实验目的：学习使用水平式琼脂糖凝胶电泳进行DNA的提取。
实验原理：琼脂糖凝胶电泳是利用琼脂糖溶化再凝固后能形成带有 一定孔隙的固体基质的特性。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电 荷效应和分子筛效应。根据DNA分子量不同，采用外加电场使其分 开，用生物染料嵌入DNA分子后在紫外下显色。 1） 在电场的作用下及中性pH的缓冲条件下，带负电的核酸分子向 正极迁移。由于糖一一磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的 双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速度向正极 方向移动。 2） 在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应， 即DNA分子木身的大小和构型。具有不同的相对分子质量和不同构 型的DNA片段泳动速度不一样，可进行分离。 3） 生物染料在紫外光照射下能发射荧光，当D\\A样品在琼脂糖凝胶 中从负极向正极泳动时，生物染料从正极向负极移动，就会嵌入 DNA分子中形成络合物，使DNA在紫外光下发射很强的荧光。在生 物染料足够的情况下，荧光的强度正比于DNA的含量，这样就可以 检测DNA的浓度。
实验材料：微量移液器（2 U1和4叮），高压灭菌锅，电泳仪，琼脂 糖平板电泳装置，微波炉等。TAE电泳缓冲液，琼脂糖凝胶，PCR 扩增样品 实验步骤：
1胶液的制备：称取0.2g琼脂糖，置于200ml锥形瓶中,加入20ml TAE稀释缓冲液，放入微波炉里加热至琼脂糖全部熔化，沸腾。取 出摇匀。加热时应盖上封口膜，以减少水份蒸发。
2胶板的制备：将有机玻璃胶槽两端分别用透明胶带（宽约1cm）紧密 封住。将封好的胶槽置于水平支持物上，插上样品梳子。
3向冷却至50-60°C的琼脂糖胶液中小心地倒入胶槽内，使胶液形成 均匀的胶层。检查有无气泡。
4室温下约20分钟后，琼脂糖溶液完全凝固，小心垂直拔出梳子和 挡板，注意不要损伤梳底部的凝胶，清除碎胶。将凝胶放入电泳槽 中。 5加入电泳缓冲液（TAE）至电泳槽中，使液面高于胶面约lmm。
6加样：取2 H 1PCR样品与2U1缓冲液液混匀，用微量移液枪小心 加入样品槽中。小心操作，避免损坏凝胶或将样品槽底部凝胶刺 穿。 7电泳：加完样后，插上导线，打开电泳仪电源，按照需要调节电 压至160V,电泳开始，观察电流情况或电泳槽中负极的钳金丝是否 有气泡出现。
8当浪酚蓝条带移动到距凝胶前沿约lcm时，将电压（或电流）回 零，关闭电源，停止电泳。
9取出凝胶，在紫外观测仪上观察电泳结果。在波长为302nni紫外 灯下拍照观察。
实验结果：利用琼脂糖凝胶电泳实验做的图如下:
结果分析：通过跑胶结果可以看出DNA的分离效果都很好，无 断裂，浓度可观，点样位置为第一排第16个，即第一排最后一 个。与Mark的对照有相吻合的条带，可进行下一步的判断与分 析。 注意事项
1确保实验全程无污染
2缓冲系统：在没有离子存在时，电导率最小，DNA不迁移，或 迁移极慢，在高离子强度的缓冲液屮，电导很高并产热，可能
导致DNA变性，因此应注意缓冲液的使用是否正确。长时间高
压电泳时，常更新缓冲液或在两槽间进行缓冲液的循环是可取 的。
3凝胶的制备：凝胶屮所加缓冲液应与电泳槽屮的相一致，溶 解的凝胶应及时倒入板屮，避免倒入前凝固结块。倒入板屮的 凝胶应避免出现气泡，影响电泳结果。
4样品加入量：加样量的多少依据加样孔的大小及DNA屮片段 的数量和大小而定，过多的量会造成加样孔超载，从而导致拖 尾和弥散，对于较大的DNA此现象更明显。
5电泳系统的变化会影响DNA的迁移，加入DNA标准参照物进判定是必要的。
行
因篇幅问题不能全部显示，请点此查看更多更全内容