要 本文主要讨论在对微生物日常检测 方法中的沉降菌检测法的影响因素，以及如何更好 国内药品企业沉降菌的日常检测按ＧＢ／Ｔ ｌ６２９４— 地保障沉降菌检测结果能够真实地反映洁净室的微 ２０１０《医药工业洁净室（区）沉降菌的检测方法》检 生物情况。 测，但洁净室的平均菌落数必须低于所选定的评定 标准。沉降菌检测除操作方便外，又具有费用低、对 １ 洁净室的微生物检测 空气环境破坏小，特别是在具有层流的区域，不会 干扰气流的方向，因而在洁净区的环境监测中应用 ２０１０年修订药品生产质量管理规范（卫生部令 广泛，。 机审信息２ｎｌ１芷笛 蝴蛸笛２１＂７甘甘 Ｉ设备验证与ＧＭＰ＠Ｓｈｅｂｅｉ Ｙａｎｚｈｅｎｇ ｙｕ ＧＭＰ ２．１ 空气洁净度的４个级别 ３．１．２生化培养箱 生化培养箱为气温过高地区的实验室培养细 ２０１０年修订药品生产质量管理规范（卫生部令 第７９号）附录１中把药品生产洁净室（区）的空气洁净 菌、霉菌及酵母菌的常用设备，该设备配有加温及制 度划分为４个级别 ，标准如表Ｉ所示。 表１ 生产洁净室（区）的空气洁净度的４个级别及标准 注：（Ｉ）表中各数值均为平均值； （２）单个沉降碟的暴露时间可以少于４ ｈ，同一位置可使用多个 沉降碟连续进行监测并累积计数 ； （３）按照ＧＢ／Ｔ １６２９４－－２０１０ 医药工业洁净室（区）沉降茵的检 测方法＊检测，规定静态培养皿暴露时间为３０ｍｉｎ以上，动态培养皿 暴露时间不大于４ ｈ。培养基规定使用大豆酪蛋白琼脂培养基或沙 氏培养基或用户认可并经验证了的培养基，但对培养皿的制备没 有明确规定。ｒ￣ＯＢ／Ｔ １６２９４－－１９９６（（医药工业洁净室（区）沉降菌的 检测方法》附录Ａ中规定的将培养皿置于１２１℃湿热灭菌２０ ｍｉｎ或 １８０℃干热灭菌２ ｈ可做参考。 ２．２ 日常监测中遇到的问题 在实际操作中，培养皿使用１２１℃湿热灭菌２０ｍｉｎ 的灭菌方法，会残留冷凝水，在摆放培养皿时，容易滴 入培养基上，使菌落生长连成片，难以计数，影响沉降 菌的测试结果的准确度。另外，摆放培养皿时，冷凝水 滴落在洁净室内，对环境也有一定的影响。因此，建议 培养皿灭菌最好用１ ８０℃干热灭菌２ ｈ。 ３培养箱的选用 ３．１培养箱的分类 ３．１．１隔水式电热培养箱 适用于微生物限度检查的一般细菌培养。由于 该设备仅有加温调控装置，故不适合于夏季气温过 高的地区使用。 ｃ ｒｈｌ葺Ｉ生ｌｌ拓 客・々ｎｌ１钲１’曰．笛１’捂 冷两套装置。 ３．１．３厌氧培养箱 适用于厌氧菌、微需氧菌的培养 。 ３．２培养箱的选择 对于我国大部分地区，夏季室内温度都低于３５℃， 因此培养箱易选择隔水式电热培养箱。有些生产厂 家将电热恒温干燥箱标为培养箱，不适合作培养箱 使用，只适合用于干燥物品使用。因为电热恒温干燥 箱的工作原理是底部装有多组电热丝，箱内底部装 有鼓风装置，这使箱内各部温度均匀，但同时，流动 的热气流也带走了培养基的水分，影响培养基的效 果，故不适合作为培养箱使用。 ４培养皿的摆放 ＧＢ／Ｔ １６２９４－－２０１０《医药工业洁净室（区）沉降 菌的检测方法》中规定采样点数目和采样点位置参 照ＧＢ／Ｔ １６２９２－－２０１０《医药工业洁净室（区）悬浮粒 子的检测方法》的采样点数目和采样点位置。 ４．１最少采样点数目 医药工业洁净室最少采样点的数目可用以下两 种方法中的一种确定。 方法一：公式法 』７、７ 式中 ⅣＩ＿最少采样点数目（四舍五入取整数）； Ａ——洁净室或洁净区的面积，ｍ２。 在单向流的情况下，面积Ａ可以用垂直于气流方 向的横截面积计算。 方法二：查表法 以查表的方法获得，采样点数目如表２所示。 在满足最少采样点数的同时，还宜满足最少培 养皿数。最少培养皿数如表３所示。 表２ 医药工业洁净室采样点数目 面积／ｍ 不同洁净度级别采样点数 ｌＯＯ １００００ ｌＯ０ ０００ 注：表中的面积，对于单向流洁净室，指的是送风口面积；对 于非单向流，指的是房间面积。 表３最少培养皿数 洁净度级别 所需西９Ｏ ｍｍ培养皿数（以沉降ｏ．５ ｈ计） １４ ２ ２ ４ ２采样点的布置 洁净室（区）采样点的布置力求均匀，避免采样 点在某区域过于集中，在某局部区域过于稀疏。可 按图１所示布置。 两点： ＾ ＾ Ｖ Ｖ 四点： 八点： 图１采样点的布置 采样点的位置：（１）工作区采样点的位置离地 Ｏ．８～１．５ ｍ（略高于工作面）；（２）可在关键设备或关 Ｓｈｅｂｅｉ Ｙａｎｚｈｅｎｇ Ｙｕ ＧＭＰ◆设备验证与ＧＭＰＩ 啪 Ｏ Ｋ 键工作活动范围处增加采样点Ｈ］。 ４．３实际监控中采样位置 对采样点的确定按照标准并结合实际以分析产 品与其接触或暴露的环境的程度为原则。对能够反 映产品的微生物污染水平有代表性的取样点则必须 取样。结合工厂实际确定合适的采样点有很多因素。 对在实际操作中的一些情况分析如下： （１）生产车间洁净室的形状很多是不规则的，不 能按照ＧＢ／Ｔ １６２９４－－７－２０１０《医药工业洁净室（区）沉 降菌的检测方法》中规定的位置布点，但可以按照 ＧＢ／Ｔ １６２９４－－２０１０中的布点原则“力求均匀，避免 采样点在某区域过于集中”布点。 （２）ＧＢ／Ｔ １６２９４－－２０１０《医药工业洁净室（区）沉 降菌的检测方法》中规定采样点的位置离地０．８～１．５ ｍ （略高于工作面），但在实际空间上有些摆放点没有 ０．８～１．５ ｍ的台面，因此培养皿只好摆在地面上，这 实际上是提高了监测标准。 （３）在回风口附近和气流路径不直接通过的房间 角落处，可加放培养皿，用于监测洁净室最差处的微 生物状况（可不作为评判洁净室的数据）。因为洁净室 操作人员的存在，在其所到之处，只要有微生物的存 在，都可能由其带入同级别的主要生产区域，因此，有 必要对最差区域进行微生物监测，从而掌握洁净室的 洁净度，保证所生产药品的质量。 ５培养基及培养的条件 应由选用的检测方法确定培养基的类型和培养 条件，无论何种类型和方法，都要具有广谱性。属于 全能型培养基的营养琼脂（ＮＡ）或大豆胰蛋白胨琼 脂（ＴＳＡ）适应于多数环境的微生物的分离生长。为 保证检测结果的准确性、真实性，还需对培养基进行 验证，验证在确定的时间和温度下，检测出真菌和细 菌的能力。 （下转第４２页） 机电信息２０１１年第３５期慧笛 １７篁日９７
