２００７年第４３港第２｛麓 Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ・遗恁潜秘 藏绵羊是中国绵羊３大系（即蒙古系、藏绵羊系和 哈萨克绵羊系）之一，主要分布在青藏高原及与其毗邻 心１０ ａｒｉｎ。上清液为红细胞溶血液，置于青霉素小瓶中 的川、滇、甘等高寒地区，是具有青藏高原特色的独特 品种资源。藏绵羊在青海省分布面广，由于各地海拔， 水热条件等因素的差异，逐渐形成了具有不同生态类 型的群体。依据其生态环境，结合其外貌或生产性能、 经济特点，可将青海藏绵羊分为３个生态类型，即高原 型、山谷型和欧拉型。高原型藏绵羊的特点是体格大， 毛质好，产毛量高，这一类型的藏绵羊所产羊毛又称之 为“西宁毛”；山谷型藏绵羊个体较小，毛质差，产毛量 编号，一２Ｏ℃冰箱中保存，供ＨＢ电泳分析用。 １．３ ＨＢ电泳和分型 采用聚丙烯酰胺凝胶电泳 （ＰＡＧＥ）法进行ＨＢ电泳分析。电泳分离胶浓度为７％， 缓冲液为ｐＨ８．９的Ｔｒｉｓ—ＨＣ１系统；浓缩胶浓度为３％， 缓冲液为ｐＨ６．７的Ｔｒｉｓ—ＨＣ１系统。电极缓冲液为 ｐＨ９．０的硼酸钠溶液。按照铃木正三等［１ｌ和张才骏等 的标准判型。 １．４数据分析 １．４．１基因频率和基因型频率 基因型频率＝该基因型个数／被测量个体总数。 低；而欧拉型藏绵羊早期发育快，体大肢高，背腰宽平， 后躯较丰满，产肉性能好，但是产毛量低。鉴于此，本研 究通过对青海省３个生态类型藏绵羊血红蛋白多态性 进行研究，以期为今后开展藏绵羊的起源演化和分类、 基因定位、基因连锁分析以及分子标记辅助选择等研 究提供必要的指导、参考和借鉴。 １材料与方法 基因频率＝［２（ｉｉ）＋（ｉｊ ）＋（ｉｊ ）＋……＋（Ｕ ）］／２Ｎ；ｉ表示纯合 复等位基因， 表示与ｉ共显性的第１到第ｎ个等 位基因，Ⅳ为样本个数。 １．４．２基因型观察值与理论值之间进行适合性ｘ 检验。 ２结果 ２．１ ＨＢ电泳图谱见图１。 １．１试验动物成年青海省藏绵羊２１６只，其中河南 县欧拉型藏绵羊７７只，玛沁县高原型藏绵羊６９只，玉 树县山谷型藏绵羊７Ｏ只。 １．２血样的采集和处理以肝素钠为抗凝剂，从每只 ＋ 图１ ３个生态类型藏绵羊ｌｉＢ部分电泳图谱 试验羊的颈静脉采集血样５ｍＬ带回实验室，３０００ｒ／ａｒｉｎ 离心１０ ｍｉｎ后，弃去血浆。下部沉淀用等体积的生理盐水 洗涤３次，至上清液没有血色为止。最后１次洗涤后，加 ２＿２基因型频率和基因频率３个生态类型藏绵羊 ＨＢ的基因型频率和基因频率见表１。从表１可以看 出，试验所测的３个生态类型藏绵羊的ＨＢ位点均存 在多态性。欧拉型藏绵羊和山谷型藏绵羊ＨＢ位点受 入等体积的蒸馏水，混匀，待红细胞溶解后，３ ０００ｒ／ａｉｒｎ离 表１ ３个生态类型藏绵羊ｌｉｂ位点的基因型频率和基因频率 固耄绶识是。 维普资讯 http://www.cqvip.com 遗传罱秘・Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ ２００７年鬃４３卷第２１期 ＨＢ 和ＨＢ 等位基因控制，出现ＨＢＡＡ、ＨＢＢＢ和 位点有ＨＢＡＡ、ＨＢＢＢ和ＨＢＡＢ ３种基因型，未发现 ＨＢＡＢ ３种基因型；而高原型藏绵羊ＨＢ位点受ＨＢ 、 ＨＢ 和ＨＢ ３个等位基因控制，出现ＨＢＡＡ、ＨＢＢＢ、 ＨＢＡＢ和ＨＢＡＣ ４种基因型。这３个生态类型藏绵羊 ＨＢＡＣ基因型，而高原型藏绵羊ＨＢ位点有ＨＢＡＡ、 ＨＢＢＢ、ＨＢＡＢ和ＨＢＡＣ ４种基因型。研究表明，藏绵羊 ＨＢ位点ＨＢ 基因频率很低，不到１％，本实验在欧拉 型和山谷型藏绵羊未检测出ＨＢＣ型的存在，也许和采 样的样本数少有关。至于藏绵羊ＨＢ位点ＨＢＣ型出现 是由于贫血或者药物导致，还是生活在高海拔地区的 ＨＢ位点，均以ＨＢＡＡ和ＨＢ 分别为优势基因型和优 势等位基因。与此同时，可以看出，ＨＢ 等位基因的基 因频率按欧拉型藏绵羊、山谷型藏绵羊和高原型藏绵 羊的顺序依次升高。 ２＿３ ３个生态类型藏绵羊ＨＢ位点基因型分布的 Ｈａｒｄｙ—Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡检测 ３个生态类型藏绵羊ＨＢ 位点基因型观察值和理论值及其ｘ 值见表２。由表２ 可看出，３个生态类型藏绵羊的ｘ 分别为２．２７、０．７２６４ 和０．１５８８，而当ｄｆ＝ｌ时，ｘ ０５２－３．８４，３个生态类型藏绵 羊的ｘ 值均小于ｘ ０５２的值，故３个生态类型藏绵羊基 因型的观察值和理论值间无显著差异（Ｐ＞０．０５），表明 ３个生态类型藏绵羊ＨＢ位点的基因型处于Ｈａｒｄｙ— Ｗｅｉｎｂｅｒｇ遗传平衡状态。 ３讨论 ３．１ ３个生态类型藏绵羊ＨＢ位点的多态性通常， 绵羊ＨＢ有ＨＢＡＡ、ＨＢＡＢ和ＨＢＢＢ ３种常见的基因 型，不常见的血红蛋白型有ＨＢＣ型、ＨＢＤ型和ＨＢＥ 型等。此外，在初生羔羊中也发现有ＦＦ基因型。对藏绵 羊ＨＢ位点的研究表明，藏绵羊ＨＢ位点除了３种常 见的基因型外，还有ＨＢＡＣ型出现 。疾病因素引起绵 羊群体基因频率发生改变的报道始于１９６３年，Ｂｌｕｎｔ 等［５１首先发现在Ａ型绵羊中，由于放血使得绵羊患贫 血病后就会导致新型血红蛋白ＨＢＣ的出现。Ｈｕｉｓｍａｎ 等同和Ｂｅａｌｅ等［７１分别发现ＨＢＣ这种新型血红蛋白是 一种和ＨＢＡ有１２种氨基酸不同的 链变异体，而且 这种类型的血红蛋白即ＨＢＣ仅限于Ａ、ＡＢ型绵羊中 出现。一些化学药品如苯肼、硒甲硫氨酸可以引起绵羊 溶血性贫血病的产生，因而在这些患病个体中也可诱 导产生ＨＢｃ基因。此外，其他一些疾病如溶血性黄疸 病也可引起绵羊血液蛋白多态性发生变化，例如 Ｏｓｔｅｒｈｏｆｆ在１９７１年就曾发现在患溶血性黄疸病的Ａ 型、ＡＢ型绵羊中，在其患病前没有ＨＢＣ存在，但在患病 后，随着症状的恶化，ＨＢＡ型变成ＨＢＣ型，病情恢复时 ＨＢＣ消失而ＨＢＡ重新出现。也有研究推测ＨＢＣ型的 出现是高原绵羊对低氧环境的一种适应性表现【３Ｊ。而在 本实验中，被测的青海３个生态类型藏绵羊ＨＢ经 ＰＡＧＥ分离后，发现欧拉型藏绵羊和山谷型藏绵羊ＨＢ ｏ中固耄牧絮恙 藏绵羊对低氧环境的一种适应性表现的问题有待进一 步深入的研究。 ３个类型藏绵羊ＨＢ位点基因型经ｘ 检验，表明 其处于Ｈａｒｄｙ—Ｗｅｉｎｂｅｒｇ遗传平衡状态（Ｐ＞０．０５）。这 可能是由于青海３个类型藏绵羊是青藏高原上的土著 羊种之一，采样地区３个生态类型藏绵羊没有进行过 有计划有目的的选育工作，长期自然交配、自然繁殖， 使得其基因型在群体中的分布达到了遗传平衡。 ３．２ ３个生态类型藏绵羊ＨＢ多态性与海拔高度之间 的关系 Ｅｖａｎｓ等【８ｌ在英国绵羊中发现ＨＢ 基因频率 在高山品种中比低地品种高。Ｔｅｍｐｌｅｔｏｎ等 发现生活 在海拔高度为８０ ｉｎ和２５０～２ ５００ ｉｎ的羊之间，ＨＢ 基因 频率有显著差异。张才骏等 生活在海拔２ ０００、３ ０００ 和４ ０００ｉｎ的藏绵羊的ＨＢ型进行研究，发现ＨＢ 基因 频率也随着海拔高度的升高而增加（由０．２９０３至 ０．９３２４），ＨＢ 基因频率则随着海拔高度增高而下降 （由０．７０９７减少到０．０６７６）。在本实验中，欧拉型藏绵 羊、山谷型藏绵羊和高原型藏绵羊分别生活在海拔为 ３ ５００、３ ７００和４ ２００ ｉｎ地区，其ＨＢ位点ＨＢ 基因频 率分别为０．７９９、０．９００和０．９０６，ＨＢ 基因频率随着海 拔的升高而增加，支持了前者的研究结果。 Ｈｕｉｓｍａｎ等㈣和Ｋｅｒｎｏｈａｎ［“］对氧亲和力的测定实 验中，发现ＨＢＡ对氧的亲和力比ＨＢＢ高，且不管是用 全血还是用血红蛋白溶液进行测定，ＨＢＡ的氧解离曲 线皆比ＨＢＢ向左偏离，说明绵羊的ＨＢＡ对高海拔具 有适应意义。Ｄａｗｓｏｎ等［１２］低氧耐力实验也证明具有 ＨＢＡ的绵羊对缺氧的耐力比具有ＨＢＢ的绵羊大。据统 计，英国山地绵羊以ＨＢ 占优势，低地绵羊以ＨＢ 为显 著，前者对高海拔和低营养的饲料有较好的适应 。由 周虞灿等［ ４１对藏绵羊ＨＢ的氧解离曲线研究可知，藏绵 羊的ＨＢＡ的曲线比ＨＢＢ的向左偏离，表明ＨＢＡ的氧 亲和力比ＨＢＢ的强。而在本实验中，３个生态类型藏 绵羊ＨＢ位点都以ＨＢＡＡ基因型为优势基因型，ＨＢ 基因为优势等位基因，这与在高原地区ＨＢ 基因有选 择优越性的观点相符。３个生态类型藏绵羊ＨＢ 等位 维普资讯 http://www.cqvip.com
２００７年第４３卷第２｛期 Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ・遗 黼秘 基因为优势等位基因，是对高原缺氧环境的适应。今后 在青藏高原藏绵羊的选育以及新品种的培育方面，需 要考虑提高种群的ＨＢ 等位基因频率。 参考文献； 『１］铃木正三著．程光潮，韩建林，杨华林，等译．比较血型学ｆＭ］．北 京：中国科学技术出版社，１９９１．２１４—２２３． Ｎａｔｕｒｅ，１９６６，２０９（２８）：１０９９—１ １０２． ［８］ Ｅｖａｎｓ Ｊ Ｖ，Ｈａｒｒｉｓ Ｈ，Ｗａｒｒｆｎ Ｆ Ｌ．Ｔｈｅ ｄｉｓｔｉｒｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｈａｅｍｏｇｌｏｂｉｎ ｎｄ ａｂｌｏｏｄ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｔｙｐｅｓ ｉｎ Ｂｒｉｔｉｓｈ ｂｒｅｅｄｓ ｏｆ ｓｈｅｅｐ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ Ｒ Ｓｏｃ Ｌｏｎｄ Ｂ Ｂｉｏｌ Ｓｃｉ．１９５８．１４９（９３５）：２４９—２６２． ［９］Ｔｅｍｐｌｅｔｏｎ Ｊ Ｗ，Ｐｒｉｃｅ Ｄ，Ｂｏｇａｒｔ Ｒ．Ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｏｆ ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ ｔｙｐｅｓ ｉｎ ｉｆｖｅ ｂｒｅｅｄｓ ｏｆ ｓｈｅｅｐ［Ｊ］．Ｊ Ｈｅｒｅｄ，１９７２，６３（４）：２０２—２０４． ［１０］Ｈｕｉｓｍａｎ Ｔ Ｈ Ｊ，Ｖｌｉｅｔ Ｇ ｖａｎ，Ｓｅｂｅｎｓ Ｔ．Ｓｈｅｅｐ ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎｓ［Ｊ１． Ｎａｔｕｒｅ，１９５８，１８２：１７１—１７４． ［２］张才骏，张武学，张更利，等．青海省绵羊血红蛋白多态性的研 究ｆＪ１＿青海畜牧兽医学院学报，１９９３，１Ｏ（２）：８－１４． ［３］张才骏，李清军，冯植林．青海省门源藏羊血红蛋白多态性的研 究 ．中国养羊，１９８８，（３）：２１—２２． ［ＩＩ］Ｋｅｒｎｏｈａｎ Ｊ Ｃ．Ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｗｏ ｓｈｅｅｐ ｈａｅｍｏｇｌｏｂｉｎｓ ｗｉｔｈ ｏｘｙｇｅｎ ａｎｄ ｃａｒｂｏｎ ｍｏｎｏｘｉｄｅ『Ｊ１．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ，１９６１，１５５：５８０— ５８８． ［４］高丽英．天峻县藏羊血红蛋白多态性的研究『Ｊ１．青海畜牧兽医 杂志，２００１，３１（１）：１０—１１． ［５］Ｂｌｕｎｔ Ｍ Ｈ，Ｅｖａｎｓ Ｊ Ｖ．Ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｉｎ ｔｈｅ ｅｒｙｔｈｒｏｅｙｔｅｓ ａｎｄ ｉｎ ｈａｅｍｏｇｌｏｂｉｎ ｔｙｐｅ ｉｎ Ｍｅｒｉｎｏ ｓｈｅｅｐ ｕｎｄｅｒ ａ ［１２】Ｄａｗｓｏｎ Ｔ Ｊ，Ｅｖａｎｓ Ｊ Ｖ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｈｙｐｏｘｉａ ｏｎ ｏｘｙｇｅｎ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｉｎ ｓｈｅｅｐ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ ｔｙｐｅｓ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ，１９６６，２１０： １Ｏ２１—１０２５． ［１３］Ｍａｎｗｅｌｌ Ｃ，Ｂａｋｅｒ Ｃ Ｍ Ａ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｔｈｅ ｏｒｉｇｉｎ ｏｆ ｓｅｖｅｒｅ ａｎａｅｍｉｃ ｓｔｒｅｓｓ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，１９６３，２００：１２１５－１２１６． 『６１ Ｈｕｉｓｍａｎ Ｔ Ｈ Ｊ，Ｄａｓｈｅｒ Ｇ Ａ，Ｍｏｒｅｔｚ Ｗ Ｈ，ｅｔ ．Ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｓｐｅｃｉｅｓ：ｈｅｔｅｒｏｓｉｓ，ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ａｎｄ ａｎｉｍａｌ ｂｒｅｅｄｉｎｇ［Ｍ］． Ｌｏｎｄｏｎ：Ｓｉｄｇｗｉｃｋ ａｎｄ Ｊａｃｋｓｏｎ．１９７０．７６—７９． ｈａｅｍｏｇｌｏｂｉｎ ｔｙｐｅｓ ｉｎ Ｂａｒｂａｒｙ ｓｈｅｅｐ （Ａｍｍｏｔｒａｇｕｓ ｌｅｒｖｉａ）［Ｊ１ ＿Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ，１９６８，１０７：７４５—７５１． ［１４］周虞灿，刘国富．藏绵羊血红蛋白的组成及其对氧亲和力的研 究［Ｊ１＿高原生物学集刊，１９８５，（４）：９９—１０４． ［７］Ｂｅａｌｅ Ｄ，Ｌｅｈｍａｎｎ Ｈ，Ａｌａｎ Ｄｒｕｒｙ，ｅｔ ａ１．Ｈａｅｍｏｇｌｏｂｉｎｓ ｏｆ ｓｈｅｅｐ［Ｊ］． Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｏｆ Ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ ｉｎ Ｔｈｒｅｅ Ｅｃｏｔｙｐｅｓ Ｔｉｂｅｔａｎ Ｓｈｅｅｐ ｉｎ Ｑｉｎｇｈａｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ ＸＩＮ Ｊｉｎ－ｗｅｉ ，ＭＡＯ Ｘｕｅ—ｒｏｎｇ ，ＹＵ Ｚｈｏｎｇ－ｘｉａｎｇ ，ＬＥＩ Ｌｉａｎｇ－ｙｕ ，ＹＡＮ Ｍｉｎｇ－ｙｉ ｆ１．Ｑｉｎｇｈａｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｑｉｎｈａｉ Ｘｉｎｉｎｇ ８１０００３，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｑｉｎｇｈａｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ ａｎｄ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｑｉｎｇｈａｉ Ｘｉｎｉｎｇ ８ １００１６，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｏｆ ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ ｏｆ ２ １６ ｔｈｒｅｅ ｅｃｏｔｙｐｅｓ Ｔｉｂｅｔａｎ ｓｈｅｅｐ ｉｎ Ｑｉｎｇｈａｉ ｐｒｏｖｉｎｃｅ ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃａｌｌｙ ｂｙ ｍｅａｎｓ ｏｆ ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｓｉｓ（ＰＡＧＥ）．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｗｅｒｅ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ：Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｔｈｒｅｅ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ＨＢＡＡ。ＨＢＢＢ ａｎｄ ＨＢＡＢ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｂｙ ＨＢ ａｎｄ ＨＢ ａｌｌｅｌｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｌｏｃｕｓ ｏｆ ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ ｉｎ Ｏｕｒａ Ｔｉｂｅｔａｎ ｓｈｅｅｐ ａｎｄ Ｍｏｕｎｔａｊｎ—Ｖａｌｌｅｙ Ｔｉｂｅｔａｎ ｓｈｅｅｐ，ａｎｄ ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｆｏｕｒ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ＨＢＡＡ，ＨＢＡＢ，ＨＢＢＢ ａｎｄ ＨＢＡＣ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｂｙ ＨＢ ．ＨＢ ａｎｄ ＨＢ ａｌｌｅｌｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｌｏｃｕｓ ｏｆ ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ ｉｎ Ｐｌａｔｅａｕ Ｔｉｂｅｔａｎ ｓｈｅｅｐ．Ｔｈｅ ＨＢ ｗａｓ ｔｈｅ ｐｒｅｐｏｎｄｅｒａｎｔ ａｌｌｅｌｅ，ｔｈｅ ＨＢＡＡ ｗａｓ ｔｈｅ ｐｒｅｐｏｎｄｅｒａｎｔ ｇｅｎｏｔｙｐｅ，ｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓ ｏｆ ＨＢＡＡ ｗｅｒｅ ０．６１０４，０．８１４３ ａｎｄ ０．８ １ １６ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ｉｎ Ｏｕｒａ Ｔｉｂｅｔａｎ ｓｈｅｅｐ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ—Ｖａｌｌｅｙ Ｔｉｂｅｔａｎ ｓｈｅｅｐ ａｎｄ Ｐｌａｔｅａｕ Ｔｉｂｅｔａｎ ｓｈｅｅｐ．ａｎｄ￣ｅｑｕｅｎ— ｃｉｅｓ ｏｆ ＨＢ ｗｅｒｅ ０．７９９０．０．９０００ ａｎｄ ０．９０６０ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ｔｈｅ ｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓ ｏｆ ＨＢ ｗｅｒｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ａｔｔｉｔｕｄｅ ｒａｉｓｉｎｇ．Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ Ｘ ｔｅｓｔ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ＨＢ ｉｎ ｔｈｒｅｅ ｅｃｏｔｙｐｅｓ Ｔｉｂｅｔａｎ ｓｈｅｅｐ ｆｉｔｔｅｄ Ｈａｒｄｙ—Ｗｅｉｎｂｅｒｇ ｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ ＞０．０５）． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ；ｅｃｏｔｙｐｅ；ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ；Ｔｉｂｅｔａｎ ｓｈｅｅｐ 鸯凝系惫●》
因篇幅问题不能全部显示，请点此查看更多更全内容